Основными путями заражения вирусом гепатита С (ВГС) признаны совместное использование игл и шприцев при внутривенном введение наркотиков, переливание зараженной крови и ее продуктов, оперативные вмешательства и косметические процедуры, связанные с нарушением целостности кожи, например, нанесение татуировок. Значимость полового пути передачи ВГС существенно меньше, однако о его реализации свидетельствуют, в частности, особенности внутрисемейного инфицирования: распространение антител к ВГС (анти-ВГС) среди родителей и детей инфицированных лиц примерно в 4 раза ниже, чем среди супругов (0,87, 0,79 и 3,39% соответственно) [1]. Повышение распространения анти-ВГС в среде гомосексуалистов и женщин, занятых в сфере сексуальных услуг [2], а также среди пациентов дерматовенерологических лечебных учреждений России и других стран, например, США [3, 4], возможно, объясняется не только передачей вируса половым путем, но и наличием у этих контингентов дополнительных факторов высокого риска заражения (прием наркотиков и др.) [4]. Необходимость обследования пациентов с инфекциями, передаваемыми половым путем, на маркеры вирусного гепатита С (ГС) приобретает особое значение при наличии ВИЧ-инфекции и гепатита В, вследствие наличия ассоциаций между этими инфекциями и влияния микстинфицирования на клиническую картину, лечение и результат лабораторного исследования [5, 6].

Первым этапом лабораторной диагностики вирусного ГС является определение анти-ВГС в сыворотке крови пациента методом иммуноферментного анализа (ИФА). Кроме позитивного и негативного результата ИФА, в иммуноблотах (ИБ) и иммуноферментных тест-системах планшетного формата (плИФТС) с раздельным выявлением спектра антител возможен неопределенный результат исследования. В основном неопределенный результат характерен для образцов сыворотки крови с пограничной позитивной оптической плотностью (ОП) в скрининговых плИФТС [7]. Для решения вопроса о причине неопределенного результата необходимы дополнительные лабораторные исследования, в первую очередь поиск специфических (РНК ВГС) и неспецифических серологических маркеров ГС. Известно, что сыворотка крови людей, инфицированных ВГС, характеризуется определенными изменениями биохимического профиля, в частности, увеличением концентрации альфа-фетопротеина (АФП) [8]. В отношении образцов с неопределенным результатом исследования подобные сведения в литературе единичны.

Цель работы — изучение изменения концентрации АФП в сыворотке крови молодых и пожилых людей с неопределенными результатами исследования анти-ВГС в подтверждающих плИФТС с раздельным определением антител к антигенам ВГС.

Исследованы 65 образцов сыворотки крови мужчин моложе 60 лет и 82 образца сыворотки крови людей старше 60 лет, направленных в клинико-иммунологическую лабораторию по диагностике ВИЧ-инфекции Кожно-венерологического диспансера №1 Департамента здравоохранения Москвы, в которой проводится скрининг на маркеры вирусных гепатитов В и С.

Определение анти-ВГС проводилось по двухэтапной схеме [9] с помощью российских лицензированных плИФТС: ВекторБест-анти-ВГС (ЗАО «Вектор-Бест», Россия) с комплексной сорбцией антигенов ВГС при первичном скрининге и двух плИФТС с раздельной сорбцией структурного (Core) и неструктурных антигенов (NS) ВГС при подтверждении позитивных результатов (РекомбиБест анти-ВГС-подтверждающий тест, ЗАО «Вектор-Бест», и ДС-ИФА-Анти-HCV-спектр GM, ООО НПО «Диагностические системы», Россия). Позитивные образцы с низкой ОП в скрининге (менее 3) и в обязательном подтверждении (КП Анти-Core менее 2, КП Анти-NS менее 6), согласно ранее разработанному алгоритму [10] были дополнительно исследованы в двух плИФТС с раздельной сорбцией четырех антигенов ВГС (Core, NS3, NS4 и NS5): ДС- ИФА-Анти-HCV-спектр GM и ВекторБест-анти-ВГС-подтверждающий тест, а также в ИБ RecomBlot HCV IgG 2.0 («Mikrogen», Германия) и в линейном иммуноферментном анализе (ЛИА) INNO-LIA HCV Ab III update («Innogenetics», Бельгия). Для определения концентрации АФП использовали набор реагентов АФП–ИФА–Бест–400–стрип (ЗАО «Вектор-Бест»).

Расчеты по определению критической ОП (ОП_кр) проводили в автоматическом режиме во время регистрации результатов анализа. Значение коэффициента позитивности (КП) рассчитывали по отношению величины ОП образца к ОП_кр. Статистическую обработку результатов проводили с помощью компьютерных программ Excel и Биостатистика [11] для определения достоверности различий групп с помощью непараметрического критерия Манна—Уитни.

В результате исследования образцов сыворотки крови молодых мужчин (возраст 17—60 лет, средний возраст 33,6±12,9 года) были выделены следующие группы:

1) образцы (n=18) без анти-ВГС на первом этапе скрининга (Анти-ВГС–);

2) образцы (n=20) с высоким КП (более 6) как на этапе первичного скрининга, так и на этапе обязательного подтверждения (Анти-ВГС);

3) образцы (n=7) с низким КП в скрининге (менее 3) и в обязательном подтверждении, результат исследования которых в плИФТС с расширенным спектром определяемых антител был неопределенным; в дополнительных исследованиях в ИБ или в ЛИА — неопределенным или позитивным (Анти-ВГС:ИБ_неопр/⁺);

4) образцы (n=19) с неопределенным результатом исследования в ИФТС; признанные анти-ВГС-отрицательными (Анти-ВГС:ИБ-) в дополнительных исследованиях в ИБ или в ЛИА данные образцы.

По составу определяемых в ИФТС антител между группами наблюдались следующие различия. Из 20 образцов группы Анти-ВГС⁺ в 18 образцах обнаружены анти-Core и анти-NS ВГС с КП более 6, в 2 образцах — только анти-Core ВГС с КП более 4.

В 7 образцах Анти-ВГС:ИБ_неопр/⁺ выявлялись антитела только к одному антигену ВГС; в 3 образцах это были анти-Core, в 3 других — анти-NS3; в одном образце — анти-NS4. В образцах Анти-ВГС:ИБ-, как правило, в ИФТС выявлялись антитела только к одному антигену ВГС; в 17 из 19 образцов это были анти-NS4 (89%), в одном — анти-NS5 (5%). В одном образце Анти-ВГС:ИБ- были обнаружены антитела к NS4 и к NS5 антигенам с ОП в так называемой серой зоне (ниже ОП критической на 15%).

Данные о концентрации АФП в группах сыворотки крови молодых мужчин с разными результатамм исследования анти-ВГС представлены в таблице.

Обнаружено, что по концентрации АФП различаются следующие группы. Во-первых, в образцах Анти-ВГС⁺ концентрация АФП выше, чем в образцах Анти-ВГС– (p=0,036). Во-вторых, в образцах с неопределенным результатом исследования в плИФТС и неотрицательным (положительным и неопределенным) результатом исследования в ИБ (Анти-ВГС:ИБ_неопр/^низк+) концентрация АФП была также выше, чем в образцах Анти-ВГС– (р=0,008). Между остальными группами образцов, полученных от молодых мужчин, различий по концентрации АФП не обнаружено.

При исследовании анти-ВГС в образцах сыворотки крови людей старше 60 лет (от 60 до 93 лет, средний возраст 74±6,5 года) были выделены группы, аналогичные группам образцов сыворотки крови молодых мужчин: Анти-ВГС- (n=16), Анти-ВГС⁺ (n=30), Анти-ВГС:ИБ_неопр/⁺ (n=11), Анти-ВГС:ИБ- (n=25). По спектру выявляемых антител между группами пожилых пациентов обнаружены следующие различия. В 7 из 11 образцов группы Анти-ВГС:ИБ_неопр/⁺ в плИФТС с расширенным спектром определения анти-ВГС выявлялись с низким КП антитела только к одному антигену, в 4 образцах — антитела к 2-3 антигенам ВГС. В группе Анти-ВГС:ИБ- результат исследования как анти-Core, так и анти-NS, в подтверждающих ИФТС разных производителей был противоречивым (позитивным и негативным). В группе Анти-ВГС:ИБ- в плИФТС с раздельным определением анти-Core, анти-NS3, анти-NS4 и анти-NS5 в 16 из 25 образцов (64%) определялись антитела к трем антигенам ВГС. Концентрация АФП в группах с разными результатами тестирования анти-ВГС была следующей: в группе Анти-ВГС- — 8,24 МЕ/мл (3,74—29,71 МЕ/мл), в группе Анти-ВГС⁺ — 14,73 МЕ/мл (3,8—111,82 МЕ/мл), в группе Анти-ВГС:ИБ_неопр/⁺ — 7,05 МЕ/мл (4,06—24,06 МЕ/мл), в группе Анти-ВГС:ИБ- — 11,19 МЕ/мл (2,94—83,16 МЕ/мл). В двух последних группах концентрация АФП была ниже, чем в группе Анти-ВГС⁺ (p=0,024, p=0,045). Группа Анти-ВГС- по концентрации АФП не отличалась ни от одной из исследованных групп.

При сравнении концентрации АФП в разновозрастных группах обнаружено, что концентрация АФП в образцах сыворотки крови без анти-ВГС (Анти-ВГС–) пожилых людей выше, чем в образцах сыворотки крови без анти-ВГС людей моложе 60 лет (p<0,004). Различий по концентрации АФП между другими аналогичными группами молодых и пожилых людей не обнаружено.

Ранее было показано, что среди пациентов кожно-венерологических диспансеров г. Москвы анти-ВГС распространены достаточно широко (в 2004 г. обнаруживались у 8,18% обследованных) [3]. Примерно у 2,5% образцов, позитивных в первичном скрининге, при исследовании в подтверждающих тест-системах результат исследования оказывается неопределенным [10]. Неопределенный результат в плИФТС и в ИБ может быть как следствием неспецифической реакции (т.е. ложно-позитивным), так и свидетельствовать о наличии небольшого количества антител в раннем периоде инфицирования или при выздоровлении [7]. В большинстве случаев причина неопределенного результата остается неясной, а проведение во всех случаях дополнительного исследования в ИБ является чрезвычайно дорогостоящим. В представленной работе проведена оценка концентрации АФП, известного биохимического маркера повреждения печени, в образцах сыворотки крови с неопределенным результатом исследования анти-ВГС в плИФТС с широким спектром выявляемых антител к ВГС в качестве значительно более дешевых аналогов ИБ. Согласно полученным нами результатам, в образцах с неопределенными в плИФТС и неотрицательными в ИБ результатами (как правило, связанными с обнаружением анти-NS3 или анти-Core), повышение концентрации АФП свидетельствует о наличии некоторого повреждения печени. В группе образцов молодых мужчин с неопределенными результатами, обусловленными выявлением только анти-NS4 в плИФТС, но отрицательными в ИБ, концентрация АФП не отличалась от нормы. По результатам длительного наблюдения за донорами крови с неопределенным результатом исследования в ИБ RIBA-3 был сделан вывод о том, что реактивность к С100, который является фрагментом NS4 протеина ВГС, — менее значимое свидетельство инфекции, чем реактивность к С33с (фрагменту NS3 протеина) или С22 (фрагменту Core протеина), и в большинстве случаев может быть расценена как неспецифическая реакция [12]. Вероятно, неспецифической реакцией объясняются результаты, полученные в плИФТС 1-го поколения, основанных на использовании С100 как единственного сорбента анти-ВГС: распространение анти-ВГС в среде гомосексуалов составляло 6,9% (в среде гетеросексуалов 1%, p<0,0001), а при использовании RIBA-2 — 2,2% и 0,4% соответственно (p<0,02) [5]. Таким образом, полученные нами данные о концентрации АФП в сыворотке крови молодых мужчин согласуются с выводом M. Rios и соавт. [13] об эпидемиологической близости группы с неопределенными результатами тестирования анти-ВГС к группе с анти-ВГС-позитивными результатами, но только в отношении группы с неопределенными результатами по наличию анти-NS3 или анти-Core, но не анти-NS4 ВГС. При инфицировании ВГС в возрасте старше 50 лет цирроз печени формируется в 2 раза быстрее, чем у лиц, инфицированных до 50 лет, а осложнения ВГС-инфекции выявляются у пожилых в основном в далеко зашедших формах вследствие того, что длительная бессимптомная персистенция вируса и стертые клинические проявления заболевания приводят к позднему обращению больных к врачу [14]. В то же время для пожилых пациентов в большей мере, чем для молодых мужчин, характерны ложно-позитивные серологические реакции, что в нашем исследовании проявилось в выявлении в плИФТС антител к нескольким антигенам ВГС при отсутствии подтверждения наличие анти-ВГС в ИБ. В наших исследованиях в группе анти-ВГС-негативных образцов сыворотки крови пожилых людей концентрация АФП была выше, чем в аналогичной группе образцов сыворотки крови молодых мужчин, по-видимому, вследствие разнообразных приобретенных заболеваний и наличия других, кроме ВГС, гепатотоксических факторов у пожилых пациентов. Таким образом, в лабораторной диагностике ГС необходима комплексная оценка серологических и биохимических маркеров ВГС-инфекции с учетом возрастной категории пациента.