5. Реагенты. Важный компонент системы «автоматизированный анализ крови» - реагенты. Часто лаборатории, купив анализатор, сталкиваются с необходимостью нести довольно ощутимые постоянные затраты на реагенты. Количество разных реагентов, используемых анализатором, существенно влияет на себестоимость и качество исследований.

Каждый конкретный тип гематологического анализатора рассчитан на свою собственную реагентную систему, однако между ними есть много общего.

Основными составляющими комплектов реагентов для гематологических анализаторов являются:

- изотонический разбавитель;

- лизирующий раствор;

- промывающий раствор (после каждой пробы);

- промывающий раствор (для качественной очистки системы);

- очищающий раствор (для экстренной очистки датчика и/или сервисных работ).

В зависимости от конкретной конструкции анализатора в базовый комплект может входить лишь часть указанных реагентов.

Изотонический разбавитель - это буферный раствор с фиксированными параметрами рН, электропроводности и осмолярности. Слово «изотонический» указывает только на одно и не самое важное свойство реагента - поддержание требуемого осмотического давления с целью обеспечения постоянства объема клеток крови. Дело в том, что эритроциты принимают тот объем, который им диктует осмолярность раствора. При увеличении осмолярности, в течение 3-5 с эритроциты сжимаются до некоторого равновесного объема. Если осмолярность раствора уменьшается, объем эритроцитов, соответственно, увеличивается. Таким образом, средний объем эритроцитов (MCV) увязывается с осмолярностью изотонического разбавителя. Использование изотонического разбавителя, не соответствующего марке анализатора, может привести к ложному завышению/занижению MCV.

Стабилизирующие добавки в изотоническом разбавителе должны обеспечивать сохранность форменных элементов крови в первом разведении в течение достаточно длительного времени. Присутствие в растворе антикоагулянта должно эффективно предотвращать образование фибриновых сгустков и агрегацию тромбоцитов.

Очень важными компонентами гематологических реагентов и, в частности, изотонических разбавителей являются антибактериальные добавки, которые препятствуют бактериальному заражению гидравлических магистралей анализаторов. Учитывая тот факт, что бактериостатики, как правило, негативно влияют на клеточные мембраны, их выбор довольно ограничен. Следует иметь в виду, что для всех гематологических анализаторов с дифференциацией лейкоцитов на три популяции основным режимом является работа с цельной кровью. В случае гематологических анализаторов, проводящих дифференциацию лейкоцитов на три популяции, изотонический разбавитель содержит специальные добавки, модифицирующие мембраны лейкоцитов. В этом случае изотонический разбавитель должен применяться в согласованной паре с соответствующим лизирующим раствором.

NB! Нельзя совмещать в пару «изотонический раствор - лизирующий реагент» компоненты от разных производителей!

Другим важнейшим реагентом является лизирующий раствор (гемолитик), который при добавлении в разведение крови вызывает лизис эритроцитов и в то же время сохраняет лейкоциты. Необходимо, чтобы гемолиз эритроцитов был качественный и полный, поскольку в гемолизате подсчитываются лейкоциты, которых первоначально примерно в 1000 раз меньше, чем эритроцитов. Для обеспечения этих свойств лизирующий раствор, как правило, содержит сложную композицию ионных поверхностно-активных соединений. Современные гемолитики обеспечивают быструю реакцию и высокую степень отделения лейкоцитов от стромы независимо от настройки дискриминатора конкретного прибора.

В анализаторах с дифференциацией лейкоцитов на три популяции лейкоциты под действием лизирующего раствора изменяют свои размеры так, что выделяются фракции лимфоцитов (первый пик лейкоцитарной гистограммы), гранулоциты (крайний правый пик лейкоцитарной гистограммы). В средней части гистограммы, в области так называемых средних клеток, расположены моноциты, базофилы и эозинофилы. Наряду с факторами пробоподготовки свойства реагентной системы оказывают существенное влияние на качество дифференциации лейкоцитов.

Промывающие растворы непосредственно не участвуют в процессе измерения, однако их свойства существенно влияют на стабильность аналитических характеристик анализаторов. Характерной особенностью гематологических анализаторов, использующих принцип Культера, является наличие счетных апертур малого диаметра. Кровь содержит в себе ряд веществ, которые имеют тенденцию осаждаться на апертуре и внутренней поверхности гидравлической системы. Это постепенно приводит к уменьшению диаметра, закупорке апертуры и ошибочным результатам. В некоторых случаях прибор просто останавливается и требует тщательной промывки. Таким образом, качество промывающих растворов влияет на долговременную стабильность работы прибора.

Промывающие растворы бывают в основном трех типов. Первый тип - растворы для мягкой промывки магистралей анализатора между пробами, они не содержат поверхностно-активных веществ (детергенты) в значительных концентрациях. К сожалению, детергентные промывающие растворы практически не удаляют белки. Поэтому для очистки от белковых осадков применяют растворы на основе гипохлорита натрия - второй тип промывающих растворов. Эти растворы являются очень сильными депротеинезаторами. Однако раствор гипохлорита натрия - очень едкое вещество, долгого контакта с ним не выдерживают детали из пластика (они трескаются), металла (подвергаются коррозии). Поэтому злоупотреблять такими растворами нельзя. Данные растворы в основном применяются в экстренных случаях, когда необходимо быстро очистить счетную апертуру, а также для сервисных работ.

Современное решение проблемы качественной промывки прибора - применение ферментативных промывающих растворов. Благодаря наличию ферментов, такие растворы эффективно удаляют адсорбированные на стенках гидравлической системы белки и другие вещества. При этом они совершенно нейтральны и не оказывают вредного действия на детали прибора. Трудность создания таких промывающих растворов заключается в известном свойстве ферментов быстро терять активность.

6. Калибровка и контроль качества. Система управления качеством любого исследования складывается из оценки адекватности каждого этапа. Общеклинический анализ крови - не исключение, этапы его выполнения во многом схожи с другими видами лабораторных исследований и отличаются только применяемыми антикоагулянтами и аналитическим оборудованием:

1. Основание для назначения анализа.

2. Подготовка пациента.

3. Взятие биологического материала.

4. Идентификация проб.

5. Обработка биологического материала с использованием антикоагулянтов.

6. Транспортировка проб.

7. Аналитическое исследование на гематологическом анализаторе.

8. Оформление бланка с результатами теста (может выполняться на самом анализаторе).

9. Оценка результата по интервалам норм.

10. Использование результатов в диагностическом процессе.

Первые 6 пунктов включаются в понятие преаналитического этапа. Анализ назначается врачом и, как правило, берется натощак. Раздел 8 руководства подробно описывает правила и условия взятия и обработки проб.

Аналитический этап

Качество результатов исследования крови на гематологических анализаторах определяется следующими факторами:

- качеством используемых реагентов;

- точностью дозирования цельной или разведенной крови;

- точностью дозирования изотонического раствора при разведении крови;

- точностью определения объема суспензии клеток, пропущенной через апертуру;

- точностью самого подсчета клеток;

- точностью определения размеров клеток;

- корректностью математических методов обработки первичных результатов измерения.

Для настройки приборов производители применяют специальные калибровочные микросферы, которые представляют собой стандартные частицы латекса, а также фиксированные эритроциты. Обычно стандарт, выпущенный одной фирмой, не совсем подходит для калибровки приборов других фирм.

Говоря о калибровке, хочется привести пример искажения результатов MCV, связанный с самим методом определения объема частицы. Если откалибровать анализатор взвесью эритроцитов, имеющих нормальную двояковогнутую форму, а затем измерить сферические клетки такого же объема, они будут восприняты как микроциты. И наоборот, если при калибровке применить сфероциты, то прибор будет регистрировать двояковогнутые нормоциты как макроциты. В коммерческих препаратах контрольной крови, применяемой для настройки приборов, эритроциты имеют сферическую форму, поэтому трудно говорить об адекватной калибровке MCV. До настоящего времени нет общепринятого стандарта для MCV.

Калибровка гематологических анализаторов представляет до сих пор не решенную до конца проблему. Если, например, для калибровки ручных методов определения гемоглобина существуют стандарты гемиглобинцианида, то признанных стандартов для калибровки счета клеток не существует. Те взвеси частиц и контрольная кровь, которые предлагают фирмы-производители для контроля своих приборов, калибраторами не являются и предназначены для проведения процедур контроля правильности положения дискриминаторов и счета импульсов. Все применяемые для «калибровки» и контроля работы приборов материалы имеют доверительные интервалы, в которые необходимо уложиться.

Если при калибровке гематологического анализатора показатели не укладываются в допустимые границы паспортных значений, необходимо исключить преаналитические ошибки: недостаточное перемешивание, отличие температуры контрольной крови, извлеченной из холодильника, от комнатной, нарушение режима хранения, приводящее к порче крови. Например, иногда приходилось наблюдать, как контрольную кровь замораживали. При замораживании наблюдается сильное занижение количества эритроцитов. Это бывает при хранении крови в старых моделях холодильников, встречающихся во многих лабораториях, рядом с морозильной камерой. Здесь температура может опускаться на несколько градусов ниже нуля, и этого достаточно для замораживания и последующего разрушения эритроцитов.

Необходимо также провести ряд мероприятий по обслуживанию прибора, по промывке и очистке апертур, затем вновь провести калибровку.

Клетки (частицы) контрольной крови должны удовлетворять следующим требованиям:

- отсутствие электропроводности;

- сопоставимость по размерам с контролируемыми клетками;

- сходная плотность;

- стабильность размеров во времени;

- химическая инертность.

Выпускаемая сегодня контрольная кровь представляет собой химеру, содержащую стабилизированные эритроциты, частицы латекса вместо лейкоцитов, тромбоциты животных и др. Поэтому стабилизированная кровь не является идеальным контрольным материалом, так как у содержащихся в ней клеток изменены размеры, форма поверхности, реологические свойства и специфическая электропроводность.

Следует заметить, что коммерческая контрольная кровь позволяет исследовать от 8-18 параметров и более. Для контроля приборов с дифференциацией лейкоцитов на 3 части используется кровь на 16-18 параметров. Однако необходимо понимать, что калиброванные латексные частицы, имитирующие лейкоциты, не реагируют на действие лизирующего раствора и при анализе не отражают правильность работы всей системы, а лишь правильность установки дискриминаторов. По сути, особого смысла в приобретении такой, более дорогой, крови нет, достаточно использовать контрольную кровь на 8-10 параметров.

Контрольная кровь применяется:

- для проверки правильности и воспроизводимости счета клеток;

- для проверки правильности разведения;

- для «калибровки» прибора.

Ежедневный контроль гематологических исследований включает исследование контрольной крови на анализаторе с каждой серией значений - в области нормы и в области низких и высоких значений. Все правила построения контрольных карт Леви-Дженнингса и оценка результатов по правилам Вестгарда применимы для работы с контрольной кровью, исследуемой на гематологических анализаторах. Поскольку коммерческая контрольная кровь до вскрытия флакона стабильна 4-6 мес, а после вскрытия - 20-30 дней, возможно и необходимо проводить ее анализ через каждые 20 проб пациентов и, конечно же, в каждой серии проб. Это позволяет:

1. Выявить отклонения в результатах исследований еще до того, как они станут клинически значимыми.

2. Получить необходимое количество результатов для более быстрого накопления статистики и построения карт, а также для оперативной оценки воспроизводимости работы прибора.

Многие современные гематологические анализаторы имеют встроенную программу оценки качества исследований, включающую построение контрольных карт.

Для повышения качества проводимых лабораторией исследований очень важно организовать не только внутрилабораторную, но и внешнюю межлабораторную систему управления качеством в форме локального, городского, федерального контроля. Внешний контроль качества позволяет справиться с наиболее трудной задачей - выявлением и устранением систематических ошибок измерений.

7. Обслуживание, консервация прибора. При эксплуатации гематологических анализаторов важную роль играет качество электрической сети и заземления. Внезапные отключения электропитания, перепады напряжения могут привести к выходу из строя микросхем и плат, сбоям в гидравлической системе, что неизбежно повлечет увеличение расходов на ремонт и обслуживание прибора. Приобретая гематологический анализатор, как и любое другое лабораторное оборудование, надо привыкнуть к необходимости затрат не только на расходные материалы, но и на такую важную «деталь», как источник бесперебойного питания с надежной стабилизацией напряжения.

Отключение электропитания на несколько часов в момент отбора и обработки пробы может привести к засорению трубок, апертур, клапанов. Это повлечет сбой дальнейшей работы, необходимость дополнительных процедур промывки и очистки прибора или даже незапланированное обслуживание прибора.

При получении прибора специалист, осуществляющий установку и обучение работе с анализатором, обязательно обратит ваше внимание на необходимость контроля фоновых значений, получаемых при счете в камерах без пробы. Многие приборы делают такой подсчет автоматически при запуске (процедура «start up»). Эта проверка фона дает уверенность в правильном определении параметров. В руководстве оператора к прибору обычно приводятся фоновые значения (табл. 1).

У большинства современных анализаторов есть процедура завершения работы («shut down»). Она позволяет удалить остатки биологического материала из системы, провести промывку прибора и подготовить его к отключению. Процедуры начала и окончания работы обязательны для выполнения.

Одно из действий прибора - заполнение счетных камер и микроотверстий моющим раствором, содержащим протеолитический фермент. Этот раствор находится в камерах несколько часов (ночь). Кровь, даже разведенная анализатором для подсчета, содержит достаточное количество белковых компонентов, постоянно оседающих на трубках, апертурном отверстии. К этим белкам прилипают микроскопические частицы, обломки клеток, бактерии. За несколько десятков циклов счета эта белково-детритная «пленка» может значительно увеличиться и привести к уменьшению диаметра отверстия. В результате - нарушение правильности подсчета (см. рис ).

Фермент, входящий в состав промывающего (моющего, очищающего) раствора, за несколько часов полностью растворяет белковую матрицу пленки и прибор вновь готов к работе.

Неукоснительное выполнение процедуры выключения является одним из факторов нормальной работы гематологического анализатора. Прибор, эксплуатируемый круглосуточно, не подвергается ферментативной очистке, что может привести к значительному изменению диаметра апертуры и нарушению счета. В таком отверстии могут застревать более мелкие частицы (ранее миновавшие апертуру беспрепятственно) и останавливать работу анализатора.

При закупоривании апертуры (сигнал «clog», «clogging») микросгустками, волокнами, частицами, прибор отмечает увеличение времени счета или разницу в количестве частиц, сосчитанных за несколько временны`х отрезков, в зависимости от конструкции прибора. При возникновении такой ситуации прибор обычно реализует запрограммированную процедуру автоматического устранения закупорки. Если самоочистка не приносит успеха, оператору необходимо вручную выполнить следующие действия:

- провести очистку концентрированным ферментативным раствором;

- провести очистку раствором специально приготовленного гипохлорита натрия;

- активизировать из меню прибора процедуру специальной очистки апертуры токами высокой частоты («прожиг» апертуры).

Неэффективность всех этих действий указывает на серьезную механическую закупорку микроотверстия и требует снятия и чистки апертуры в соответствии с инструкцией на прибор. В некоторых случаях может даже потребоваться вмешательство сервисной службы.

Важно помнить, что для обслуживания прибора необходимо всегда четко следовать инструкциям производителя.

Иногда, при эксплуатации гематологических анализаторов, большой проблемой становится высокий фон в канале счета тромбоцитов. Это часто наблюдается при загрязнении разбавителя штаммами бактерий, устойчивых к антибактериальным добавкам. Смена канистры с изотоническим раствором дает кратковременный успех - трубка, перенесенная из одной канистры в другую, заселяет микроорганизмами новую канистру. Через некоторое время бактерии размножаются и фон снова увеличивается. Эта ситуация требует полной дезинфекции гидравлических магистралей прибора, а иногда и замены состава реагентов и антибактериальных добавок в них.

Другой причиной увеличения фона и ложного цитоза может стать рост бактерий и попадание их в счетные камеры по трубкам слива от емкости отходов («waste»). Поверхности от камер до контейнера с отходами покрываются белково-липидной пленкой, на которой, как на питательной среде из агара, прорастают микроорганизмы. Несмотря на антибактериальные добавки, содержащиеся в дилюенте, бактерии быстро размножаются в банке с отходами и «дорастают» до камер счета. Для предотвращения этой проблемы необходимо:

1. Чаще опорожнять емкость с отходами.

2. Периодически проводить дезинфекцию емкости и сливных шлангов (о частоте и способе запросите инструкции у вашей сервисной службы).

3. НЕ ДОПУСКАТЬ соприкосновения конца сливного шланга с поверхностью отходов в канистре.

Консервация прибора

Гематологический анализатор, как и любой прибор, приобретается для того, чтобы работать непрерывно и избавлять лабораторию от трудоемких ручных операций. Приобретение анализатора является осознанной необходимостью. Ситуация с остановкой прибора из-за недостатка финансирования покупки расходных материалов - нонсенс, но встречается часто.

Если все же работу прибора приходится остановить, самое главное - это подготовить анализатор к длительному простою.

Большинство гематологических анализаторов можно остановить не более чем на одну неделю почти без последствий (летом, в жару, опаснее). Более долгий период простоя прибора с реагентами внутри системы приводит к размножению бактерий, высыханию солевых растворов, склеиванию трубок, прижатых клапанами, кристаллизации солей в апертурах, микротрубках. Привести прибор в рабочее состояние после такого безответственного отношения к нему требует множества сил и времени. Случаи оставления приборов с растворами не являются гарантийными, и пользователь вынужден будет оплачивать услуги сервисной службы в гарантийный срок, если не выполнит нескольких простых действий.

Эти действия чаще описаны в руководстве оператора или могут быть запрошены у сервис-инженеров. Процедура консервации в общих чертах выполняется с использованием соответствующих команд меню анализатора следующим образом:

1. Произвести очистку апертур, камер, трубок, гидравлической системы дезинфицирующим раствором (гипохлоритом).

2. Слить из жидкостной системы все реагенты (изотонический разбавитель, лизирующий и моющий растворы).

3. Промыть систему дистиллированной водой.

4. Осушить систему, прокачав воздух.

Теперь прибор готов к длительному ожиданию следующей поставки реагентов.

Совет: если есть небольшой запас изотонического разбавителя и поставка реагентов ожидается в ближайшее время, лучше прекратить выполнять анализы. Прибор необходимо включать и выключать 2-3 раза в неделю, выполняя процедуры начала и окончания рабочего дня («start up» и «shut down») с оставшимися растворами. Это будет поддерживать прибор в рабочем состоянии до поступления новой партии реактивов. Не следует проводить описанные процедуры с использованием дистиллированной воды, в ней нет антибактериальных добавок, прибор в этом случае может стать инкубатором для бактерий и грибков.

8. Преаналитика, ошибки и проблемы. Даже при наличии современного гематологического анализатора лаборатория иногда выдает результаты, не отражающие истинное состояние пациента, вводящие в заблуждение лечащих врачей. Денег в прибор вложено много, а результат не всегда удовлетворительный. В чем причина?

От 70 до 80% лабораторных ошибок связаны с нарушениями на преаналитическом этапе, ошибки аналитического этапа составляют 10-15%, постаналитического - 15-20%.

Ошибки внелабораторного этапа отличают случайность, бессистемность и трудноуловимость. Именно внелабораторные ошибки вносят самый весомый вклад в искажение результатов анализа, маскируются под проблемы, связанные с приборами и реагентами. В таких случаях несоответствие результатов клинической картине или результатам предыдущего обследования заставляет сотрудников лаборатории перепроверять аппаратуру или заменять реагенты. Это приводит к нерациональной трате рабочего времени и средств, а выявить истинную причину проблемы, как правило, не удается.

Взятие образца, его транспортировка, хранение требуют постоянного контроля со стороны лаборатории. Для получения качественных результатов необходимо учитывать присутствие в пробе интерферирующих веществ, индивидуальные особенности пациента, его подготовку к взятию пробы на анализ. Усилия по предотвращению ошибок на этом этапе окупятся ощутимым улучшением качества гематологических исследований, снижением необоснованных повторов, расходов рабочего времени и средств на обследование больного.

Только полностью стандартизуя все этапы гематологического, да и любого другого исследования от назначения до интерпретации результатов, можно ожидать получения адекватных данных.

Техника взятия крови, используемые иглы, скарификаторы, капилляры, пробирки для транспортировки и хранения проб, реагенты и аналитические системы - все должно быть «однородным» изо дня в день. Часть проблем устраняется с внедрением коммерческих систем взятия венозной и капиллярной крови (вакуумных и невакуумных пробирок с антикоагулянтами).

Материал для анализа. Вена или палец?

Наилучшим материалом для выполнения анализа на гематологических анализаторах является венозная кровь. Несмотря на распространенное среди медицинских работников отечественных ЛПУ мнение, что «часто в вену лазить» плохо, во всем цивилизованном мире кровь на общий анализ у взрослых берется именно из вены. Важным подспорьем для взятия венозной крови на гемограмму стала разработка и широкое внедрение вакуумных пробирок, содержащих антикоагулянт. Принудительное всасывание крови под действием вакуума позволило использовать для венозной венепункции тонкие атравматичные иглы. Капиллярная кровь в других странах используется реже, в основном у маленьких детей, и связано это с техническими трудностями получения у них венозной крови. Очевидно, что для медицины развитых стран намного важнее получение достоверных результатов из более адекватного материала, чем лозунги об опасности венепункции. Тканевая жидкость, обрывки тканей и микросгустки в капиллярной крови - причина ошибок и сбоев анализатора.

В пробах капиллярной крови более активно происходит агрегация тромбоцитов, больше травмируются форменные элементы, Венозная же кровь, взятая в объеме 2-3 мл, может быть проанализирована повторно, из нее можно выполнить дополнительные исследования.

Взятие капиллярной крови рекомендовано:

- у новорожденных, детей младшего возраста;

- у лиц со склонностью к венозному тромбозу;

- при обширных ожогах и выраженном ожирении;

- при мелких и труднодоступных венах.

На преаналитическом этапе взятия биологического материала имеется более сотни (!) условий, регламентирующих получение адекватных результатов.

Взятие венозной крови как метод выбора имеет свои правила и ограничения, обсуждаемые в специальной литературе. Стоит напомнить, что для исключения общих факторов, влияющих на результаты гематологического исследования, необходимо соблюдение следующего:

- кровь берется после 15-минутного отдыха пациента;

- исключается прием алкоголя и курение непосредственно перед исследованием;

- кровь берется натощак, утром (7-9 ч), пациент во время процедуры сидит или лежит;

- наложение жгута на руку более чем на 1 мин приводит к сосудистому стазу и завышению уровня гемоглобина в венозной крови;

- для взятия венозной крови необходимо избегать мест травм, шрамов, гематом; вен, используемых для переливания растворов; ножных вен у больных диабетом, при нарушениях периферического кровотока, ангиопатиях.

Антикоагулянт

Стабилизация крови, анализируемой на автоматических счетчиках, проводится натриевыми или калиевыми солями этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА - этилендиаминтетраацетат). Гепарин и цитрат натрия для этих целей не применяется. Кровь, стабилизированная цитратом натрия, используется при исследовании гемостаза и СОЭ.

Обычно указываемая в справочниках и инструкциях к приборам концентрация ЭДТА - 1-2 мг на 1 мл для венозной крови. В случае капиллярной крови концентрация антикоагулянта должна быть увеличена в 2-3 раза. Увеличение концентрации ЭДТА в 5 раз не опасно и приводит лишь к небольшому снижению MCV, но увлекаться не стоит.

Одно из важных условий получения качественного образца - тщательное перемешивание крови с антикоагулянтом. Имеет значение и форма нанесения антикоагулянта. Лучшие результаты дает применение пробирок с аэрозольным покрытием и мелкодисперсным порошковым напылением. Кристаллическая форма солей ЭДТА плохо растворима в крови. Применение кристаллических солей приводит к образованию фибриновых нитей в верхней части пробы крови.

Для предотвращения свертывания крови пробирку следует перевернуть, НЕ ВСТРЯХИВАЯ (!), около 10 раз.

Недостаток антикоагулянта в пробе (крови взято больше отмеченного на пробирке уровня) приводит к образованию микросгустков и нарушению работы прибора. Избыток антикоагулянта может повлиять на некоторые показатели только при очень большом превышении оптимальной концентрации.

Анализ СОЭ может быть выполнен из крови, стабилизированной ЭДТА.

Все, как обычно: 4 части крови смешать с 1 частью 3,8% раствора цитрата или физиологического раствора, выдержать 60 мин в капилляре, измерить.

Из стабилизированной ЭДТА можно приготовить мазки крови для подсчета лейкоформулы, но как можно быстрее от момента получения крови.

Авторы надеются, что в самое ближайшее время во всех отечественных лабораториях методы взятия венозной и капиллярной крови с использованием стандартизованных коммерческих систем, обработанных антикоагулянтом, станут нормой жизни. Медицинским сестрам, сопротивляющимся внедрению взятия крови на общий анализ из вены («мы не будем работать на лабораторию!»), необходимо помнить, что вся деятельность учреждений здравоохранения и персонала больниц и поликлиник направлена, в первую очередь, на благо пациента.

Безопасность

Взятие венозной крови с помощью вакуумных систем также называют бесконтактным методом. При работе с вакуумными пробирками, кроме всех прочих преимуществ, отсутствует контакт медицинского персонала с кровью (как при взятии через обычную иглу в пробирку) и, особенно, с аэрозолями крови, образующимися в большом количестве при взятии шприцем. Этот самый излюбленный метод, когда кровь струей устремляется в пробирку (травмирование клеток, гемолиз и пр.), одновременно является и самым опасным, самым «грязным» способом!

Кроме того, взятие крови шприцем с последующим разливанием аликвот по пробиркам вообще недопустимо из-за опасности образования микросгустков, травмирования иглой оператора, высокой вероятности попадания следов крови на руки медсестры, окружающие предметы!

Лозунги о недостатке средств на одноразовые изделия для взятия крови, исключающие преаналитические ошибки, меркнут перед статистикой заражения медицинского персонала вирусным гепатитом. Качество лабораторных исследований и безопасность работников здравоохранения должны чего-то стоить!

Кроме этих систем: стерильные одноразовые пособия: иглы, скарификаторы, перчатки, салфетки. Все, как всегда, плюс маски, дезрастворы, система утилизации.

Салфетки

Взятие крови для автоматического гематологического анализатора возможно только с использованием безворсовых материалов.

Никакой ваты для обработки кожи! Ворсинки ваты вместе с кровью попадают в гемоглобиновую и счетные камеры анализатора, нарушают точность и воспроизводимость анализа, это приводит к увеличению расхода реагентов (повторные промывки) и необходимости внепланового технического обслуживания прибора. Экономия на салфетках оборачивается увеличением затрат на ликвидацию последствий экономии.

Специальные салфетки, пропитанные дезинфицирующими составами и упакованные в индивидуальные пакеты в заводских условиях, - лучшая альтернатива ватным и марлевым шарикам.

Пробирки из пластика являются единственно возможными при взятии крови для последующей обработки на анализаторе.

Кровь, взятая в правильном соотношении с адекватным антикоагулянтом в пластиковую пробирку, сохраняется несколько часов (до 24 ч при 4 °С) без существенных изменений количества и морфологии клеток. Однако скорейшее выполнение анализа предпочтительно, так как патологические клетки менее устойчивы к хранению.

Контакт со стеклом, как и недостаточное количество антикоагулянта, неизбежно приводит к активации тромбоцитов и их агрегации. Результат агрегации - ложная «преаналитическая» тромбоцитопения 50-80·10⁹/л, ошибка счета лейкоцитов может достигать 150% (ложный лейкоцитоз/лимфоцитоз), число эритроцитов может быть завышено почти на 0,5 Т/л, отсюда - неправильно рассчитанные эритроцитарные индексы. Это же может наблюдаться при появлении в кровотоке гигантских форм тромбоцитов, фрагментов мегакариоцитов, но уже относится к факторам физиологии пациента.

Кровь в пластиковых пробирках значительно меньше подвергается травмированию при транспортировке.

Как только цельная кровь взята в пробирку с антикоагулянтом и установлена в штатив, запускается процесс седиментации клеток (подобный СОЭ). Уже в первые минуты стояния образца эритроциты продолжают беспорядочно перемещаться и агрегируют с образованием «монетных столбиков». Спустя 4 мин эритроцитарные агрегаты состоят примерно из 10 эритроцитов, далее они постепенно становятся крупнее (до 50 и более эритроцитов) и разветвляются.

При хранении пробирок со стабилизированной кровью в вертикальном положении появляется лейкоцитарная пленка, состоящая из лейкоцитов и тромбоцитов. Они скапливаются на границе между эритроцитами и плазмой. Недостаточное перемешивание осевшей крови может стать одним из наиболее серьезных источников погрешности при анализе.

Пробирки типа «эппендорф»

В некоторых лабораториях кровь берут в эти «микроконические» пробирки. Цельная кровь имеет высокую вязкость, качественно перемешать ее в пробирке типа «эппендорф» очень трудно. После оседания клеток крови в этот маленький конус оператор может погрузить пробоотборник в более жидкую или более густую фракцию. Результатом будет неправильный счет. Поэтому специалисты не рекомендуют такие пробирки для гематологических исследований.

Нельзя трясти пробу крови! Ручное перемешивание даже в круглодонных микропробирках - процесс с большой долей человеческого фактора - источник ошибок.

Качественное перемешивание пробы возможно с использованием специальных гематологических миксеров. Эффект от приобретения дорогого анализатора часто сводится к нулю из-за экономии нескольких сотен рублей на покупке ротационного или качающего пробирки устройства (шейкера, гематологического миксера).

Продолжительность перемешивания до непосредственного анализа крови должна составлять не менее нескольких минут. Это время зависит от скорости перемешивания, конфигурации пробирок, вязкости крови и других факторов, но в среднем должно составлять не менее 2 мин.

Необходимо помнить, что длительное перемешивание может привести к травмированию и распаду патологических клеток.

Правиль