Pseudomonas aeruginosa является одним из основных госпитальных патогенов во всем мире, данный вид бактерий включен в группу ESKAPE патогенов, «избегающих» действия антибиотиков благодаря наличию у них разнообразных механизмов антибиотикорезистентности [1]. Полирезистентные P. aeruginosa занимают значимое место среди госпитальных бактериальных патогенов, выделяемых в отделениях реанимации и интенсивной терапии (ОРИТ), часто они являются причиной инфекций дыхательной [2] и мочевыводящей систем [3], а также инфекций кровотока и хирургических ран [4]. Основными молекулярными механизмами множественной лекарственной устойчивости (МЛУ, MDR) у клинических изолятов псевдомонад являются наличие гиперэкспрессируемых эффлюксных насосов семейства RND (Resistance Nodulation Cell Division) [5—7] и приобретение интегронов класса 1, несущих генные кассеты устойчивости к аминогликозидам, бета-лактамам, хлорамфениколу, карбапенемам и макролидам [8].

Большая часть госпитальных штаммов P. aeruginosa обладает устойчивостью к бета-лактамам, в том числе к карбапенемам, что связано с наличием у них генов бета-металло-лактамаз, особенно bla_VIM— и bla_IMP-типов в составе интегронов [9]. Гены бета-лактамаз класса, А (bla_KPC-, bla_GES— и bla_CTX-M-типов) и класса D (bla_OXA-типа) встречаются в геномах P. aeruginosa сравнительно реже [10, 11]. Первый случай обнаружения гена bla_CTX-M-типа в Pseudomonas sp. описан в Нидерландах [12], а ранее был впервые обнаружен в штаммах энтеробактерий, выделенных в Индии в 1999 г. [13]. В России ген bla_CTX-M-15 в P. aeruginosa как в бактериальном хозяине описан не был, хотя широко распространен среди госпитальных штаммов Enterobacteriaceae [14].

В ОРИТ из-за масштабного использования антибактериальных препаратов создаются условия для селекции MDR генетических линий патогенов. P. aeruginosa обладают большим набором механизмов распространения антибиотикорезистентности по вертикальному и горизонтальному типу: гены, интегроны, транспозоны, плазмиды, профаги, острова резистентности [15]. Мобильные гене-тические элементы интегроны являются не только инструментом мобилизации генетических детерминант антибиотикорезистентности у бактерий, но также представляют собой своеобразные «депо» генов лекарственной устойчивости, так как могут одновременно нести большое количество генных кассет, определяющих устойчивость не только к отдельным антибиотикам, но и к разным классам антибактериальных препаратов. Приобретение бактериальной клеткой интегрона с большим набором генных кассет может обеспечить ей быстрое превращение в MDR МЛУ организм [16].

Данная работа посвящена идентификации генетических детерминант антибиотикорезистентности и определению структуры мобильных генетических элементов — новых интегронов класса 1 — у P. aeruginosa, выделенных от пациентов в отделении нейрореанимации в 2013—2016 гг.

Материалы, использованные в работе, не содержат персональных данных пациентов. Полученные от них клинические изоляты промаркированы без указания фамилии, даты рождения, адреса проживания, номера истории болезни и личных документов и других именных материалов. В то же время, в соответствии с требованиями биоэтического комитета Российской Федерации, каждый пациент при поступлении в клинику заключил договор с лечебным учреждением, содержащий согласие пациента на проведение лечения и лабораторного обследования, в том числе на углубленное обследование с использованием инструментальных методов.

Антибиотикорезистентные изоляты P. aeruginosa (n=105) выделены от 67 пациентов, находившихся на искусственной вентиляции легких (ИВЛ) и с установленными уретральными катетерами в отделении нейрореанимации Мос-квы в период с сентября 2013 г. по сентябрь 2016 г. Видовую идентификацию бактерий осуществляли с помощью приборов VITEK-2 («Biomerieux», Франция) и MALDI-TOF Biotyper («Bruker», Германия). Бактерии культивировали на питательных средах: «Питательная среда № 1 ГРМ» (ФБУН ГНЦ ПМБ, Оболенск, Россия), LuriaBertanibroth («Difco», США) и Muller-Hinton («Himedia», Индия). Хранение бактериальных культур осуществляли в 10% глицерине при температуре минус 70 °C.

Минимальные подавляющие концентрации (МПК) антибактериальных препаратов 9 функциональных классов: бета-лактамов (амоксициллин/клавулановая кислота, амоксициллин/сульбактам, цефуроксим, цефокситин, цефотаксим, цефтриаксон, цефтазидим, цефоперазон/сульбактам, цефепим, имипенем, меропенем); тетрациклинов (тетрациклин, тигециклин), хинолонов (ципрофлоксацин), фениколов (хлорамфеникол), аминогликозидов (гентамицин, нетилмицин, амикацин), сульфаниламидов (триметоприм, котримоксазол), нитрофуранов (нитрофурантоин), фосфо-мицинов (фосфомицин) и полимиксинов (колистин) определяли с помощью прибора Vitek-2 («Biomerieux», Франция). Результаты интерпретировали в соответствии с рекомендациями European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing (EUCAST) (http://www.eucast.org/clinical_breakpoints/). В качестве контролей использовали штаммы E. coli ATCC 25922 и E. coli ATCC 35218.

Для ПЦР-детекции детерминант антибиотикорезистентности использовали праймеры на гены бета-лактамаз bla_TEM [17], bla_SHV [14], bla_CTX-M [18], bla_OXA-48-like [19], bla_NDM [20] и bla_VIM [21], интегронов класса 1 [22] и класса 2 [22, 23]. Для секвенирования полноразмерной копии гена bla_CTX-M-15 использовали 2 пары праймеров: (ISEcp1U1 — CTX-M-R1) и (CTX-M-Fext — P2D) [24]. В качестве матрицы для амплификации использовали термолизаты [14]. ПЦР проводили в приборах Gradient Palm Cycler («Corbert Research», Австралия) и Терцик («ДНК-Технология», Россия) с последующей электрофоретической детекцией продуктов амплификации в 1,5% агарозном геле.

Секвенирование ПЦР-продуктов осуществляли с помощью набора реактивов ABI PRISM BigDye™ Terminator v. 3.1 kit, анализировали на автоматическом ДНК-секвенаторе ABI PRISM 3100-Avant в фирме «Syntol» (Москва, Россия).

Анализ первичных последовательностей ДНК проводили с помощью программ Vector NTI9 («Invitrogen», США), CHROMAS («Technelysium», США) и веб-ресурса BLAST (http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi). Анализ структуры интегронов проводили с помощью веб-ресурса INTEGRAL (http://integrall.bio.ua.pt). Анализ последовательностей IS-элементов проводили с помощью веб-ресурса ISfinder (https://www-is.biotoul.fr/index.php).

В базе данных GenBank размещены секвенированные нуклеотидные последовательности P. aeruginosa: ген bla_CTX-M-15 (KU926353, KX944738); ген bla_VIM-2 (KF971881, KJ363322, KJ363324, KJ469367, KM009109, KP455672, KP713394, KP713395, KX216849, KX896437, KX896438); набор генных кассет aadA6-orfD (KP713392, KU870999, KU901705); набор генных кассет aac (3)Ic-cmlA5 (KU901704); набор генных кассет gcu87-aadB-aphA15d-aadA1a (KX218442); bla_PBL-1-aacA4 (KY171972), aadA6Δ3:ISPa21e-gcuD (KY870013).

Антибиотикорезистентные госпитальные штаммы P. аeruginosa (n=105) выделены в отделении нейрореанимации Москвы с сентября 2013 г. по сентябрь 2016 г. преимущественно из органов дыхания (60,0%) и мочи (28,6%), а также из хирургических ран (5,7%), крови (2,9%) и цереброспинальной жидкости (2,9%). Изучение чувствительности штаммов к антибактериальным препаратам 9 функциональных классов показало, что к бета-лактамам и сульфаниламидам устойчивы 100% штаммов, к тетрациклинам — 96,8%, к нитрофуранам — 91,0%, к фениколам — 88,1%, к фторхинолонам — 73,3%, к аминогликозидам — 71,3%, к фосфомицинам — 67,9%, к полимиксинам — 8,3% штаммов. Большинство штаммов характеризовалось фенотипом множественной антибиотикорезистентности — к 3 и более классам препаратов были устойчивы 92,4% штаммов, причем 62,7% штаммов были устойчивы к 5—6 функциональным классам препаратов (рис. 1).

Для расшифровки молекулярно-генетических механизмов антибиотикорезистентности у исследуемых штаммов осуществляли ПЦР-детекцию генов бета-лактамаз, интегронов классов 1 и 2 и определяли первичную структуру наборов генных кассет интегронов. Гены бета-лактамаз TEM-, SHV- и NDM-типов не обнаружены. Гены карбапенемаз VIM-типа (bla_VIM-2) выявлены в составе интегронов класса 1 у 37,7% штаммов.

В двух штаммах, P. aeruginosa t9P1 и P. аeruginosa B-971/16, выделенных из трахеи пациентов, находящихся на искусственной вентиляции легких, 13.11.15 и 22.06.16 был детектирован ген бета-лактамазы расширенного спектра bla_CTX-M-15. Полная нуклеотидная последовательность этого гена и его ближайшее генетическое окружение были размещены в базе данных GenBank [KU926353 и KX944738]. Данные штаммы обладали устойчивостью к 6 функциональным классам антибактериальных препаратов: бета-лактамам (амоксициллину/клавулановой кислоте, амоксициллину/сульбактаму, цефуроксиму, цефокситину, цефотаксиму, цефтриаксону, цефтазидиму, цефоперазону/суль-бактаму, цефепиму), фторхинолонам (ципрофлоксацин), аминогликозидам (гентамицину, нетилмицину), сульфаниламидам (триметоприму и котримоксазолу), нитрофурантоину, фосфомицину; и были чувствительны к карбапенемам (имипенему и меропенему), к амикацину и колистину. Анализ секвенированных последовательностей ДНК показал, что перед геном bla_CTX-M-15 располагаются мобильный генетический элемент ISEcp1 и межгенный спейсер (48 п.н.), характерный для гена bla_CTX-M-15, а после гена — участок ДНК, часто обнаруживаемый на плазмидах энтеробактерий, несущих ген bla_CTX-M-15 (рис. 2).

В изучаемой коллекции P. aeruginosa большинство штаммов несли интегроны класса 1 (63,0% штаммов), а интегроны класса 2 не обнаружены. У 36,7% интегронов класса 1 выявлены вставки, представленные наборами генных кассет 7 видов: (bla_VIM-2-like), (aadA6-gcuD), (aacA7-bla_VIM-2-like), (aac(3’)Ic-cmlA5), (aadA6Δ3:ISPa21e-gcuD), (gcu87-aadB-aphA15d-aadA1a) и (bla_PBL-1-aacA4). В составе выявленных кассет присутствуют гены, обеспечивающие устойчивость к антибактериальным препаратам разных функциональных классов: бета-лактамам (bla_VIM-2-like и bla_PBL-1), аминогликозидам (aadA6, aacA7, aac(3’)Ic, aadB, aphA15d, aadA1a и aacA4), фениколам (cmlA5), а также гены, кодирующие гипотетические белки с неизвестными функциями (gcuDиgcu87). Интересно, что первые 4 набора генных кассет были ранее описаны у P. aeruginosa, в то время как остальные 3 набора ранее в интегронных структурах бактерий не были обнаружены. Впервые они идентифицированы нами в клетках P. aeruginosa.

В геноме штамма P. aeruginosa t9P1, несущего ген bla_CTX-M-15, описанного выше, выявлен также новый интегрон класса 1 с набором генных кассет (aadA6:ISPa21-orfD), в котором в генную кассету аминогликозидаденилил-трансферазы aadA6 встроился IS элемент ISPa21 в ориентации, противоположной направлению транскрипции поврежденного гена (рис. 3).

В штамме P. aeruginosa B-1384P/15, выделенном из эндотрахеального аспирата от пациента нейрохирургического ОРИТ 27.07.15, описан новый интегрон класса 1, которому базой INTEGRAL присвоен номер In1360. Вариабельная часть этого интегрона состоит из набора четырех генных кассет: новой генной кассеты orfNC с неизвестной функцией, которой в базе данных INTEGRAL присвоено наименование gcu87; генной кассеты aadB, кодирующей аминогликозид-2’-аденилтрансферазу (aminoglycoside 2’-adenyltransferase); нового аллеля aphA15d генной кассеты aphA15 (по данным базы данных INTEGRAL), детерминирующей аминогликозидфосфо-трансферазу (aminoglycosidephospho-transferase), и генной кассеты aadA1a, кодирующей аминогликозид аденилтрансферазу (aminoglycosideadenyltransferase) (рис. 4).

Новая генная кассета gcu87 (487 п.н.) занимает первое место в наборе генных кассет вариабельного участка интегрона, содержит открытую рамку считывания размером 405 п.н., которая не имеет аналогов в базе данных GenBank. Трансляция нуклеотидной последовательности открытой рамки считывания in silico позволила определить аминокислотную последовательность (134 а.к.) нового гипотетического белка. Наибольшая степень идентичности данной белковой последовательности в базе данных белковых последовательностей GenBank обнаружена с последовательностями гипотетических белков псевдомонад P. hussainii (55%), P. сaeni (43%) и P. pohangensis (43%). Для вида P. aeruginosa подобных белковых последовательностей не обнаружено.

В штамме P. aeruginosa В-2175P/15, выделенном 30.11.15 из мочи пациента, идентифицирован новый интегрон класса 1. Секвенирование вариабельного участка интегрона показало, что в его составе находятся 2 генные кассеты: ранее не описанная кассета (1236 п.н.) с неизвестной функцией и кассета аминогликозидацетилтрансферазы aacA4 (639 п.н.), определяющая устойчивость к аминогликозидам. Поиск в базе данных GenBank не выявил гомологичных последовательностей ДНК с первичной последовательностью новой кассеты. Поиск по аминокислотной последовательности, кодируемой данным геном, показал, что в базе данных белковых последовательностей присутствуют 5 бета-лактамаз класса A с идентичностью более 70%: в штамме Cellvibrio sp. (GB WP_087466909.1) — 83% идентичности, в штамме Cellvibrio sp. (GB PSBB023) — 82% идентичности, в штамме Pseudoxanthomonassuwonensis (GB WP_052629552.1) — 78%, в штамме Alishewanellaaestuarii (GB WP_008607360.1) — 72% и в штамме Alishewanella sp. HH-ZS (GB WP_065956549.1) — 71% идентичности. Результат поиска позволил сделать вывод, что новая генная кассета содержит ген новой бета-лактамазы класса А, который нами был обозначен bla_PBL1. Новый интегрон размещен в базе данных GenBank (GenBank KY171972) и в специализированной базе данных INTEGRAL, где интегрону присвоен идентификационный номер In1375, подтверждено наличие новой генной кассеты и утверждено ее наименование bla_PBL-1 (рис. 5).

Новая кассета содержит рамку считывания размером 903 п.н., которая кодирует белковую последовательность 300 а.к. Сравнение аминокислотной последовательности, транслируемой с гена bla_PBL-1, с наиболее близкой последовательностью бета-лактамазы класса, А с 83% идентичности показало, что они отличаются по 52 аминокислотам, локализованным практически по всей длине последовательностей, что указывает на существенные различия этих структур (рис. 6).

Таким образом, в госпитальном штамме P. aeruginosa идентифицирован новый интегрон класса 1, несущий новую, не описанную ранее генную кассету, которая кодирует новую бета-лактамазу класса А. Предметом дальнейшего исследования являются характеристика данного фермента и определение его вклада в формирование фенотипа антибиотикорезистентности.

При изучении коллекции антибиотикорезистентных госпитальных изолятов P. aeruginosa, выделенных в Москве в 2013—2016 гг., показано, что большинство из них являются полирезистентными — 92,4% устойчивы к 3 и более классам антибактериальных препаратов (MDR-фенотип), а 62,7% устойчивы к 5—6 функциональным классам препаратов. Настораживает тот факт, что к каждому из 4 функциональных классов — нитрофуранов, тетрациклинов, сульфаниламидов и бета-лактамов — резистентны 90—100% штаммов, а 8% штаммов из коллекции устойчивы даже к полимиксинам (резервному антибиотику колистину). Большая часть изолятов были выделены из дыхательной и мочевыводящей систем, что указывает на то, что инфицирование пациентов ассоциировано с использованием системы искусственной вентиляции легких и наличием уретрального катетера.

В ходе определения молекулярно-генетических механизмов антибиотикорезистентности у P. aeruginosa, одного из ведущих патогенов, вызывающих ИСМП в отделении нейрореанимации, выявлены генетические детерминанты, кодирующие устойчивость к антибактериальным препаратам. В штаммах нашей коллекции P. aeruginosa идентифицированы гены бета-лактамаз bla_VIM-2-like и bla_CTX-M-15, а также интегроны класса 1, что указывает на важность данных генетических детерминант для формирования фенотипа полирезистентности данного патогена. Известно, что ген bla_VIM-типа широко распространен среди госпитальных штаммов P. aeruginosa в разных регионах мира [25, 26] и в Российской Федерации [27]. В нашей коллекции ген bla_VIM-2 присутствует у 37,7% штаммов. Гены bla_CTX-M-типа у P. aeruginosa идентифицируются крайне редко. В данной работе описан первый случай выявления гена этого типа (bla_CTX-M-15) у P. aeruginosa в России. На момент проведения анализа (16.03.16) в базе данных GenBank полная копия гена bla_CTX-M-15 (876 п.н.) не была представлена; были размещены только 4 последовательности, представляющие собой фрагменты данного гена: 318 п.н. (Иран, 2015) [GenBank KP780166], 500 п.н. (Индия, 2015) [GenBank: KR824154], 614 п.н. (Индия, 2015) [GenBank: KR824153] и 551 п.н. (Швейцария, 2015) [GenBank: KP172296], что не позволяет с уверенностью утверждать о принадлежности этих последовательностей гену bla_CTX-M-15, поскольку не исключена возможность наличия мутаций в несеквенированных участках гена. Полная копия гена bla_CTX-M-15 размещена нами в базе данных GenBank 14.03.16, что позволяет утверждать, что на территории России был идентифицирован новый бактериальный хозяин гена bla_CTX-M-15 — P. aeruginosa. Аналогичная выявленной нами структура гена bla_CTX-M-15 и его генетическое окружение ранее описаны для широкого круга энтеробактерий [24], а также были выявлены нами ранее в данном нейрохирургическом ОРИТ в госпитальных штаммах Klebsiella pneumoniae [KC817480; KU360116] и Proteus mirabilis [KC822920; KT175890] [28], что указывает на энтеробактерии как на возможный источник получения гена bla_CTX-M-15 клетками P. aeruginosa.

В большинстве исследованных штаммов выявлены интегроны класса 1, которые, как известно, наряду с эффлюксными насосами, отвечают за формирование полирезистентности P. аeruginosa [8]. Среди 7 типов наборов генных кассет 3 набора являются новыми для интегронов класса 1, на основании чего специализированной базой данных INTEGRAL присвоены идентификационные номера новым интегронам (In1360, In1375 и In1379). Генная кассета (aadA6Δ3:ISPa21e-gcuD) является уникальной структурой благодаря инсерции ISPa21e элемента в генную кассету aadA6 (новый интегрон In1379). Набор (gcu87-aadB-aphA15d-aadA1a) (новый интегрон In1360) включает в себя 3 описанные ранее генные кассеты, кодирующие аминогликозид-модифицирующие ферменты, а первая кассета этого набора представляет собой ранее не описанный ген, кодирующий гипотетический белок, не представленный в базе данных GenBank (новый интегрон In1375). Набор генных кассет (bla_PBL-1-aacA4) уникален тем, что на первом месте в нем находится генная кассета новой бета-лактамазы bla_PBL1, не описанная в базе данных GenBank (новый интегрон In1378), но имеющая 72—83% гомологии с 4 последовательностями генов бета-лактамаз класса A из базы данных GenBank. Таким образом, у госпитальных штаммов P. aeruginosa в течение достаточно короткого периода времени наблюдения (3 лет) в отделении нейрореанимации идентифицировано появление новых генетических структур — интегронов класса 1.

Впервые в России в полирезистентных госпитальных штаммах P. aeruginosa был идентифицирован ген бета-лактамазы расширенного спектра bla_CTX-M-15 с генетическим окружением, характерным для семейства Enterobacteriaceae. Полученные данные подтверждают продолжающееся распространение эпидемически значимого гена bla_CTX-M-15 в новые виды госпитальных патогенных бактерий.

В ходе исследования описаны 3 новых интегрона класса 1 — In1379, In1360 и In1375, в которых идентифицированы новые генетические структуры: генная кассета aadA6 с ISPa21e элементом, генная кассета gsu87, генная кассета aphA15d и генная кассета bla_PBL-1, кодирующая не описанную ранее бета-лактамазу класса А.

Наблюдаемое появление новых генетических структур антибиотикорезистентности у штаммов P. aeruginosa свидетельствует об активности генетических процессов, ассоциированных с формированием множественной лекарственной устойчивости у госпитальных патогенов.

Данная работа выполнена при финансировании в рамках НИР 049 Роспотребнадзора.

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Этические требования/Ethicalapproval

Все процедуры получения бактериальных штаммов от пациентов в данном исследовании соответствовали «Положению о локальном этическом комитете в Национальном медицинском исследовательском центре нейрохирургии имени академика Н.Н. Бурденко Минздрава РФ» от 10.11.15, Национальному стандарту РФ ГОСТ-Р 523 79−2005 «Надлежащая клиническая практика», а также Хельсинкской декларации Всемирной медицинской ассоциации 1964 г. с внесенными в нее изменениями 1975—2013 гг.

Сведения об авторах:

Сведения об авторах

Асташкин Евгений Ильич [Astashkin Evgeny Iliich], канд. мед. наук, ведущий научный сотрудник ФБУН «Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии» Роспотребнадзора; 142279 Оболенск, Серпуховский район, Московская область, Российская Федерация; e-mail: fursova@obolensk.org; https://orcid.org/0000-0002-3559-9071

Лев Анастасия Игоревна [Lev Anastasia Igorevna], младший научный сотрудник ФБУН «Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии» Роспотребнадзора; 142279 Оболенск, Серпуховский район, Московская область, Российская Федерация; e-mail: fursova@obolensk.org; https://orcid.org/0000-0002-0502-4218

Ершова Ольга Николаевна [Ershova Olga Nikolaevna], д-р мед. наук, доцент, заместитель главного врача по эпидемиологической работе ФГАУ «Национальный медицинский исследовательский центр нейрохирургии им. акад. Н.Н. Бурденко» Минздрава РФ; 4-я Тверская- Ямская улица, 16, 125047 Москва, Российская Федерация; e-mail: fursova@obolensk.org

Новикова Татьяна Сергеевна [Novikova Tatiana Sergeevna], стажер-исследователь ФБУН «Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии» Роспотребнадзора; 142279 Оболенск, Серпуховский район, Московская область, Российская Федерация; e-mail: fursova@obolensk.org; https://orcid.org/0000-0002-1683-4814

Агеева Екатерина Николаевна [Ageeva Ekaterina Nikolaevna], младший научный сотрудник ФБУН «Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии» Роспотребнадзора, 142279 Оболенск, Серпуховский район, Московская область, Российская Федерация; e-mail: fursova@obolensk.org; https://orcid.org/0000-0002-2976-2813

Федюкина Галина Николаевна [Fedyukina Galina Nikolaevna], канд. хим. наук, старший научный сотрудник ФБУН «Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии» Роспотребнадзора, 142279 Оболенск, Серпуховский район, Московская область, Российская Федерация; e-mail: fursova@obolensk.org; https://orcid.org/0000-0002-7737-9413

Светоч Эдуард Арсеньевич [Svetoch Edward Arsenievich], д-р ветеринар. наук, проф., главный научный сотрудник ФБУН «Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии» Роспотребнадзора, 142279 Оболенск, Серпуховский район, Московская область, Российская Федерация; e-mail: fursova@obolensk.org; https://orcid.org/0000-0002-3185-1954

Фурсова Надежда Константиновна [Fursova Nadezhda Konstantinovna], канд. биол. наук, зав. лабораторией ФБУН «Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии» Роспотребнадзора, 142279 Оболенск, Серпуховский район, Московская область, Российская Федерация; e-mail: fursova@obolensk.org; https://orcid.org/0000-0001-6053-2621

Для корреспонденции: Фурсова Надежда Константиновна, канд. биол. наук, зав. лабораторией антимикробных препаратов, ФБУН «Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии» Роспотребнадзора, 142279 Оболенск, Серпуховский район, Московская область, Российская Федерация; e-mail: fursova@obolensk.org