Лимфома Беркитта (ЛБ) представляет группу высокоагрессивных В-клеточных лимфом с высокой пролиферативной активностью опухолевых клеток (Ki-67 примерно 100%) и типичными хромосомными перестройками гена c-MYC, различающимися по морфологической картине и клиническим проявлениям [1]. ЛБ, как правило, встречается у детей и молодых людей. У взрослых ЛБ встречается достаточно редко.

Впервые о ЛБ лицевого скелета у детей из Уганды упоминается в 1897 г. Как самостоятельное заболевание ЛБ описана английским хирургом Денисом Беркиттом в 1958 г. Морфологическая картина опухоли представлена О’Conor в 1961 г. В 1964 г. установлена этиологическая роль вируса Эпштейна—Барр (EBV) в развитии ЛБ. В 1965 г. выделен спорадический вариант ЛБ. ЛБ, в состав которой включен вариант L3 острого лейкоза и беркиттоподобный вариант ЛБ, выделена в классификации ВОЗ в 1997 г. [2, 3]. Для установления диагноза ЛБ необходимо сочетание типичной клинической, морфологической, иммунологической и цитогенетической картины.

ЛБ является В-клеточной лимфомой с чрезвычайно коротким временем удвоения опухоли, которая часто представлена экстранодальным поражением или протекает как острый лейкоз. Она состоит из мономорфных трансформированных В-лимфоидных клеток среднего размера. Характерны транслокации гена c-MYC. Установление диагноза ЛБ представляет большие трудности. Для диагностики ЛБ необходима комбинация морфологии, иммунофенотипирования и генетического анализа. Важность быстрой и правильной диагностики обусловлена агрессивностью опухоли и необходимостью своевременного назначения высокоинтенсивной терапии.

Клинически выделяют 3 варианта ЛБ: эндемический, спорадический и на фоне выраженного иммунодефицита (ассоциированные с ВИЧ-инфекцией, реже — развивающиеся после трансплантации органов) [3].

Эти три клинических варианта ЛБ различаются клинически, морфологически и биологически.

Эндемический вариант ЛБ встречается в экваториальной Африке, Уганде, Новой Гвинее и Колумбии, представляя наиболее распространенное злокачественное заболевание детей в этой области с пиком заболеваемости от 4 до 7 лет, мальчики болеют в два раза чаще, чем девочки [4, 5]. В эндемичных районах существует корреляция между географической встречаемостью и некоторыми климатическими факторами (осадки, высота над уровнем моря, др.), которые соответствуют географическому распределению эндемической малярии [4, 6].

Спорадический вариант ЛБ встречается в основном у детей и молодых людей [7]. Частота встречаемости составляет лишь 1—2% от всех лимфом в Западной Европе и США. ЛБ составляет 30—50% детских лимфом. Средний возраст взрослых пациентов составляет 30 лет [3]. Соотношение мужчин и женщин 2:1 или 3:1, так же как и у детей.

Иммунодефицит-ассоциированный вариант ЛБ в основном рассматривается в сочетании с инфекцией вирусом иммунодефицита, хотя встречается в качестве начального проявления синдрома приобретенного иммунодефицита.

При эндемических вариантах ЛБ геном EBV присутствует в большинстве опухолевых клеток у всех пациентов [8], и существует эпидемиологическая связь с эндемической малярией [9]. Геном EBV обнаруживается в 95% случаев эндемического варианта Л.Б. Последние данные дают представление о концепции полимикробного патогенеза болезни [10]. EBV обнаружен примерно в 15—30% спорадических случаев Л.Б. Ранняя инфекция EBV связана с низким социально-экономический статусом и более высокой распространенностью спорадических ЛБ. В иммунодефицит-ассоциированных вариантах ЛБ EBV идентифицируется в 25—40% случаев [11, 12].

ЛБ чаще встречается при ВИЧ-инфицировании, чем при других формах иммуносупрессии. ЛБ появляется в начале прогрессирования ВИЧ-инфекции, когда число Т-лимфоцитов (CD4+) все еще высоко. Это говорит о том, что иммуносупрессия сама по себе не объясняет повышенный риск Л.Б. Связь между эндемической и ВИЧ-ассоциированной ЛБ заключается в активации поликлональных В-клеток, что происходит после малярийной и ВИЧ-инфекции. Тем не менее онкогенная роль самой ВИЧ-инфекции не может быть исключена [13]. Один из парадоксов в объяснении этиологии ЛБ является возникновение этой опухоли в различных популяциях. Вполне возможно, что существуют различные патогенетические механизмы возникновения ЛБ [14]. Различные и многочисленные воздействия окружающей среды могут сходиться в общем патогенетическом механизме с участием гена с-MYC, находящимся на 8-й хромосоме в локусе 8q24 [15].

Экстранодальная локализация чаще всего связана с некоторыми изменениями в соответствии с клиническими вариантами Л.Б. Тем не менее во всех трех клинических вариантах ЛБ возможно поражение ЦНС. В эндемических ЛБ местом поражения примерно в 50% случаев являются челюсти, другие лицевые кости и орбита [4, 5]. Дистальные отделы подвздошной, слепой кишки и/или сальника, яичники, почки, длинные кости, щитовидная железа, слюнные железы и молочная железа могут вовлекаться в опухолевый процесс без поражения челюсти [5, 16]. Хотя опухолевые клетки иногда могут быть найдены в костном мозге [5, 16]. Опухолевый процесс в челюсти очень редко наблюдаются в случаях спорадической Л.Б. Большинство случаев представляют поражения брюшной полости [1]. Наиболее частым местом поражения является илеоцекальный регион. Подобно эндемической ЛБ, часто опухоль локализуется в яичках, яичниках, почках и молочных железах. Поражение молочных желез (часто двустороннее и массивное) связано с началом полового созревания, с беременностью или кормлением грудью. Забрюшинные опухолевые массы могут привести к компрессии спинного мозга с параплегией. Поражение лимфатических узлов чаще встречается у взрослых, чем у детей. Поражение кольца Вальдейера и вовлечение средостения редки. При иммунодефицит-ассоциированном варианте ЛБ часто узловые локализации сочетаются с поражением костного мозга [11, 12].

Клиническая картина варьирует в зависимости от эпидемического подтипа и локализации процесса. Часто пациенты поступают в клинику с массивными поражениями из-за короткого времени удвоения опухоли. Лейкемический вариант ЛБ может наблюдаться у пациентов с массивным поражением, но только в редких случаях (в основном у мужчин) и проявляться исключительно как острый лейкоз с вовлечением периферической крови и костного мозга [17, 18].

ЛБ, протекающая как лейкоз, как правило, связана с поражением ЦНС, устанавливаемым уже на ранней стадии течения заболевания. Высокая химиочувствительность опухоли приводит к быстрому лизису опухоли.

Интенсивные режимы химиотерапии приводят к излечению до 90% пациентов с низкой стадией заболевания [1] и 60—80% больных с прогрессией заболевания [17, 18]. Результаты лечения лучше у детей, чем у взрослых [19]. Тем не менее, даже пациенты с прогрессированием заболевания, в том числе с поражением костного мозга и вовлечением ЦНС, могут быть вылечены с использованием программы лечения высокими дозами [20]. При высокой интенсивности лечения большинство пациентов с лейкемией также имеют очень хороший прогноз (80—90% выживаемость) [18, 21].

Рецидив, как правило, возникает в течение первого года после установления диагноза [17, 21].

При морфологической диагностике ЛБ следует учесть, что в классификации ВОЗ (2008) выделена группа неклассифицируемых В-клеточных лимфом с промежуточными признаками, между диффузной В-клеточной крупноклеточной лимфомой (ДВККЛ) и ЛБ [22].

Агрессивные В-клеточные лимфомы, промежуточные между ДВККЛ и ЛБ (редкий вариант 2—5% агрессивных лимфом), имеют морфологические, иммунофенотипические и генетические особенности обеих лимфом (ДВККЛ и ЛБ), но по биологическим и клиническим причинам не включены ни в одну из этих категорий [23]. Некоторые из этих случаев ранее классифицированы как беркиттоподобные лимфомы. Большинство случаев в этой категории имеют морфологические признаки, которые являются промежуточными между ДВККЛ и ЛБ: часть клеток меньше, чем при типичной ДВККЛ, напоминает ЛБ, а некоторые клетки больше, чем при типичной ЛБ, напоминают ДВККЛ, отмечается также наличие высокой пролиферативной активности, картины «звездного неба», а иммунофенотип соответствует Л.Б. Некоторые случаи морфологически более типичны для ЛБ, но имеют нетипичный иммунофенотип или генетические особенности, которые исключают диагноз Л.Б. Диагноз неклассифицируемой В-клеточной лимфомы не должен быть поставлен в случаях морфологически типичных ДВККЛ, которые имеют перестройку гена с-MYC, или в противном случае при типичной ЛБ, в которой перестройка гена с-MYC не определяется. В данную нозологическую категорию входят как de novo возникшие лимфомы, так и некоторые трансформированные фолликулярные лимфомы. Эти лимфомы относительно редки и в основном диагностируются у более взрослых пациентов, чем Л.Б. Иммунфенотип неклассифицируемых В-клеточных лимфом, промежуточных между ДВККЛ и ЛБ: положительная экспрессия В-клеточных маркеров (CD19+, CD20+, CD22+, CD79a+), часто CD10+, BCL6+, BCL2+, MUM1+, Ki-67 высокий 50—100%. Иммунофенотип чаще GCB чаще (90%), чем non-GCB (10%). В 50% случаев наблюдается коэкспрессия белков MYC+/BCL2+, так называемая double-expresser лимфома. Для точной диагностики этих лимфом необходим цитогенетический анализ. В эту группу опухолей входят цитогенетически: «singl hit» MYC+, «double hit» (30—50%) MYC+/BCL2+ или MYC+/BCL6+, «triple hit» MYC+/BCL2+/BCL6+ лимфомы. Перестройка гена c-MYC, как правило, с не-IG-партнерами. Неклассифицируемые лимфомы агрессивны, для них не установлен наиболее подходящий терапевтический подход.

Цель исследования — определить возможности комплексной морфологической диагностики (рутинной цитологии и гистологии, иммуноцитохимии и иммуногистохимии, молекулярной генетики) ЛБ.

В исследование включены 19 больных с установленным на основании применения морфологического (цитологического и гистологического), иммуноморфологического (иммуноцитохимического — ИЦХ и иммуноцитогистохимического — ИГХ) и молекулярно-генетического методов исследования диагноза ЛБ, являющейся В-клеточной лимфомой с экспрессией белка пролиферативной активности Ki-67 от 95 до 100%.

В исследуемой группе 12 мужчин и 7 женщин (соотношение 1,7:1), возраст от 20 до 60 лет (средний возраст 38 лет) (рис. 1). У 2 больных отмечалось поражение тонкой кишки (терминального отдела), у 4 — желудка, у 2 — печени, у 1 — толстой кишки, у 2 — забрюшинного пространства, у 1 — малого таза, у 2 — челюсти, у 2 — щитовидной железы, у 3 — лимфатических узлов (абдоминальных и забрюшинных). Цитологический материал представлял асцитическую жидкость у 8 больных (2 с поражением тонкой кишки, 4 — желудка, 1 — толстой кишки, 1 — печени), пунктаты у 11 больных (у 1 печени, у 2 забрюшинного пространства, у 1 малого таза, у 2 челюсти, у 2 щитовидной железы, у 3 лимфатических узлов).

Морфологическая (гистологическая и цитологическая) картина ЛБ представлена двумя вариантами — классическим и атипичным или беркиттоподобным. В нашем исследовании у 17 (90%) пациентов определялась классическая ЛБ, возраст больных от 20 до 49 лет. Атипичный или беркиттоподобный вариант ЛБ обнаружен у 2 (10%) больных в возрасте 51 года и 60 лет.

Дифференциальный диагноз ЛБ проводили у 6 больных с ДВККЛ с высокой пролиферативной активностью от 80 до 100%. В исследуемой группе 3 мужчины и 3 женщины (соотношение 1:1) в возрасте от 26 до 86 лет (средний возраст 53 года) (рис. 2). У 3 больных поражение лимфатических узлов, у 2 — поражение желудка, у 1 — мягких тканей. Цитологический материал представлял асцитическую жидкость у 2 больных (поражение желудка), пунктаты у 4 больных (у 1 мягких тканей, у 3 лимфатических узлов).

Для иммунофенотипирования применяли ИЦХ-метод (EnVision FLEX) с использованием моноклональных антител фирмы «DAKO». Панель антител включала: общий лейкоцитарный антиген, общие цитокератины, CD19, CD20, CD79a, CD10, Bcl2, Bcl6, CD23, CD34, TdT, CD3, CD4, CD5, CD8, CyclinD1, EBV, Ki-67.

Для иммунофенотипирования методом проточной цитофлюориметрии (проточный цитофлюориметр FACS Calibur, «Becton Dikinson», США) применяли антитела фирмы «DACO», меченные флюоресцентными метками (FITC или RPE): CD45, CD19, CD20, CD79a, CD10, Bcl2, Bcl6, CD23, CD34, TdT, κ, λ, CD3, CD4, CD5, CD8, Ki-67.

Флюоресцентная гибридизация in situ (FISH) является обязательным методом для диагностики ЛБ. FISH — метод прямого выявления нуклеиновых кислот (ДНК и РНК) в клеточных структурах с помощью флюоресцентно меченных зондов. Метод позволяет определить специфические нуклеотидные последовательности непосредственно в клетках, так как зонды, меченные флюорохромами, наносят прямо на клеточный образец, содержащий генетический материал, при этом морфология изучаемых клеток не меняется. Применяли 2 варианта FISH-метода: на гистологических срезах парафиновых блоков толщиной 4 мкм и на цитологическом материале. Разработка методики FISH на цитологическом материале позволила значительно расширить диагностические возможности цитогенетических исследований. Для определения перестройки гена с-MYC применяли метод FISH со стратегией разделения (или расщепления сигнала) в исследуемом гене без установления участника транслокации (рис. 3).

Для диагностики ЛБ использовался локусспецифический зонд MYC FISH DNA Probe, Split Signal для выявления любых перестроек гена с-MYC. Ген человека MYC состоит из 3 экзонов, охватывающих область 5 кб на длинном плече 8-й хромосомы в локусе 8q24. MYC FISH ДНК-зонды являются смесью двух зондов, меченный техасским красным (TexRed) ДНК-зонд, охватывающий 418 кб теломерной области от точки разрыва, и меченный флюоресцеинизотиоционатом (FITC) ДНК-зонд, охватывающий 652 кб центромерной области от точки разрыва (рис. 4).

Гибридизацию in situ выполняли по протоколам фирмы-производителя «DAKO» для локусспецифических проб. Визуализацию сигналов проводили под флюоресцентным микроскопом Zeiss-Axioscope с использованием тройного фильтра DAPI/RED/GREEN. В каждом случае анализировали 200 интерфазных ядер с четкими сигналами.

Оценка результатов гибридизации ДНК-зонд MYC FISH DNA Probe, Split Signal. Позитивными (с транслокацией) считали ядра с одним красным сигналом, одним зеленым и одним желтым сигналами. Ядра с двумя желтыми сигналами считали негативными. Позитивный результат свидетельствовал о наличии одной из трех транслокаций t (8;14)(q24;q32), t (2;8)(pl2;q24) или t (8;22)(q24;qll).

Методика FISH включала этапы депарафинизации (в случае гистологического материала), инкубации с пепсином, денатурации ДНК и гибридизации с ДНК-зондом. Основными сложностями при оценке результатов особенно старых блоков являлись деформация клеток при первичной обработке формалином, их близкое расположение друг к другу, что вызывало наложение сигналов и соответственно проблемы при интерпретации полученных данных.

ЛБ — высокоагрессивная гетерогенная группа В-клеточных лимфом с высокой пролиферативной активностью около 100% (Ki-67 примерно 100%) и перестройкой гена c-MYC. По клинической картине выделяют 3 варианта ЛБ: эндемический, спорадический и ВИЧ-ассоциированный.

Гистологически для классического варианта ЛБ (17 случаев) характерна диффузная пролиферация лимфоидных клеток средних размеров с относительно крупным ядром округлой формы, плотным хроматином с несколькими центрально расположенными базофильными ядрышками (рис. 5). Ядро окружено базофильной цитоплазмой, в которой могут определяться вакуоли. Выявляются многочисленные митозы, фигуры апоптоза. Много гистиоцитов, макрофагов, что создавало картину «звездного неба». В ряде случаев ЛБ может быть с плазмоцитоидной дифференцировкой опухолевых клеток.

Цитологическая картина характеризовалась (17 случаев) мономорфным клеточным составом (рис. 6). Опухолевые клетки среднего размера с округлыми ядрами и нежной бластной структурой хроматина, содержащими от 2 до 5 базофильных ядрышек. Для опухолевых клеток характерна узкая базофильная вакуолизированная (жировые вакуоли) цитоплазма. Встречаются фигуры митоза и макрофаги. В цитологических препаратах отмечается «синдром склеивания» опухолевых клеток. Характерна цитоплазмоклазия.

Гистологическая картина атипичного или беркиттоподобного варианта отличалась от классической ЛБ (2 случая). Для морфологической картины характерен выраженный полиморфизм: клетки разной формы и размеров (среднего и крупного). Помимо клеточного полиморфизма наблюдался полиморфизм ядер по форме и размерам. Картина «звездного неба» не наблюдалась, но макрофаги присутствовали в незначительном количестве. В целом морфологическая картина напоминала ДВККЛ, но клетки меньше по размеру. Возраст пациентов был старше, чем у больных классической ЛБ, одному больному 51 год (мужчина) с поражением желудка и второй больной 60 лет (женщина) с поражением ободочной кишки.

Цитологическая картина атипичного, или беркиттоподобного, варианта ЛБ (2 случая) характеризовалась полиморфизмом размера клеток, формы и размера ядер, ядра — бластной структурой хроматина и наличием выраженных ядрышек. Цитоплазма базофильная, узкая, вакуолизированная, содержала жировые вакуоли. Редко определялись митозы.

Рутинное цитологическое исследование во всех 19 случаях позволило установить диагноз лимфомы без указания, что это Л.Б. Таким образом, чувствительность, специфичность и точность в установлении диагноза лимфомы составили 100%. Молодой возраст больных, экстранодальная локализация, быстрое прогрессирование заболевания, типичная цитологическая картина позволили у 17 больных предположить наличие Л.Б. Иммунофенотип любого типа ЛБ: положительная мембранная экспрессия IgM с или без экспрессии IgD, пан-В-клеточных маркеров CD19, CD20, CD79a в сочетании CD10 и Bcl6 (рис. 7, рис. 8). Наблюдается негативная экспрессия с Bcl-2 (рис. 9), TdT, CD5 и CD23. Пролиферативная активность около 100% (Ki-67 примерно 100%) (см. рис. 8). Экспрессия маркеров CD10 и bcl-6 подтверждают происхождение клеток ЛБ из герминального центра фолликула.

Всем 19 больным проведено иммунофенотипирование различными методами: иммуноцитохимия, проточная цитофлюориметрия и иммуногистохимия (табл. 1).

У всех 19 больных наблюдалась положительная экспрессия пан-В-клеточных маркеров CD19, CD20, CD79a как при ИГХ-методе, так и при ИЦХ и проточной цитофлюориметрии. Причем экспрессия пан-В-клеточных маркеров опухолевыми клетками оценивалась как выраженная. При сравнении ИГХ- и ИЦХ-методов отмечалась выраженная экспрессия PAX5. Наблюдалась выраженная экспрессия CD10 в 16 (84%) случаях при ИГХ-методе, в 100% при проточной цитофлюориметрии, в 18 (95%) при ИЦХ. Выраженная экспрессия Bcl6 наблюдалась в 18 (95%) случаях при ИГХ-исследовании и в 19 (100%) при ИЦХ и проточной цитофлюориметрии. CD23, Cyclin D1, CD34, TdT, Т-клеточные маркеры (CD3 CD4 CD8 CD5) не экспрессировались опухолевыми клетками. Маркер EBV, LMP (вирус Эпштейна—Барр, латентный мембранный протеин) экспрессировался в 3 (15%) случаях. Белок пролиферативной активности Ki-67 при ИГХ-, ИЦХ-методах и проточной цитофлюориметрии экспрессировали 90—100% клеток опухоли. При ИГХ-исследовании в одном случае Ki-67 определялся в 90% опухолевых клеток, в двух — в 95%, в остальных 16 — в 100%. При ИЦХ-методе и проточной цитофлюориметрии в 8 случаях исследования асцитических жидкостей Ki-67 90%, в 2 случаях — 95%, в 9 — 100%. При проточной цитофлюориметрии определялась клональность по легким цепям иммуноглобулинов κ или λ (Igλ/Igκ). В целом коэффициент корреляции (r, p<0,05) между данными ИЦХ-метода, проточной цитофлюориметрией и ИГХ составил 0,99.

При ИЦХ-исследовании (100%) и проточной цитофлюориметрии (94%) экспрессия CD10 наблюдалась чаще, чем при ИГХ-методе (84%). Коэффициент корреляции (r, p<0,05) составил –0,87.

При ИЦХ-методе (100%) и проточной цитофлюориметрии (100%) экспрессия Bcl6 наблюдалась чаще, чем при ИГХ (95%). Коэффициент корреляции (r, p<0,05) составил –0,95. При ИЦХ-методе (95%) и проточной цитофлюориметрии (95%) экспрессия Ki-67 (95%) была ниже, чем при ИГХ (99%). Коэффициент корреляции (r, p<0,05) составил –0,96. При проточной цитофлюориметрии определялась клональность по легким цепям λ или κ, что не выполнялось при ИГХ- и ИЦХ-исследованиях из-за сильного фонового окрашивания.

Большинство случаев ЛБ (80%) имеют транслокацию в гене с-MYC (8q24) в область тяжелой цепи иммуноглобулинов (14q32) (t (8;14)(q24;q32)) или реже (20%) — в локусы легких цепей иммуноглобулинов λ (22q11) (t (8;22)(q24;qll)) или κ (2р12) (t (2;8)(p12;q24)). FISH является обязательным методом для диагностики Л.Б. Только выявление цитогенетического маркера ЛБ — перестройки локуса гена с-MYC: транслокации t (8;14)(q24;q32), ее вариантов t (2;8)(pl2;q24) или t (8;22)(q24;qll) — позволяет диагностировать ЛБ. В условиях отсутствия гистологического материала методом флюоресцентной гибридизации in situ (FISH) определялась перестройка гена с-MYC на цитологическом материале, что являлось единственным возможным методом окончательной диагностики ЛБ.

Для диагностики ЛБ использовался локусспецифический зонд для выявления любых перестроек гена с-MYC. Разработанная методика FISH на цитологическом материале позволила значительно расширить диагностические возможности цитогенетических исследований.

Дифференциальный диагноз ЛБ проводили с ДВККЛ. В нашем исследовании у 6 больных обнаружен иммунофенотип В-клеточной лимфомы с высокой пролиферативной активностью от 80 до 100% (табл. 2).

У всех 6 больных наблюдалась положительная экспрессия пан-В-клеточных маркеров CD19, CD20, CD79a как при ИГХ-методе, так и при ИЦХ и проточной цитофлюориметрии. Причем экспрессия пан-В-клеточных маркеров опухолевыми клетками оценивалась как выраженная. При сравнении ИГХ-метода, проточной цитофлюориметрии и ИЦХ отмечалась выраженная экспрессия PAX5. Наблюдалась выраженная экспрессия CD10 в 3 (50%) случаях как при ИГХ-методе, так и при ИЦХ и проточной цитофлюориметрии. Выраженная экспрессия Bcl6 наблюдалась в 5 (95%) случаях при ИГХ-исследовании, и в 100% при ИЦХ и проточной цитофлюориметрии. Выраженная экспрессия Bcl2 наблюдалась в 1 (16%) случае. CD23, Cyclin D1, CD34, TdT, Т-клеточные маркеры (CD3, CD4, CD8, CD5) не экспрессировались опухолевыми клетками. Маркер EBV (вируса Эпштейна—Барр) не экспрессировался. Белок пролиферативной активности Ki-67 при ИГХ-, ИЦХ-методах и проточной цитофлюориметрии экспрессировался в 80—100%. В одном случае Ki-67 80%, в двух — 90%, в остальных трех — 100%. При проточной цитофлюориметрии определялась клональность по легким цепям иммуноглобулинов κ или λ (Igλ/Igκ).

В целом у 6 больных с ДВККЛ коэффициент корреляции (r, p<0,05) между данными ИГХ- и ИЦХ-методов, проточной цитофлюориметрией составил 1, что свидетельствует о совпадении данных иммунофенотипирования, выполненных тремя методами. При ИЦХ-исследовании (100%) и проточной цитофлюориметрии (100%) экспрессия Bcl6 наблюдалась чаще, чем при ИГХ (95%). Коэффициент корреляции (r, p<0,05) составил — 0,95. При проточной цитофлюориметрии определялась клональность по легким цепям λ или κ, что не выполнялось при ИГХ- и ИЦХ-методе из-за сильного фонового окрашивания.

Сравнительный анализ данных иммуноморфологического (ИГХ-, ИЦХ-методы и проточная цитофлюориметрия) исследования у больных с ЛБ и ДВККЛ с высокой пролиферативной активностью показал высокую степень корреляции — 0,86 (r, p<0,05) (рис. 10). Учитывая существование случаев ЛБ с нетипичной морфологической картиной, опираться на данные иммуноморфологического исследования для 100% подтверждения диагноза ЛБ нельзя, необходимо проведение молекулярно-генетического исследования (FISH-метод) для определения перестройки гена с-MYC. Для дифференциальной диагностики ЛБ и ДВККЛ использовался локусспецифический зонд, позволяющий выявлять любых перестройки гена с-MYC. Исследование проводили как на цитологическом, так и гистологическом материале. У всех 6 больных перестройка гена с-MYC не обнаружена, что позволило исключить ЛБ.

Таким образом, точность рутинного цитологического исследования при подозрении на ЛБ составила 88%, чувствительность — 89%, специфичность — 100%. При рутинном цитологическом исследовании необходимо учитывать клинические данные: молодой возраст больных, быстрое прогрессирование болезни, экстранодальное поражение. Наличие беркиттоподобного морфологического варианта ЛБ требует проведения ИЦХ и молекулярно-генетического исследований для точной диагностики ЛБ.

Точность иммуноцитохимии, позволяющей предположить ЛБ, составила 92%, чувствительность — 100%, специфичность — 67%. Сравнительный анализ данных иммуноморфологического исследования у больных с ЛБ и ДВККЛ с высокой пролиферативной активностью показал высокую степень корреляции иммунофенотипов двух лимфом — 0,86 (r, p<0,05), что свидетельствует о недостаточности иммунофенотипирования при ЛБ и необходимости молекулярно-генетического исследования. Точность, чувствительность и специфичность комплексного исследования (цитологии, иммуноцитохимии и FISH-метода) в диагностике ЛБ составила 100%.

Анализ полученных данных показал, что рутинное цитологическое исследование с учетом клинических данных позволяет лишь высказать предположение о наличии ЛБ при классической морфологической картине. Сопоставление данных ИЦХ-метода и проточной цитофлюориметрии с ИГХ-исследованием показало высокую степень корреляции между методами в установлении иммунофенотипа ЛБ, коэффициент корреляции составил 0,99 (r, p<0,05). Таким образом, цитологический материал вполне пригоден для иммунофенотипирования. Однако в случае ЛБ требуется подтверждение диагноза с помощью молекулярно-генетического исследования. Комплексное гистологическое и цитологическое исследование с использованием ИГХ- и ИЦХ-методов, проточной цитофлюориметрии и FISH-метода позволяет в 100% случаев подтвердить диагноз ЛБ.

Участие авторов:

Концепция и дизайн исследования: Е.Н.С., И.Б.К.

Сбор и обработка материала: Е.Н.С., И.Б.К.

Статистическая обработка: Е.Н.С.

Написание текста статьи: Е.Н.С.

Редактирование: И.Б.К.

Конфликт интересов отсутствует.