Сайт издательства «Медиа Сфера»
содержит материалы, предназначенные исключительно для работников здравоохранения. Закрывая это сообщение, Вы подтверждаете, что являетесь дипломированным медицинским работником или студентом медицинского образовательного учреждения.

Чеботарева Н.В.

ГБОУ ВПО «Российский университет Дружбы народов» Минздрава Российской Федерации, Москва, Россия, 117198

Бобкова И.Н.

Отдел нефрологии НИИ уронефрологии и репродуктивного здоровья человека Первого МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России

Непринцева Н.В.

ГБОУ ВПО "Первый МГМУ им. И.М. Сеченова" Минздрава России, Москва

Козловская Л.В.

Первый Московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова

Малкандуева З.Т.

ГБОУ ВПО «Первый МГМУ им. И.М. Сеченова» Минздрава России, Москва, Россия

Мочевые биомаркеры повреждения подоцитов: значение для оценки течения и прогноза хронического гломерулонефрита

Авторы:

Чеботарева Н.В., Бобкова И.Н., Непринцева Н.В., Козловская Л.В., Малкандуева З.Т.

Подробнее об авторах

Журнал: Терапевтический архив. 2015;87(6): 34‑39

Просмотров: 1592

Загрузок: 810


Как цитировать:

Чеботарева Н.В., Бобкова И.Н., Непринцева Н.В., Козловская Л.В., Малкандуева З.Т. Мочевые биомаркеры повреждения подоцитов: значение для оценки течения и прогноза хронического гломерулонефрита. Терапевтический архив. 2015;87(6):34‑39.
Chebotareva NV, Bobkova IN, Neprintseva NV, Kozlovskaia LV, Malkandueva ZT. Urinary biomarkers for podocyte injury: Significance for evaluating the course and prognosis of chronic glomerulonephritis. Therapeutic Archive. 2015;87(6):34‑39. (In Russ.)

Рекомендуем статьи по данной теме:
Вли­яние этил­ме­тил­гид­рок­си­пи­ри­ди­на сук­ци­на­та на па­ра­мет­ры хро­ни­чес­ко­го ней­ро­вос­па­ле­ния и плас­ти­чес­ких про­цес­сов в моз­ге ста­рых крыс при кур­со­вом вве­де­нии дек­са­ме­та­зо­на. Жур­нал нев­ро­ло­гии и пси­хи­ат­рии им. С.С. Кор­са­ко­ва. 2024;(9):115-121

АГ — артериальная гипертония

АД — артериальное давление

БМИ — болезнь минимальных изменений

БМК — базальная мембрана клубочков

БТШ-27 — 27-й белок теплового шока

ГН — гломерулонефрит

ГС — гломерулосклероз

ДП — дисфункция подоцитов

МН — мембранозная нефропатия

МС — мочевой синдром

НС — нефротический синдром

НУ — нефринурия

ОНС — остронефритический синдром

ПД — подоциты

ПУ — протеинурия

ПЦУ — подоцитурия

СКФ — скорость клубочковой фильтрации

ФСГС — фокальный сегментарный гломерулосклероз

ХГН — хронический гломерулонефрит

VEGF — фактор роста эндотелия сосудов

WT-1 — антиген опухоли Вильмса

α-ФНО — α-фактор некроза опухоли

В последние годы в экспериментальных моделях хронического гломерулонефрита (ХГН), а также в клинических исследованиях показано, что повреждение подоцита (ПД) — ключевого компонента клубочкового фильтрационного барьера — является универсальным механизмом развития протеинурии (ПУ) и формирования гломерулосклероза (ГС) независимо от морфологического варианта нефрита [1]. ПД формируют щелевидную мембрану, участвуют в регуляции внутриклубочкового гидростатического давления, поддерживают структуру и функцию соседних клеток и базальной мембраны клубочков (БМК). Типичными изменениями ПД, а при повреждении являются сглаживание его ножек с распластыванием цитоплазмы вдоль БМК, отщепление отдельных структурных белков [2]. При более длительном воздействии на ПД повреждающих факторов активируются механизмы апоптоза, наблюдается отслоение подоцитов от БМК с их экскрецией в мочевое пространство (подоцитурия — ПЦУ), образуются дефекты фильтрационного барьера, что лежит в основе развития ПУ и нефротического синдрома (НС) [3]. В связи с ограниченной способностью ПД к пролиферации их потеря более 20% (подоцитопения) способствует формированию синехий между капиллярными петлями и капсулой клубочка и в конечном счете ведет к развитию ГС и ухудшению функции почек [4].

В свете общепринятой концепции повреждения ПД как детерминанты развития ПУ и прогрессирующего повреждения клубочков особое значение приобретают методы неинвазивной оценки дисфункции ПД с использованием мочевых тестов.

Цель исследования: у больных с различными вариантами ХГН оценить выраженность повреждения ПД по уровню подоцитарных маркеров в моче и определить значение этих показателей как критериев активности и прогноза заболевания.

Материалы и методы

Обследовали 75 больных с различными формами ХГН: 37 (49%) женщин и 38 (51%) мужчин в возрасте от 18 до 74 лет, средний возраст 41,6 (27; 55) года. Контрольную группу составили 10 здоровых лиц, сопоставимых по полу и возрасту с обследованными пациентами. Морфологически диагноз подтвержден у 48 больных: у 14 выявлен мезангиопролиферативный ГН, у 5 — мезангиокапиллярный ГН, у 10 — мембранозная нефропатия (МН), у 5 — болезнь минимальных изменений (БМИ), у 5 — фокальный сегментарный ГС (ФСГС), у 9 — нефросклероз.

Результаты исследования молекулярных медиаторов сравнивали в 3 группах больных, различающихся по степени активности ХГН и выраженности нарушений функции почек.

В 1-ю группу вошли 20 пациентов с неактивным течением заболевания: 15 с латентным ХГН, 5 с полной ремиссией ХГН после успешной иммуносупрессивной терапии. У больных этой группы выявлялась ПУ около 1 (0,76 (0,27; 1,1)) г/сут, у 10 из них изолированная, а у остальных — в сочетании с умеренной эритроцитурией. Функция почек у 13 больных оставалась сохранной, у 7 отмечалось стойкое снижение скорости клубочковой фильтрации (СКФ) до 62 (55; 71) мл/мин и повышение концентрации креатинина в сыворотке крови до 1,4 (1,3; 1,89) мг/дл. Артериальная гипертония (АГ) при артериальном давлении (АД) от 150/100 до 220/120 мм рт.ст. наблюдалась у 6 пациентов.

Во 2-ю группу включены 23 пациента с выраженным мочевым синдромом (МС): 18 больных, у которых ХГН изначально протекал с МС и персистировал в течение 2 (1; 7) мес, а также 5 больных, у которых МС был результатом неполной ремиссии Н.С. Клинически 2-я группа больных ХГН характеризовалась ПУ 1—3 (2,0 (1,74; 3,0) г/сут; у 11 больных выявлялась изолированная ПУ субнефротического уровня, у 12 — ПУ сочеталась с умеренной эритроцитурией. Функция почек у 13 больных была в пределах нормы, у 10 отмечалось стойкое нарушение функции почек — СКФ 44,5 (36; 76) мл/мин, креатинин 1,72 (1,34; 2,13) мг/дл. АГ при АД от 150/90 до 180/100 мм рт.ст. выявлялась у 10 больных.

В 3-ю группу вошли 30 больных с НС, включая 16 с умеренным НС (ПУ 7,51 (4,8; 9,16) г/сут) и 7 с тяжелым НС: анасарка, гипоальбуминемия менее 20 г/л, ПУ 11,6 (8,35; 18,6) г/сут; у 7 пациентов НС сочетался с остронефритическим синдромом (ОНС): АГ, эритроцитурия, преходящее нарушение функции почек — креатинин от 1,27 до 3,22 (1,71 (1,35; 1,99)) мг/дл. У 8 больных 3-й группы наряду с сохраняющейся активностью ХГН — ПУ 7,52 (4; 12,0) г/сут — отмечалась стойкая дисфункция почек — СКФ 43 (35; 67) мл/мин, креатинин 1,8 (1,41; 2,44) мг/дл, а также высокая АГ (АД максимально до 220/100 мм рт.ст.).

Наряду с общеклиническим обследованием методом непрямого иммуноферментного анализа (ELISA) проведена оценка уровней в моче следующих показателей: нефрина (основного структурно-функционального белка подоцитов), интерлейкина-6 (ИЛ-6; ведущего провоспалительного цитокина), белка теплового шока-27 (БТШ-27; защитного белка-шаперона клеточного происхождения), каспазы-9 (маркера апоптоза), фактора роста эндотелия сосудов (VEGF), регулирующего проницаемость клубочкового фильтра, а также выживаемость ПД.

Помимо того, исследована ПЦУ методом цитофлоуметрии осадка мочи с подсчетом количества ПД (целых клеток и их фрагментов), меченных антителами к подокаликсину (Pdx).

Исследуемые показатели экскреции стандартизованы по концентрации креатинина в утренней порции мочи.

В ткани почки с использованием иммуногистохимического метода оценили выраженность подоцитопении, проведя подсчет ПД, меченных антителами к их ядерному маркеру — антигену опухоли Вильмса (WT-1). В качестве контроля использованы образцы ткани почек, удаленных в связи с урологическими причинами, при исследовании которых не выявлено патологии клубочков.

Статистический анализ данных проводили с применением стандартных методик с помощью программы Statistica 6,0. Для сравнения 2 групп использовали непараметрический критерий Манна—Уитни. Корреляционный анализ проводили методом ранговой корреляции Спирмена.

Результаты

Мы изучили экскрецию с мочой основных маркеров ДП, в частности структурно-функционального белка нефрина. Уровень нефринурии (НУ) в группах больных c активными протеинурическими формами ХГН (2-я и 3-я группы) оказался выше, чем у больных с неактивным течением заболевания и у здоровых лиц, — 14,2 (9,45;22,5), 7,9 (1,7; 9,5) и 7,25 (5,4; 9,8) нг/мл соответственно (p<0,05). У больных с НС (3-я группа) НУ была значительно выше, чем у пациентов с субнефротической ПУ (2-я группа) (табл. 1). Установлена достоверная прямая корреляция (Rs=0,27; p<0,05) между НУ и суточной ПУ у больных ХГН 2-й и 3-й групп. По нашим данным, у больных с активным течением ХГН при наличии АГ величина НУ достоверно выше, чем у пациентов с нормальным АД, — 16,1 (12,5; 27,8) и 10 (8,4; 14,6) нг/мл соответственно (p<0,01). Выявлена прямая корреляция между НУ и средним АД (2-я и 3-я группы Rs=0,3; p=0,032).

Таблица 1. Уровень подоцитарных маркеров в моче у больных ХГН Примечание. * — р<0,05; ** — р<0,01.

Наряду с уровнем в моче нефрина — специфического для ПД белка мы изучили экскрецию с мочой самих П.Д. Подобно Н.У. у больных с ХГН и НС (3-я группа) этот показатель достоверно превышал таковой у пациентов с субнефротической ПУ (2-я группа) (см. табл. 1). Наиболее высокие уровни ПУ отмечены у больных с тяжелым НС — 16 (3,2; 38,3) кл/мкл против 6,8 (1,5; 14,5) кл/мкл у пациентов с умеренным НС (p<0,05).

Помимо общепринятых маркеров повреждения ПД мы изучили экскрецию с мочой БТШ-27 — одного из основных внутриклеточных защитных белков. Его синтез индуцируется в клетках, в том числе в ПД, в ответ на повреждение, отражая степень клеточного «стресса». Уровень БТШ-27 в моче больных ХГН увеличивался от 1-й к 3-й группе (см. табл. 1). У больных с тяжелым НС уровень мочевой экскреции БТШ-27 достоверно выше, чем у пациентов с умеренным НС, — 1,35 (0,93; 4,02) и 0,84 (0,71; 1,81) нг/мл соответственно (p<0,05). Установлена достоверная прямая корреляция между уровнем БТШ-27 в моче больных с НС и суточной ПУ (Rs=0,40; p<0,05) и обратная — между уровнем в моче БТШ-27 и альбумином в сыворотке крови (Rs=–0,36; p<0,05).

Различия между морфологическими формами ХГН по НУ и ПЦУ, а также экскреции БТШ-27 с мочой недостоверны, решающую роль играла выраженность НС.

Между изученными нами показателями (ПЦУ, НУ, уровень в моче БТШ-27) выявлены достоверные корреляции, наиболее сильные у больных с НС, что свидетельствует в пользу их значения как патогенетически связанных маркеров ДП (табл. 2).

Таблица 2. Взаимосвязь показателей повреждения подоцитов у больных ХГН с НС

Помимо маркеров повреждения ПД мы оценили экскрецию с мочой одного из основных провоспалительных цитокинов — ИЛ-6. У пациентов с НС (3-я группа) уровень экскреции ИЛ-6 с мочой оказался достоверно выше, чем у пациентов 2-й группы без НС, — 9,97 (1,95; 25,6) и 5,44 (1,3; 12,8) нг/мл соответственно (p<0,05). При этом нами установлены достоверные прямые корреляции между величиной ПЦУ, мочевыми показателями БТШ-27 и ИЛ-6 (Rs=0,39; p<0,05 и Rs=0,2; p<0,05 соответственно). Наиболее сильные связи между этими маркерами отмечены в группе больных ХГН с НС (Rs=0,61; p<0,01 и Rs=0,44; p<0,05 соответственно), что указывает на сопряженное развитие ДП и иммунного воспаления в клубочках почек и подчеркивает роль этих процессов в формировании НС у больных ХГН.

В эксперименте на различных моделях протеинурических нефропатий подтверждено большое значение апоптоза в механизмах потери ПД в клубочках почек и в развитии подоцитопении. Мы изучили экскрецию с мочой маркера апоптоза каспазы-9. У больных ХГН с НС экскреция каспазы-9 с мочой достоверно выше, чем у пациентов без НС, и именно в группе с НС выявлялись самые высокие уровни НУ и ПЦУ (см. табл. 1).

В сопоставлении с НУ мы изучили уровень экскреции с мочой ангиогенного фактора VEGF, оказывающего антиапоптотическое действие в эндотелиальных клетках и ПД. В нашем исследовании по мере нарастания НУ у больных с НС отмечалось повышение экскреции с мочой VEGF, в то время как у больных с прогрессирующим течением заболевания, характеризующимся высокой ПУ и нарушением функции почек, уровень VEGF в моче резко снижался (рис. 1).

Рис. 1. Соотношение экскреции с мочой VEGF и нефрина у больных ХГН. ПН — почечная недостаточность.

При иммуногистохимическом исследовании биоптатов ткани почек больных ХГН мы выявили уменьшение количества меченных WT1 ПД в клубочке у больных ХГН 2-й и 3-й групп, особенно выраженное (>50% от нормы) у пациентов с торпидным течением Н.С. Это отражает наиболее значительную потерю ПД в клубочках почек у больных данной категории. Выявлена достоверная обратная корреляция между числом меченных WT1 ПД в клубочке и выраженностью ПЦУ (Rs=–0,39; p<0,01) (рис. 2).

Рис. 2. Оценка выраженности подоцитопении по экспрессии WT-1 в ткани почки у 48 больных ХГН.

Для оценки прогностического значения изученных биомаркеров повреждения ПД мы проанализировали ответ на иммуносупрессивную терапию у 55 больных с ХГН и НС в зависимости от исходного уровня НУ и ПЦУ. По нашим данным, купирование НС и достижение ремиссии нефрита в течение ближайших 6 мес наблюдались у больных с меньшими показателями ПЦУ (<20 клеток/мкл) и НУ (<17 нг/мл). В то же время у 70% больных с высокими исходными уровнями ПЦУ (>20 клеток/мкл) и НУ (>17 нг/мл) НС характеризовался торпидным течением, несмотря на применение рекомендованных схем иммуносупрессивной терапии в течение длительного срока (от 9 мес до 3 лет) (рис. 3).

Рис. 3. Ответ на иммуносупрессивную терапию у 55 больных ХГН с НС в зависимости от исходного уровня подоцитарных биомаркеров. PDX/мкл — количество окрашенных подокаликсином частиц в микролитре осадка мочи. p<0,001 — для различий между группами. а — ПУ; б — НУ.

Обсуждение

Установлено, что изменение структуры и функции ПД (подоцитопатия), ранее считавшееся специфическим признаком болезни БМИ, встречается при различных формах гломерулонефрита (ГН) и других нефропатиях [5]. Выполняя важную роль в поддержании структуры и функции почечного клубочка в норме, ПД имеют первостепенное значение при повреждении клубочка и прогрессировании заболевания почек. В эксперименте показано, что появление и нарастание в моче маркеров повреждения ПД служит более чувствительным, чем ПУ, показателем активности болезни [6].

Своеобразной «платформой» передачи сигналов, необходимых для поддержания функций ПД (правильной организации цитоскелета, поляризации, эндоцитоза, дифференцировки, ограничения пролиферации и жизнеспособности клетки в целом), служит межподоцитарная щелевая диафрагма [7]. Стереотипной реакцией ПД на разнообразные повреждающие факторы (иммунные, гемодинамические, метаболические) является снижение экспрессии структурных белков щелевой диафрагмы и интегринов, что приводит к изменениям цитоскелета, формы ножек ПД, нарушению адгезии к БМК со слущиванием ПД в мочевое пространство, в результате чего нарушается барьерная функция ПД, развивается ПУ [8]. В моче пациентов с различными формами ГН обнаруживаются специфические для ПД белки, а также сами П.Д. Часть П.Д., выявляемых в моче, еще сохраняют жизнеспособность, что подтверждено возможностью их выращивания при помещении в культуральную среду, а часть ПД, экскретируемых с мочой, находятся в состоянии апоптоза [9].

В проведенном нами исследовании показатели НУ и ПЦУ изменялись однонаправлено и были достоверно выше у больных с активным течением ГН, коррелируя с выраженностью П.У. Наиболее высокие уровни маркеров ДП мы выявили у больных с прогрессирующим течением нефрита — сочетанием НС и ОНС, быстропрогрессирующей почечной недостаточностью, т. е. яркими клиническими проявлениями активного иммунного воспаления, приводящего к распространенному повреждению ПД.

Мы показали, что уровни ПЦУ и НУ сопоставимы при различных морфологических формах нефрита, и это позволяет рассматривать изученные показатели как универсальные маркеры повреждения П.Д. Выявленные нами закономерности изменения НУ согласуются с данными литературы об уменьшении экспрессии нефрина в ткани почки при активных нефропатиях независимо от их морфологической формы (болезнь БМИ, ФСГС, МН, мезангиальные формы ГН, волчаночный нефрит, диабетическая нефропатия) [8].

В настоящее время среди маркеров повреждения богатых актином клеток, в том числе ПД, рассматривают БТШ-27 [1]. В физиологических условиях этот белок, располагаясь внутриклеточно, не связан с волокнами актина. Под влиянием повреждающих факторов олигомеры БТШ-27 объединяются в ПД с актиновыми микрофиламентами и способствуют их стабилизации, чтобы противостоять стрессовому изменению клеточного цитосклета [10]. Показано, что наибольшей защитной активностью обладают нефосфорилированные олигомеры БТШ-27. Фосфорилирование БТШ-27 с помощью р38-МАР-киназы влечет потерю связи с актиновыми микрофиламентами, ремоделирование актиновой сети, агрегацию и перераспределение микроволокон в клетке и распластыванию ножек ПД, что рассматривают как патофизиологическую основу нарушения проницаемости клубочков [11].

В нашем исследовании уровень защитного БТШ-27 в моче был выше у пациентов с НС, особенно при тяжелом его течении, и прямо коррелировал с выраженностью ПУ, что находит объяснение в свете современных представлений об участии этого белка в регулировании формы ножек ПД — одного из ключевых звеньев развития нефротической П.У. Об этом свидетельствует и выявленная нами прямая корреляция мочевого уровня БТШ-27 с выраженностью повреждения ПД, в частности с ПЦУ.

Поскольку БТШ-27 является внутриклеточным протективным фактором, его выход из клеток и высокая экскреция с мочой у больных с тяжелым течением ХГН могут рассматриваться как свидетельство напряженности и несостоятельности внутриклеточной самозащиты на территории П.Д. Это также подтверждает выявленное нами у больных активным ХГН (особенно с НС) повышение уровней в моче провоспалительного ИЛ-6 и защитного БТШ-27, коррелирующие с выраженностью ПЦУ.

Наши данные согласуются с результатами проведенных ранее экспериментальных работ, продемонстрировавших роль провоспалительных медиаторов, продуцируемых клетками клубочка, в том числе ИЛ-6 и α-фактора некроза опухоли (α-ФНО), в развитии повреждения ПД при протеинурических формах ХГН [12].

Основной источник ИЛ-6 в моче больных ХГН в настоящее время остается предметом изучения. Клетки мезангия, а также макрофаги, лимфоциты и эндотелиальные клетки могут секретировать ИЛ-6 в ответ на воздействие факторов воспаления [13]. Однако в биоптатах почек пациентов со значительной мочевой экскрецией ИЛ-6 не находят мононуклеарных и лимфоцитарных инфильтратов, что предполагает наличие и другого источника этого фактора [14]. Полагают, что таким источником ИЛ-6 могут быть П.Д. Так, в работе К. Lai и соавт. [15] на культуре клеток показано, что ПД имеют рецепторы к основным провоспалительным цитокинам и при активации сами могут продуцировать ИЛ-6 и α-ФНО, являясь не только объектом повреждения, но и активным участником воспаления в клубочках почек.

У обследованных пациентов мы оценили уровень в моче каспазы-9 — маркера, отражающего интенсивность процесса апоптоза клеток почки, и сопоставили его с показателем повреждения ПД — Н.У. Отмечено одновременное увеличение экскреции с мочой этих биомаркеров по мере нарастания активности нефрита, что указывает на сопряженность процессов апоптоза и повреждения ПД, участвующих в развитии ПУ.

Мы также сопоставили уровень НУ и экскреции с мочой VEGF, оказывающего антиапоптотическое действие. По данным эксперимента, он продуцируется ПД, поддерживает структуру и функцию эндотелиального монослоя и самих ПД, способствуя, таким образом, сохранению целостности фильтрационного барьера [16]. У больных с прогрессирующим течением нефрита с нарушением функции почек мы отметили резкое снижение экскреции с мочой VEGF при неуклонно нарастающей НУ. В экспериментальных работах показано, что нарушение фосфорилирования нефрина в условиях дефицита VEGF ослабляет связывание нефрина с ПД, в результате чего внеклеточная часть молекулы нефрина отщепляется от мембраны ПД и экскретируется с мочой [16]. Так, A. Hara и соавт. [17] продемонстрировали, что дефицит VEGF у здоровых крыс приводит к развитию артериальной гипертонии и умеренной ПУ, а при анти-БМК-нефрите — к более тяжелому его течению с массивной ПУ вследствие повреждения П.Д. Усиление процессов повреждения ПД и истощение продукции VEGF у больных с прогрессирующими формами ХГН в нашем исследовании можно рассматривать как отражение дисбаланса механизмов апоптоза и выживаемости ПД с последующей прогрессирующей их потерей и развитием подоцитопении.

По данным многочисленных экспериментальных и клинических исследований, число ПД в клубочках служит основной детерминантой развития ГС [4, 18]. Так как ПД являются высокодифференцированными клетками с ограниченным пролиферативным потенциалом, уменьшение их числа приводит к необратимому дефекту клубочкового фильтра, способствует формированию синехий между капиллярными петлями и капсулой клубочка почки и является пусковым механизмом для начала склерозирования клубочков. В нашем исследовании с помощью иммуногистохимического метода мы подтвердили прогрессирующую потерю ПД (по степени экспрессии WT-1) в клубочках почек у пациентов с НС, особенно при торпидном его течении. Эти изменения сопровождались высокой экскрецией с мочой маркеров повреждения ПД (НУ, ПЦУ, БТШ-27). Это обосновывает возможность применения подоцитарных маркеров для мониторирования течения активных протеинурических форм ХГН, оценки риска прогрессирования, прогнозирования ответа на лечение. Так, мы установили, что у большинства больных с высоким уровнем маркеров повреждения ПД (ПЦУ и НУ) в течение ближайших 6 мес не удавалось купировать НС и достичь ремиссии нефрита, несмотря на проведение рекомендованной для этих видов нефрита иммуносупрессивной терапии.

Заключение

Таким образом, процессы повреждения и самозащиты, обусловленные общностью клеточно-молекулярных взаимодействий, протекают одновременно на территории структурно-функциональной единицы клубочка — П.Д. Повреждение П.Д. вследствие дисбаланса этих противодействующих систем является универсальным механизмом развития протеинурии и формирования ГС независимо от формы Г.Н. Повышение маркеров ДП наряду со снижением показателей самозащиты ПД отражают риск дальнейшего прогрессирования заболевания и являются факторами неблагоприятного прогноза.

Подтверждение e-mail

На test@yandex.ru отправлено письмо со ссылкой для подтверждения e-mail. Перейдите по ссылке из письма, чтобы завершить регистрацию на сайте.

Подтверждение e-mail



Мы используем файлы cооkies для улучшения работы сайта. Оставаясь на нашем сайте, вы соглашаетесь с условиями использования файлов cооkies. Чтобы ознакомиться с нашими Положениями о конфиденциальности и об использовании файлов cookie, нажмите здесь.