2-Метоксигидроксибензол (син.: 2-метоксифенол, о-метоксифенол, 1-гидрокси-2-метоксибензол; далее по тексту — 2-МОГОБ) — органическое вещество природного или синтетического происхождения, проявляющее свойства анестетика и антиоксиданта [1—5].
2-МОГОБ применяется в стоматологии, органическом синтезе, а также как растворяющая среда для стероидов в ряде препаратов [6—8]. Это приоритетный экотоксикант [9, 10]. Субстанция 2-МОГОБ — бесцветные кристаллы или жидкость с ароматическим запахом и жгучим вкусом, способная темнеть на воздухе.
Молекулярная масса соединения — 124,13 а.е.м., брутто-формула С7Н8О2. Температура плавления 2-МОГОБ 28,5 °С; температура кипения 200—205 °С [5, 6, 11]. Растворимость в воде составляет 1,7% при температуре 17 °С [12]. Вещество легко растворимо в эфире, низших спиртах, хлороформе, растворах щелочей, уксусной кислоте [5]. В смеси с воздухом пары 2-МОГОБ взрывоопасны [13].
Данное соединение, попадая в организм теплокровных, способно оказывать токсическое действие. При пероральном введении LD50 2-МОГОБ для крыс составляет 520 мг/кг, наименьшая зарегистрированная летальная доза (LDLo) для человека 43 мг/кг [14, 15].
Описаны смертельные отравления людей данным веществом. Много летальных исходов отмечено при пероральном употреблении препаратов стероидов, в которых растворителем является 2-МОГОБ [16—19].
Все это объясняет важное судебно-химическое значение 2-МОГОБ. До настоящего времени данное соединение остается мало изученным в судебно-химическом отношении.
Цель исследования — разработка методики определения 2-метоксигидроксибензола в биологическом материале.
Материал и методы
Объект исследования — 2-метоксигидроксибензол (2-МОГОБ; фирма «Fluka», Швейцария), содержание основного компонента не менее 98%.
Изучали особенности изолирования 2-МОГОБ из биологического материала 13 жидкими изолирующими агентами неорганической и органической природы. Для этого готовили модельные смеси аналита с мелко измельченной (до 2—4 мм) тканью печени (содержание вещества 0,1%). Смеси сохраняли при температуре 18—22 °С в течение 1,5 ч [20, 21].
2-МОГОБ изолировали из модельных смесей тем или иным изолирующим агентом, настаивая двукратно (по 45 мин) при массовом отношении изолирующей жидкости и биоматериала 2:1 и периодическом перемешивании. Извлечения отделяли и объединяли. Затем 0,1 или 0,2 мл объединенного извлечения наносили на линию старта пластины «Сорбфил» ПТСХ-АФ-А-УФ и хроматографировали, используя подвижную фазу хлороформ-бензол (9:1). Хроматограммы проявляли в УФ-свете. 2-МОГОБ идентифицировали по величине Rf. Вещество элюировали из сорбента 95% этанолом (5 или 10 мл) и исследовали поглощение элюата в интервале длин волн 200—360 нм на приборе СФ-2000 («ЛОМО», Санкт-Петербург), используя кварцевые кюветы с толщиной рабочего слоя 1 см.
Идентификацию аналита проводили по положению максимумов полос поглощения. Количественное содержание устанавливали по величине оптической плотности, измеренной при λ=277 нм, используя уравнение градуировочного графика: А=0,019468∙С+0,016821. Затем проводили пересчет на навеску аналита, внесенную в биоматериал, выражая результат в миллиграммах и в процентах.
Оптимальным считали изолирующий агент, позволяющий извлечь из биоматериала наибольшие количества 2-МОГОБ. Определяли наиболее приемлемые условия изолирования оптимальным изолирующим агентом в зависимости от времени и кратности настаивания, отношения масс изолирующего агента и биоматрицы, уровня содержания в ней аналита.
Моделируя схему очистки извлеченного из биоматериала 2-МОГОБ, изучали особенности экстрагирования данного соединения из водных сред гидрофобными органическими жидкостями в зависимости от ряда факторов, а также особенности хроматографирования анализируемого вещества в колонке нормальнофазового сорбента (силикагель КСС-3 80/120 мкм).
Предварительную идентификацию 2-МОГОБ осуществляли методом ТСХ на пластинах «Сорбфил» ПТСХ-АФ-А-УФ. Для подтверждающей идентификации данного соединения применяли спектрофотометрию, ВЭЖХ и хромато-масс-спектрометрию (ГХ-МС).
Изучили особенности поглощения 2-МОГОБ электромагнитного излучения в УФ-области спектра (λ=200—360 нм).
Исследовали хроматографическое поведение анализируемого вещества в колонке (250×4,6 мм) «SunFire C18», размер частиц сорбента 5 мкм (Waters, Великобритания) с использованием подвижных фаз, включающих водный компонент и гидрофильный органический модификатор. Применяли жидкостный хроматограф «Waters» (Великобритания) с УФ-детектором.
Выявили оптимальные условия идентификации и количественного определения 2-МОГОБ методом ГХ-МС при использовании газового хроматографа «Agilent Technologies» 6850 (США) с масс-селективным детектором 5973 Network. Режим фрагментации молекул — электронный удар с энергией 70 эВ, регистрация сигнала по полному ионному току (задержка на растворитель 3,5 мин), сканирование в диапазоне 40—200 m/z. Определили область линейной зависимости площади хроматографического пика от содержания аналита в хроматографируемой пробе.
Результаты и обсуждение
Результаты сравнительного изолирования 2-МОГОБ из биологического материала (ткань печени) представлены на рис. 1. В наибольшей степени аналит извлекается гидролипофильными органическими растворителями, этилацетатом и смесями этилацетат-ацетон.
Рис. 1. Результаты сравнительного изолирования 2-метоксигидроксибензола из биоматериала различными растворителями.
Fig. 1. Results of comparative isolation of 2-methoxyhydroxybenzene (R,%) from biomaterial with various solvents.
Исследовали хроматографическую подвижность 2-МОГОБ и ряда близких структур в тонких слоях сорбента. Как видно из данных табл. 1, все подвижные фазы позволяют в той или иной степени дифференцировать аналит в присутствии близких структур.
Таблица 1. Результаты хроматографирования 2-МОГОБ и близких по структуре соединений в тонком слое гидроксилированного сорбента (пластины «Сорбфил» ПТСХ-АФ-А-УФ)
Table 1. The results of chromatography of 2-MOGOB and structurally similar compounds in a thin layer of hydroxylated sorbent (Sorbfil plates PTSX-AF-A-UV)
Подвижная фаза | 2-МОГОБ | 4-МОГОБ | ГОБ | 2-МО-4-АГОБ | ||||
компонент | ||||||||
объемные доли | Rf | Rs | Rf | Rs | Rf | Rs | Rf | Rs |
Гексан-пропанол-2 | ||||||||
8:2 | 0,87 | 0,98 | 0,93 | 1,05 | 0,89 | 1,00 | 0,89 | 1,00 |
5:5 | 0,90 | 1,00 | 0,89 | 0,99 | 0,90 | 1,00 | 0,89 | 0,99 |
2:8 | 0,86 | 1,00 | 0,86 | 1,00 | 0,86 | 1,00 | 0,86 | 1,00 |
Хлороформ-бензол | ||||||||
9:1 | 0,61 | 1,79 | 0,16 | 0,47 | 0,34 | 1,00 | 0,55 | 1,62 |
8:2 | 0,60 | 1,71 | 0,19 | 0,54 | 0,35 | 1,00 | 0,56 | 1,60 |
5:5 | 0,59 | 1,51 | 0,24 | 0,62 | 0,39 | 1,00 | 0,58 | 1,49 |
2:8 | 0,58 | 1,35 | 0,26 | 0,60 | 0,43 | 1,00 | 0,59 | 1,37 |
Гексан-диоксан-пропанол-2 | ||||||||
16:4:1 | 0,71 | 1,10 | 0,64 | 0,98 | 0,65 | 1,00 | 0,81 | 1,24 |
15:5:1 | 0,74 | 0,97 | 0,55 | 0,77 | 0,71 | 1,00 | 0,75 | 1,05 |
40:5:1 | 0,49 | 1,18 | 0,30 | 0,73 | 0,42 | 1,00 | 0,56 | 1,33 |
Гексан-этанол-этилацетат | ||||||||
10:10:1 | 0,71 | 1,39 | 0,73 | 1,42 | 0,51 | 1,00 | 0,71 | 1,39 |
20:1:1 | 0,75 | 1,27 | 0,52 | 0,88 | 0,59 | 1,00 | 0,77 | 1,29 |
Гексан-хлороформ-пропанол-2 | ||||||||
40:5:1 | 0,58 | 1,67 | 0,19 | 0,63 | 0,31 | 1,00 | 0,64 | 2,08 |
20:5:1 | 0,68 | 1,46 | 0,33 | 0,70 | 0,46 | 1,00 | 0,79 | 1,70 |
15:5:1 | 0,78 | 0,95 | 0,49 | 0,79 | 0,62 | 1,00 | 0,82 | 1,32 |
Примечание. 2-МОГОБ — 2-метоксигидроксибензол; 4-МОГОБ — 4-метоксигидроксибензол; ГОБ — гидроксибензол; 2-МО-4-АГОБ — 2-метокси-4-аллилгидроксибензол.
Изучение жидкость-жидкостной экстракции 2-МОГОБ из водных растворов показало влияние на степень извлечения рН среды водной фазы, природы экстрагента и присутствие в водном слое электролитов.
Хроматографирование методом ВЭЖХ свидетельствует о возможности достижения высоких значений числа теоретических тарелок при использовании элюентов, включающих ацетонитрил и кислотный буфер.
Для определения исследуемого вещества методом ГХ-МС выбрали капиллярную колонку DB-5 ms EVIDEX длиной 25 м и внутренним диаметром 0,2 мм со слоем неподвижной фазы 5%-фенил-95%-метилполисилоксана толщиной 0,33 мкм; газ-носитель — гелий. Количественное содержание аналита определяли по площади хроматографического пика его триметилсилильного производного, используя уравнение градуировочного графика: S=4065703∙C—14791, где S — площадь пика деривата на хроматограмме, С — условное количество 2-МОГОБ, соответствующее хроматографируемому количеству деривата. Интервал линейности 0,01—100 нг в хроматографируемой пробе. Коэффициент корреляции r>0,99.
Оптимальным (по степени извлечения) изолирующим агентом является смесь этилацетат-ацетон (7:3 по объему). Установили, что достаточно полное извлечение 2-МОГОБ из ткани печени смесью этилацетат-ацетон (7:3 по объему) достигается уже при двукратном настаивании, если массовое соотношение изолирующей жидкости и биоматериала составляет как минимум 2:1 (табл. 2), а продолжительность каждого настаивания не менее 30 мин (рис. 2).
Таблица 2. Зависимость изолирования 2-МОГОБ от кратности настаивания и соотношения «изолирующая смесь—биоматериал»
Table 2. The dependence of the isolation of 2-MOGOB on the infusion rate and the ratio of the insulating mixture — biomaterial
Масса модельной смеси, г | Содержание 2-МОГОБ в модельной смеси, мг | Масса изолирующего агента, г | Кратность настаивания | Найдено 2-МОГОБ | |
мг | % | ||||
25 | 25 | 25 | 1 | 9,54 | 38,15 |
2 | 5,15 | 20,61 | |||
1+2 | 14,69 | 58,76 | |||
3 | 1,95 | 7,80 | |||
1+2+3 | 16,64 | 66,56 | |||
4 | 0,86 | 3,43 | |||
1+2+3+4 | 17,50 | 69,99 | |||
25 | 25 | 50 | 1 | 16,62 | 66,46 |
2 | 4,99 | 19,94 | |||
1+2 | 21,60 | 86,40 | |||
3 | 0,63 | 2,51 | |||
1+2+3 | 22,23 | 88,91 | |||
4 | 0,33 | 1,32 | |||
1+2+3+4 | 22,56 | 90,23 | |||
25 | 25 | 62,5 | 1 | 17,61 | 70,45 |
2 | 4,76 | 19,03 | |||
1+2 | 22,37 | 89,48 | |||
3 | 0,42 | 1,68 | |||
1+2+3 | 22,79 | 91,16 | |||
4 | 0,30 | 1,20 | |||
1+2+3+4 | 23,09 | 92,36 | |||
25 | 25 | 75 | 1 | 18,72 | 74,87 |
2 | 4,30 | 17,19 | |||
1+2 | 23,02 | 92,06 | |||
3 | 0,36 | 1,42 | |||
1+2+3 | 23,37 | 93,48 | |||
4 | 0,26 | 1,04 | |||
1+2+3+4 | 23,63 | 94,52 | |||
25 | 25 | 100 | 1 | 19,79 | 79,16 |
2 | 4,20 | 16,81 | |||
1+2 | 23,99 | 95,97 | |||
3 | 0,28 | 1,13 | |||
1+2+3 | 24,28 | 97,10 | |||
4 | 0,19 | 0,77 | |||
1+2+3+4 | 24,47 | 97,87 |
Рис. 2. Зависимость степени извлечения 2-метоксигидроксибензола смесью этилацетат-ацетон (7:3) от продолжительности настаивания.
Fig. 2. The dependence of the degree of extraction of 2-methoxyhydroxybenzene with a mixture of ethyl acetate-acetone (7: 3) on the duration of infusion.
Очевидно, что 2-МОГОБ в молекулярной форме лучше всего экстрагируется из водных растворов pH 1,0—10,0 диэтиловым эфиром (степень однократной экстракции более 95%; r=1). В присутствии электролитов (NaCl, Na2SO4) степень извлечения возрастает на 3—4,5%. Наилучшие условия перехода 2-МОГОБ в форме фенолят-иона из органического слоя в водный наблюдаются при экстракции растворами pH ≥11,5.
На основе исследования хроматографического поведения 2-МОГОБ в полупрепаративной (200×10 мм) колонке нормальнофазового сорбента КСС-3 80/120 мкм можно заключить, что оптимальной подвижной фазой для элюирования рассматриваемого соединения в предлагаемых условиях является смесь растворителей гексан-диоксан-пропанол-2 (20:5:1) (полярность Р׳=1,15). Объем удерживания аналита при этом составляет 17 мл, наблюдается достаточно компактный выход вещества из колонки во фракциях элюата № 7—13 (13—26 мл).
Оптимальными для идентификации исследуемого вещества методом ТСХ следует считать подвижные фазы хлороформ-бензол (9:1; полярность Р׳=3,89), гексан-диоксан-пропанол-2 (40:5:1; полярность Р׳=0,69) и гексан-хлороформ-пропанол-2 (40:5:1; полярность Р׳=0,62). В дальнейшем для идентификации 2-МОГОБ методом ТСХ применяли подвижную фазу хлороформ-бензол (9:1).
По результатам изучения особенностей поглощения 2-МОГОБ УФ-излучения в качестве растворяющей среды для спектрофотометрического определения данного соединения выбран этанол. В спектре рассматриваемого соединения в среде этанола обнаруживаются две характерные полосы поглощения с максимумами в области 225±2 нм (молярный коэффициент поглощения 4754) и 277±2 нм (молярный коэффициент поглощения 3376).
Для идентификации 2-МОГОБ методом ВЭЖХ оптимальной подвижной фазой явилась смесь ацетонитрила с 0,025М раствором KH2PO4 (6:4). Установленная скорость подачи элюента 1 мл/мин, температура колонки 20 °С, оптическую плотность регистрировали при λ=277 нм. Время удерживания 2-МОГОБ в предлагаемых условиях составило 5,76 мин.
Определение аналита методом ГХ-МС проводили в виде его триметилсилильного производного после дериватизации N-триметилсилил-N-метилтрифторацетамидом (MSTFA): нагревание в течение 30 мин при температуре 60 °С в среде дихлорметана. Объем вводимой пробы — 4 мкл; режим введения пробы — деление потока 1:2.
Предложены условия определения: начальная температура колонки 70 °оС, она поддерживается 3 мин; затем проводят нагрев до температуры 290 °С со скоростью 20 °С в 1 мин, газ-носитель подается со скоростью 0,6 мл/мин, температура инжектора 250 °С, температура интерфейса 300 °С, температура квадруполя 150 °С.
Триметилсилильное производное 2-МОГОБ в предлагаемых условиях определения удерживалось в неподвижной фазе 8,58 мин. В масс-спектре деривата присутствуют характеристические ионы 45, 58, 73, 91, 107, 136, 151, 166, 181, 196 m/z. Таким образом, идентификация 2-МОГОБ методом ГХ-МС возможна по сочетанию времени удерживания его триметилсилильного производного и специфического набора сигналов характеристических заряженных частиц в масс-спектре деривата.
Зависимость площади пика триметилсилильного деривата аналита от условного содержания аналита в хроматографируемой пробе имеет линейный характер в широком (5 порядков) диапазоне концентраций.
Значения предела обнаружения и предела количественного определения 2-МОГОБ составляют соответственно 0,5·10–11 и 1,0·10–11 г в пересчете на хроматографируемое количество деривата.
Предлагаемая схема исследования биологического материала
Изолирование. 25 г измельченного (размер частиц 0,5 см и менее) биологического объекта настаивают дважды по 30 мин при периодическом перемешивании с порциями смеси этилацетат-ацетон (7:3) массой 50 г каждая. Извлечения отделяют, объединяют, пропускают через стеклянный фильтр диаметром 4 см со слоем безводного Na2SO4 высотой 1,5—2,0 см; слой Na2SO4 промывают 20 г смеси этилацетат-ацетон (7:3). Фильтраты объединяют, упаривают в токе воздуха при температуре 18—22 °С до 0,5—1,0 мл, а затем в токе азота до полного удаления растворителя.
Очистка. Остаток, полученный по завершении изолирования, растворяют в 10 мл гексана, экстрагируют буферным раствором pH 12,0—13,0 (10 мл×2). Экстракты объединяют, подкисляют 24% раствором HCl до pH 2,0—3,0, насыщают Na2SO4 и экстрагируют диэтиловым эфиром (20 мл×2). Экстракты объединяют, пропускают через стеклянный фильтр диаметром 4 см со слоем безводного натрия сульфата высотой 1,5—2,0 см, фильтр промывают 20 мл диэтилового эфира. Фильтраты объединяют, упаривают в токе воздуха при температуре 18—22 °С до 0,5—1,0 мл, а затем в токе азота до полного удаления растворителя.
Остаток растворяют в 2,0—2,5 мл смеси гексан-диоксан-пропанол-2 (20:5:1) и вносят раствор в полупрепаративную (200×10 мм) колонку силикагеля КСС-3 80/120 мкм. Аналит элюируют смесью гексан-диоксан-пропанол-2 (20:5:1). Элюат собирают фракциями по 2 мл. Фракции с 7-й по 13-ю включительно объединяют, растворитель испаряют вначале в токе воздуха до 0,5—1,0 мл, а затем в токе азота до полного испарения растворителя. Остаток растворяют в 10 мл ацетона. В три выпарительные чашки (№ 1—3) вносят соответственно 0,1—2,5; 4 и 0,1—2,5 мл этого раствора и испаряют растворитель.
Идентификация методом ТСХ. Остаток в чашке № 1 растворяют в 0,4—0,5 мл ацетона и наносят на линию старта пластины «Сорбфил» ПТСХ-АФ-А-УФ. Хроматографируют, используя подвижную фазу хлороформ-бензол (9:1). Хроматограммы проявляют в УФ-лучах и идентифицируют аналит по величине Rf, совпадающей с таковой вещества-свидетеля (0,61±0,02).
Идентификация по УФ-спектру. После определения методом ТСХ пятно вещества вырезают из хроматограммы, элюируют вещество из сорбента 5 (10) мл 95% этанола в течение 15 мин и исследуют поглощение элюата в диапазоне λ=200—360 нм. Вещество идентифицируют по форме спектральной кривой и положению максимумов поглощения (225±2, 277±2 нм).
Идентификация методом ВЭЖХ. Остаток в чашке № 2 растворяют в 6 мл ацетонитрила, переносят в мерную колбу вместимостью 10 мл и доводят содержимое колбы 0,025 М раствором NaH2PO4 до метки. При необходимости раствор разбавляют смесью ацетонитрил-0,025 М раствор NaH2PO4 (6:4). Затем 4 мкл полученного раствора вводят в хроматограф. Хроматографируют, используя подвижную фазу ацетонитрил-0,025 М раствор NaH2PO4 (6:4) по описанной ранее схеме.
2-МОГОБ идентифицируют по времени удерживания.
Идентификация и количественное определение методом ГХ-МС. Сухой остаток из выпарительной чашки № 3 растворяют в 10 мл дихлорметана. При необходимости раствор разбавляют дихлорметаном. Далее 0,1 мл полученного раствора помещают во вставку (микропробирку) вместимостью 200 мкл (0,2 мл); вставку опускают в стандартный самплерный флакон из прозрачного стекла вместимостью 1,5 мл; к раствору в пробирке прибавляют 0,02 мл MSTFA и нагревают флакон в течение 30 мин при температуре 60 °С. Содержимое микропробирки вместе с триметилсилильным производным 2-МОГОБ с помощью микрошприца переносят в мерную колбу вместимостью 5 мл, 3—4 раза промывают микропробирку порциями дихлорметана по 150 мкл каждая, внося порции промывной жидкости в эту же мерную колбу, и доводят содержимое колбы дихлорметаном до метки. Затем 4 мкл полученного раствора вводят в испаритель газового хроматографа в режиме деления потока 1:2. Процесс определения проводят в описанных ранее условиях. Аналит идентифицируют по времени удерживания его триметилсилильного производного и специфическому набору сигналов осколков в масс-спектре деривата.
На рис. 3 и 4 приведены соответственно хроматограмма извлеченного из биоматрицы аналита и масс-спектры 2-МОГОБ (стандарт и выделенный из ткани печени). Полученные данные свидетельствуют о совпадении масс-спектров анализируемого и стандартного веществ не менее чем на 86%.
Рис. 3. Хроматограмма (метод ГХ-МС) триметилсилильного производного 2-метоксигидроксибензола, извлеченного из ткани печени и очищенного по предлагаемой схеме.
Fig. 3. Chromatogram (GC-MS method) of a trimethylsilyl derivative of 2-methoxyhydroxybenzene extracted from liver tissue and purified according to the proposed scheme.
Рис. 4. Масс-спектры триметилсилильного производного 2-метоксигидроксибензола стандартного вещества (а) и вещества, извлеченного из ткани печени и очищенного по предлагаемой схеме (б).
Fig. 4. Mass spectra of the trimethylsilyl derivative of 2-methoxy-hydroxybenzene: a — standard substance, b — substance extracted from liver tissue and purified according to the proposed scheme.
Содержание аналита рассчитывали исходя из площади хроматографического пика по уравнению градуировочного графика. Результаты определения 2-МОГОБ (табл. 3).
Таблица 3. Результаты количественного определения 2-МОГОБ в модельных смесях с биологическим материалом (ткань печени)
Table 3. The results of the quantitative determination of 2-MOGOB in model mixtures with biological material (liver tissue)
Внесено 2-МОГОБ в 25 г биологического объекта, мг | Найдено 2-МОГОБ,% (n=5; р=0,95) | ||||
x | S | Sr | Sx | Dx | |
12,5 | 86,03 | 4,74 | 5,51 | 2,12 | 5,89 |
2,5 | 85,67 | 4,60 | 5,37 | 2,06 | 5,72 |
0,5 | 84,90 | 5,12 | 6,03 | 2,29 | 6,37 |
0,05 | 83,58 | 6,10 | 7,30 | 2,73 | 7,58 |
0,005 | 82,16 | 6,48 | 7,89 | 2,90 | 8,06 |
0,0004 | 80,75 | 6,81 | 8,43 | 3,05 | 8,47 |
0,0002 | 79,34 | 7,75 | 9,77 | 3,47 | 9,64 |
Разработанная методика характеризуется высокой степенью извлечения 2-МОГОБ из биологического объекта (ткань печени) — 79,34—86,03% при концентрации анализируемого вещества в биоматериале 8,0∙10–7—5,0∙10–2%. Значения открываемого и определяемого минимумов 2-МОГОБ в ткани печени составляют соответственно 0,008 и 0,016 мг в 100 г биологического объекта.
Методика по ряду основных валидационных характеристик (линейность, селективности, правильность, прецизионность, открываемый минимум) показала соответствие критериям, принятым для биоаналитических методик.
Заключение
Для изолирования 2-метоксигидроксибензола из биологического материала предложено двукратное настаивание со смесью этилацетат-ацетон (7:3) при массовом отношении изолирующей жидкости и биологического объекта 2:1 и длительности каждого настаивания 30 мин.
Необходимый уровень очистки извлечений достигается сочетанием жидкость-жидкостной экстракции и хроматографии в колонке силикагеля КСС-3 80/120 мкм (элюент — гексан-диоксан-пропанол-2 в соотношении 20:5:1).
Идентификацию аналита в извлечениях проводили методами ТСХ, УФ-спектрофотометрии, ВЭЖХ и ГХ-МС. Для количественной оценки извлеченного 2-МОГОБ использовали ГХ-МС. Определяемый минимум — 0,015 мг в 100 г биоматериала.
Проведенная валидация методики определения 2-МОГОБ в биологическом материале показала ее соответствие критериям линейности, селективности, правильности, селективности и стабильности.
Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
The authors declare no conflicts of interest.