В этиологии среднего отита значительная роль отводится микроорганизмам, которые могут проникать в барабанную полость гематогенным путем, из наружного слухового прохода, а также со слизистой оболочки носа и носоглотки [1-3]. Вместе с тем известно, что гнойный экссудат барабанной полости больных средним отитом может быть представлен как монофлорой, так и полифлорой [4, 5].
Цель работы - изучить видовой состав микрофлоры гнойного экссудата барабанной полости в процессе развития экспериментального стафилококкового гнойного среднего отита (ЭСГСО) и определить исходные места миграции вторичных патогенов.
Материал и методы
Работа выполнена на 20 взрослых кроликах породы шиншилла весом от 2 до 3 кг. У 17 из них воспроизведен отит. Контрольную группу составили 3 здоровых кролика. При воспроизведении острого среднего отита за основу была взята методика Я.Л. Готлиба [6] в модификации В.А. Долгова [7], в качестве инфекционного агента использовался штамм золотистого стафилококка из коллекции культур Института клеточного и внутриклеточного симбиоза Уральского отделения Российской академии наук. Инфицированию подвергалось левое ухо животного как наиболее удобно расположенное для манипуляций. Микробиологическое исследование заключалось в выделении и идентификации чистых культур по классическим методикам [8] и определении показателя микробной обсемененности (ПМО) в колониеобразующих единицах на тампон (КОЕ/тампон) в гнойном экссудате барабанной полости по методу Ю.М. Фельдмана [9]. Для определения исходного места миграции вторичных патогенов было проведено сравнительное изучение видового состава микрофлоры из ближайших анатомических отделов животного - слизистой оболочки носа и наружного слухового прохода - с видовым составом микроорганизмов гнойного экссудата барабанной полости.
Результаты и обсуждение
Микрофлора на слизистой оболочке носа здоровых животных была представлена S. epidermidis, Corynebacterium spp., Pseudomonas pseudoalcaligenes, Е. coli, Bacillus spp. Из левого слухового прохода кроликов высевались единичные штаммы S. saprophyticus и S. cohnii (см. таблицу).
В 1-е и 2-е сутки развития ЭСГСО из барабанной полости высевался только штамм S. aureus, использованный для воспроизведения отита.
На 3-4-й день экспериментального среднего отита в гнойном экссудате барабанной полости, кроме штамма S. aureus, была обнаружена культура Pseudomonas pseudoalcaligenes, ПМО которой был равен 4,6±0,3 lg КОЕ/тампон, и штаммы Corynebacterium spp. (ПМО 5,0±0,2 lg КОЕ/тампон). При сравнении с видовым составом микрофлоры соседних биотопов (полости носа и левого наружного слухового прохода) аналогичные виды микроорганизмов (Pseudomonas pseudoalcaligenes и Corynebacterium spp.) обнаружены на слизистой оболочке полости носа подопытных животных: с ПМО, равным 5,7±0,2 и 5,6±0,4 lg КОЕ/тампон соответственно. С внутренней поверхности левой ушной раковины и наружного слухового прохода высевались штаммы S. saprophyticus (ПМО 3,0±0,2 lg КОЕ/тампон) и S. cohnii (ПМО 3,0±0,1 lg КОЕ/тампон). Однако ввиду низкой микробной обсемененности данного биотопа в гнойном экссудате барабанной полости они практически не встречались. На 5-6-й день и 10-12-е сутки в гнойном экссудате среднего уха кроликов вместе с золотистым стафилококком были обнаружены штаммы Pseudomonas pseudoalcaligenes (ПМО 6,4±0,2 lg КОЕ/тампон), Corynebacterium spp. (ПМО 4,8±0,3 lg КОЕ/тампон), S. epidermidis (ПМО 6,4±0,2 lg КОЕ/тампон), которые по морфологическим признакам не отличались от Pseudomonas pseudoalcaligenes, Corynebacterium spp., S. epidermidis на слизистой оболочке носа подопытных животных. Кроме того, из гнойного экссудата высевались штаммы S. saprophyticus (ПМО 3,6±0,1 lg КОЕ/тампон) и S. cohnii (ПМО 3,8±0,1 lg КОЕ/тампон).
К 30-му дню заболевания в гнойном экссудате барабанной полости вместе с S. aureus, Pseudomonas pseudoalcaligenes, Corynebacterium spp., S. epidermidis были обнаружены штаммы Е. coli, Bacillus spp. с высоким ПМО, а также единичные штаммы S. saprophyticus и S. cohnii, которые также высевались из наружного слухового прохода с низким уровнем микробной обсемененности.
При хроническом течении воспалительного процесса в среднем ухе (через 6 мес после воспроизведения отита) видовой состав микрофлоры гнойного экссудата барабанной полости соответствовал видовому составу микрофлоры слизистой оболочки носа. Штаммов S. aureus в гнойном экссудате не обнаружено, но встречались штаммы S. saprophyticus, S. cohnii с невысоким уровнем микробной обсемененности.
Таким образом, высокий ПМО вторичных патогенов (Pseudomonas pseudoalcaligenes, Corynebacterium spp., S. epidermidis, Е. coli и Bacillus spp.), обнаруженных в барабанной полости кроликов с ЭСГСО, и видовое сходство их с микроорганизмами полости носа позволяют считать слизистую оболочку носа исходным местом миграции условно-патогенных микроорганизмов. Появление в гнойном экссудате барабанной полости штаммов S. saprophyticus и S. cohnii с низким уровнем ПМО из наружного уха можно объяснить контаминацией с поверхности слухового прохода.
Для доказательства идентичности микроорганизмов на слизистой оболочке носа и в барабанной полости среднего уха было проведено изучение биохимических свойств и спектра антибиотикорезистентности у 3 видов микроорганизмов: Pseudomonas pseudoalcaligenes, S. epidermidis и Corynebacterium spp. Данные микроорганизмы наиболее часто высеваются со слизистой оболочки носа подопытных животных и относятся к основному и дополнительному составу микрофлоры данного биотопа.
Установлено, что штаммы Pseudomonas pseudoalcaligenes, вегетирующие на слизистой оболочке носа, обладают такими же биохимическими свойствами и спектром антибиотикорезистентности, как и культура Pseudomonas pseudoalcaligenes, обнаруженная в барабанной полости кроликов с ЭСГСО. Аналогичное подтверждение идентичности штаммов S. epidermidis и Corynebacterium spp. на слизистой оболочке носа и штаммов S. epidermidis и Corynebacterium spp., обнаруженных в барабанной полости подопытных животных, было получено при сравнении биохимических свойств и спектра антибиотикорезистентности.
Выводы
1. В начале развития ЭСГСО из барабанной полости подопытных животных высевались в чистой культуре только штаммы золотистого стафилококка, используемого для воспроизведения отита.
2. Гнойный экссудат барабанной полости в последующие сроки развития отита был представлен полифлорой. При этом, кроме основного возбудителя заболевания, высевались вторичные патогены с высоким ПМО, проникшие со слизистой оболочки носа и носоглотки, что свидетельствует об основном (ринотубарном) пути их миграции в среднее ухо.
3. Идентичность микроорганизмов на слизистой оболочке носа и барабанной полости подтверждена путем изучения их биохимических свойств и спектра антибиотикорезистентности.
4. В экссудате барабанной полости обнаруживались единичные штаммы микроорганизмов из наружного слухового прохода.
5. Мигрирующие штаммы бактерий подавляют рост S. aureus и вытесняют его из барабанной полости.