Привычное невынашивание беременности (ПНБ) представляет собой вариант репродуктивной патологии, в основе которой лежат генетические нарушения, эндокринопатии, иммунные факторы, пороки развития матки, инфекции, аномалии свертывающей системы крови и др. Среди гормональных нарушений указывают недостаточность лютеиновой фазы любого генеза, гиперандрогению за счет нарушения фолликулогенеза, гипоэстрогению на этапе выбора доминантного фолликула, неполноценное развитие или перезревание яйцеклетки, неполноценное формирование желтого тела, неполноценную секреторную трансформацию эндометрия, в результате чего происходят неполноценная инвазия трофобласта и формирование неполноценного хориона [7].

Иммунные механизмы ПНБ включают развитие антифосфолипидного синдрома, выработку антител к хорионическому гонадотропину человека (ХГч), тиреоидным гормонам, наличие у женщины общих с мужем антигенов главного комплекса гистосовместимости [1]. В последние годы внимание специалистов приковано к изучению патогенетической роли дисбаланса эффекторных субпопуляций Т-клеток и регуляторных лимфоцитов, а также естественных киллерных (natural killer - NK) клеток [6]. Следует подчеркнуть, что ХГч играет центральную роль как в регуляции продукции прогестагенных гормонов, так и в индукции механизмов иммунологической толерантности при беременности [8, 14].

ХГч представляет собой сиализированный гетеродимерный гликопротеин, состоящий из двух нековалентно связанных субъединиц и содержащий примерно 30% углеводов; α-субъединица ХГч является общей для лютеинизирующего (ЛГ), фолликулостимулирующего (ФСГ) и тиреотропного (ТТГ) гормонов и состоит из 92 аминокислот и 2 N-связанных олигосахаридов; β-субъединица значительно отличается от β-субъединиц ТТГ и ФСГ, однако на 80% (первые 115 аминокислот из 145) гомологична ЛГ. β-субъединица ХГч также сильно гликозилирована и содержит 2 N-связанных и 5 O-связанных олигосахаридов. Помимо «классического» ХГч у человека обнаружены 4 его молекулы, сходные по аминокислотной последовательности, однако продуцируемые клетками различных популяций и имеющие независимые биологические функции: сульфатированный ХГч, гипергликозилированный ХГч, свободная β-субъединица ХГч и гипергликозилированная свободная β-субъединица ХГч. Предполагается существование также шестой разновидности «фетального» ХГч, вырабатываемого клетками почек и печени плода [4, 9].

Большинство биологических эффектов ХГч реализуется посредством стимуляции общего ХГч/ЛГ-рецептора, сопряженного с аденилатциклазой. Альтернативными структурами связывания ХГч являются рецептор трансформирующего фактора роста β, для которого ХГч является блокирующим агентом, препятствующим взаимодействию с физиологическим лигандом, Toll-подобные рецепторы, рецептор маннозы [4, 9, 10].

ХГч обладает уникальным спектром биологических эффектов, регулируя, среди прочего, практически все процессы, связанные с возникновением и вынашиванием беременности: продукцию прогестерона желтым телом, васкуляризацию эндометрия, имплантацию бластоцисты, дифференцировку цитотрофобласта, формирование иммунологической толерантности в отношении полуаллогенного плода, рост беременной матки и подавление ее сократимости, стимуляцию роста органов плода, рост и развитие пуповины, что позволило L. Cole [9] назвать ХГч «чудом современной науки».

Цель нашего исследования - изучение особенностей гормонального фона и иммунного статуса беременных с ПНБ в анамнезе, а также выявление корреляционных связей между экспрессией маркеров функционального состояния иммунокомпетентных клеток и концентрацией половых гормонов при беременности. Уникальный спектр биологических активностей ХГч побудил нас сосредоточить внимание на оценке его иммунотропных свойств в изучаемой модели.

В исследовании приняли участие 10 беременных с ПНБ в анамнезе (3 и более последовательных самопроизвольных прерывания беременности, предшествовавших текущей беременности), которые вошли в основную группу. Контрольную группу составили 11 беременных с сохранной репродуктивной функцией и физиологическим течением беременности. Демографические показатели и акушерский статус обследованных женщин представлены в табл. 1.

Концентрации ХГч, ЛГ, ФСГ, α-фетопротеина и прогестерона в сыворотке крови определяли иммунохимическим методом с использованием анализатора Access 2.

Поверхностный фенотип лимфоцитов периферической крови исследовали методом иммунофлюоресценции в проточном цитометре.

Статистическую обработку результатов проводили с использованием непараметрического U-критерия Манна-Уитни и коэффициента линейной корреляции Пирсона. В таблицах представлены средняя арифметическая величина (M) и ее ошибка (m) для каждого показателя.

Изучая поверхностный фенотип лимфоцитов, мы оценивали число клеток, экспрессирующих важнейшие дифференцировочные антигены, являющиеся маркерами основных популяций и субпопуляций лимфоцитов: Т- и В-клетки, NK-клетки, Т-лимфоциты с хелперной или цитотоксической функцией. Кроме того, изучали поверхностную экспрессию молекул, отражающих особенности функционального состояния лимфоцитов: ранний активационный маркер CD25, представляющий собой α-цепь рецептора интерлейкина-2, поздний маркер активации HLA-DR, являющийся молекулой главного комплекса гистосовместимости II класса, а также CD95, отражающий готовность клетки к восприятию апоптогенного сигнала и реализации программы апоптоза.

Особенностью популяционного состава лимфоцитов периферической крови беременных женщин с ПНБ в анамнезе явилось снижение относительного и абсолютного числа Т-лимфоцитов. Как видно из табл. 2,

Число лимфоцитов с признаками ранней активации, оцениваемое по экспрессии CD25, не различалось в обеих группах (табл. 3).

Эндокринный профиль беременных женщин с ПНБ в анамнезе характеризовался усилением прогестагенных влияний (табл. 4),

Многочисленные сведения об иммунотропной активности половых гормонов и α-фетопротеина побудили нас провести анализ взаимосвязей между экспрессией активационных маркеров и маркера апоптоза на лимфоцитах периферической крови, отражающих их функциональное состояние, и концентрацией гормонов в сыворотке крови беременных с физиологическим течением беременности и с ПНБ в анамнезе (табл. 5).

Нам не удалось обнаружить какие-либо закономерности экспрессии лимфоцитарных антигенов и уровней α-фетопротеина, прогестерона, ЛГ и ФСГ в изучаемых группах (неопубликованные данные). Концентрация ХГч продемонстрировала высокую значимую отрицательную корреляцию с количеством Т-лимфоцитов, экспрессирующих практически все изучаемые активационные маркеры у беременных женщин с ПНБ в анамнезе. Напротив, у женщин с физиологическим течением беременности какая-либо значимая связь между изучаемыми показателями отсутствовала.

Не вызывает сомнения важная роль иммунных механизмов в возникновении и развитии беременности. Несостоятельность или дисбаланс этих механизмов приводит к различным вариантам репродуктивной патологии [6, 15]. Полученные нами результаты согласуются с данными литературы [11, 12] о снижении числа Т-лимфоцитов CD3+ в периферической крови беременных женщин с ПНБ. Сообщалось также об увеличении количества NK-клеток в периферической крови и в эндометрии при этой патологии. Необходимо, однако, подчеркнуть, что NK-клетки представляют собой гетерогенную популяцию, состоящую из лимфоцитов с низкой плотностью экспрессии маркера CD56 и несущих одновременно рецептор CD16 (90% NK-клеток периферической крови). Оставшиеся 10% NK-клеток периферической крови экспрессируют высокие уровни CD56 и не имеют антигена CD16. Напротив, до 70% лейкоцитов децидуальной оболочки представлены NK-клетками с высокой плотностью экспрессии маркера CD56, характеризующегося низким цитотоксическим потенциалом и способностью вырабатывать цитокины, участвующие в формировании иммунологической толерантности в отношении плода [11, 15].

Следует обратить внимание на особенности обследованной группы, в которую вошли женщины с ПНБ в анамнезе, однако настоящая беременность характеризовалась благоприятным течением. Последнее обстоятельство косвенно указывает на существование механизмов компенсации иммунных нарушений, приведших к утрате предшествовавших беременностей. Нельзя исключить, что таковыми являются подавление активации эффекторных и цитотоксических Т-лимфоцитов, а также изменение соотношения субпопуляций NK-клеток в сторону преобладания лимфоцитов с низкой цитотоксичностью и способностью продуцировать иммуносупрессорные цитокины. Повышение концентрации прогестагенных факторов, таких как прогестерон и α-фетопротеин, также может оказывать благоприятное влияние на вынашивание беременности.

В литературе [12] имеются сообщения о том, что ХГч способствует подавлению апоптоза CD56+ NK-клеток и их выживанию при наступлении беременности. Представляет интерес наблюдение о существовании отрицательной корреляции между концентрацией ХГч в сыворотке крови и числом активированных лимфоцитов у женщин с ПНБ. Возможно, именно ХГч является эндогенным иммуномодулятором, участвующим в индукции механизмов иммунологической толерантности к полуаллогенному плоду у женщин со скомпрометированной репродуктивной функцией. В пользу этого предположения свидетельствуют функциональный антагонизм ХГч и интерлейкина-2, а также антипролиферативная активность ХГч в эксперименте [3, 5]. В настоящее время ХГч рассматривают в качестве диагностического маркера и даже вероятного лечебного агента у женщин с ПНБ [2, 13].

Требуются дальнейшие исследования влияния ХГч на количество и функциональное состояние иммунокомпетентных клеток у женщин с ПНБ, которые позволят сделать вывод о перспективах диагностического и терапевтического использования ХГч при различных вариантах репродуктивной патологии у женщин.

1. Иммунный статус беременных женщин с ПНБ в анамнезе характеризуется снижением общего числа Т-лимфоцитов и увеличением доли NK-клеток в периферической крови, а также усилением экспрессии поздних маркеров активации иммунокомпетентных клеток.

2. Повышение концентрации в сыворотке крови прогестагенных факторов - прогестерона и α-фетопротеина - характерно для беременных женщин с ПНБ в анамнезе.

3. Обнаружена отрицательная корреляция между сывороточной концентрацией ХГч и экспрессией активационных маркеров лимфоцитами в периферической крови беременных женщин с ПНБ в анамнезе, но не с полноценной репродуктивной функцией.