Гастроэзофагеальная рефлюксная болезнь (ГЭРБ) относится к наиболее распространенным заболеваниям органов пищеварения [1]. Ее частота в западной популяции варьирует от 10 до 20% с перманентной тенденцией к росту [2]. Согласно дефиниции, предложенной Российской гастроэнтерологической ассоциацией, ГЭРБ определяется как хроническое рецидивирующее заболевание, характеризующееся развитием воспалительных изменений слизистой оболочки дистального отдела пищевода и/или характерных клинических симптомов, ассоциированных с повторяющимся рефлюксом в пищевод желудочного и/или дуоденального содержимого [3]. Важно отметить, что ГЭРБ часто сопровождается экстраэзофагеальной патологией, включая поражения красной каймы губ и языка [4, 5].

Патологические изменения языка при ГЭРБ носят обычно неспецифический характер и проявляются появлением белого налета, отечностью, разной степенью десквамации эпителия, атрофией, либо гипертрофией сосочков [4, 6, 7]. Появлению налета способствуют в основном нарушения нормального процесса ороговения и слущивания эпителия, вследствие нервно-трофических расстройств, характера и консистенции пищи и др. [1, 2]. Считается, что основу налета составляют увеличенные, ороговевшие нитевидные сосочки с нарушением отторжения кератиноцитов, остатки пищи, микроорганизмы, слущенные клетки эпителия и фибрин. На процессы ороговения и слущивания эпителия слизистой оболочки языка влияют различные эндогенные и экзогенные факторы, и их нарушения рассматриваются не только как следствие различных заболеваний, особенно органов пищеварения, но и как физиологическая адаптация организма к условиям окружающей среды [8—11].

Собственная пластинка слизистой оболочки и многослойный плоский ороговевающий эпителий языка образуют пять типов сосочков: нитевидные, конусовидные, грибовидные, желобовидные и листовидные. Из них наиболее многочисленными, особенно на дорсальной поверхности языка, являются нитевидные сосочки (papillae filiformes), которые не содержат вкусовых рецепторов, функционируют как «органы» осязания и способствуют удержанию пищи на языке. Нитевидные сосочки длиной 0,6—2,5 мм и толщиной 0,1—0,6 мм представляют собой центральное колоколообразное тело («первичный сосочек»), увенчанное нитевидными выростами собственной пластинки слизистой оболочки, покрытыми ороговевающим эпителием («вторичные сосочки» или «волосоподобные выросты»). Как правило, на первичном сосочке находится 3—8 вторичных [12—15]. Известно, что в норме дорсальная поверхность языка является местом обитания более чем 160 сапрофитных и условно-патогенных видов бактерий. Любое изменение свойств среды их обитания, в частности морфологии нитевидных сосочков, например при заболеваниях органов пищеварения, влечет за собой качественные и количественные изменения состава этой микрофлоры [14, 15].

Цель исследования — выявление изменений нитевидных сосочков и локализации микрофлоры дорсальной поверхности языка у больных ГЭРБ.

Изучены биоптаты дорсальной поверхности языка у 7 (3 мужчины и 4 женщины) пациентов с неэрозивной формой ГЭРБ и в качестве группы сравнения у 6 (3 мужчины и 3 женщины) человек без патологии верхних отделов желудочно-кишечного тракта. Было получено информированное согласие пациентов на исследование. Средний возраст пациентов с ГЭРБ составил 35 лет (интерквартильный интервал 23; 42), длительность заболевания — 4,8±2,7 года. Диагноз ГЭРБ базировался на диагностических критериях, рекомендованных Российской гастроэнтерологической ассоциацией: совокупности клинических данных, суточной рН-метрии, эзофагодуоденоскопии и специализированного опросника GerdQ [3]. На момент взятия биопсии пациенты терапию не получали.

Биоптаты изучали с применением методов сканирующей электронной микроскопии (СЭМ) и флюоресцентной конфокальной микроскопии (ФКМ) в лаборатории молекулярной биологии и генетики (д.м.н., проф. С.А. Гусев, д.м.н., проф. Г. И. Лукина) ФГБУ Федеральный научно-клинический центр физико-химической медицины ФМБА России. Для проведения СЭМ биоптаты размером 0,5×1,0 мм фиксировали в смеси 2% раствора формальдегида и 1,4% раствора глутаральдегида (рН 7,4) на 1-е сутки при температуре 40 °C, промывали в 0,1 М фосфатном буфере (рН 7,4) и дистиллированной воде в течение 2 ч на каждом из этапов. После обезвоживания в этиловом спирте восходящей концентрации образцы высушивали с помощью метода замещения жидкости переходом критической точки с использованием аппарата Hitachi НСР-2 («Hitachi», Япония) и покрывали слоем золота толщиной 10 нм методом напыления в вакуумной установке JEE-420 («Joel», Япония). Исследование нитевидных сосочков в полученных препаратах проводили в сканирующем электронном микроскопе S-570 («Hitachi», Япония).

Для ФКМ нефиксированные биоптаты сразу после получения окрашивали флюоресцентными красителями — синтетическими флюорофорами карбоксифлюоресцеином (эмиссия флюоресценции в зелено-желтой области спектра поглощения, λ 520 нм) и тетраметилкарбоксиродамином (эмиссия флюоресценции в красной области спектра поглощения, λ 576 нм) («Синтол», Россия). Эти красители свободно проникают через клеточные мембраны и окрашивают ядра эпителиальных клеток, а также хроматин бактерий.

СЭМ биоптатов дорсальной поверхности языка в группе сравнения подтвердила сложное строение нитевидных сосочков и их важную роль в создании среды обитания микрофлоры языка. Первичные сосочки отличаются широким основанием («луковицей»), на котором расположено несколько вторичных сосочков, собранных в пучок и покрытых сплошным слоем (биопленкой) микрофлоры (рис. 1, а,

СЭМ биоптатов дорсальной поверхности языка у пациентов с ГЭРБ выявила очаги с полным или частичным отсутствием вторичных сосочков. На их месте в первичных сосочках сохранялись чашеобразные вдавления, покрытые эпителиальными клетками с плотными межклеточными контактами и незначительной бактериальной обсемененностью. Другие участки первичных сосочков характеризуются повышенной десквамацией эпителия, не характерной в норме для такой локализации кератиноцитов, и биопленкой микрофлоры (рис. 2, а,

У пациентов с ГЭРБ обнаружены первичные сосочки с частично сохранившимися единичными и укороченными вторичными сосочками. Покрывающие их эпителиальные клетки отличаются от группы сравнения повышенной десквамацией и относительно беспорядочным расположением. Такие вторичные сосочки покрыты биопленкой микрофлоры, которая по морфологии отличается от таковой группы сравнения большим разнообразием — присоединяются веретенообразные, почкующиеся формы (см. рис. 2, г). Биопленка не имеет такого плотного прикрепления к эпителиальным клеткам, как в сохранных по своей структуре вторичных сосочках в группе сравнения и у пациентов с ГЭРБ. Микрофлора в участках с неизмененными нитевидными сосочками у пациентов с ГЭРБ более однородна, биопленка прочно прикреплена к поверхности вторичных сосочков, а эпителиальные клетки в меньшей степени подвержены десквамации.

Результаты ФКМ подтвердили высокую обсемененность вторичных сосочков в группе сравнения (рис. 3, а,

Дорсальная поверхность языка является местом первого контакта тканей рта с кислым содержимым рефлюксата при ГЭРБ. Это может инициировать повреждение и нарушение десквамации эпителиальных клеток [4, 7, 14, 15]. Кроме того, это место обитания большого количества разнообразной микрофлоры. Не исключено, что тесно связанная с эпителиальными клетками вторичных сосочков биопленка микрофлоры выполняет определенную защитную функцию и принимает участие в первичном переваривании пищи в полости рта. У пациентов с ГЭРБ бактериальная флора в участках с неизмененными нитевидными сосочками более однородна, прочно прикреплена к поверхности вторичных сосочков, а эпителиальные клетки в меньшей степени подвержены слущиванию. В участках с повреждением вторичных сосочков и повышенной десквамацией эпителия микрофлора более разнообразна и локализована на первичных сосочках, кроме их чашеобразных углублений на месте утраченных вторичных сосочков. При этом эпителиальные клетки первичного сосочка за пределами чашеобразных углублений утрачивают плотные межклеточные контакты, что может вести к повышенной десквамации кератиноцитов.

Таким образом, результаты проведенного исследования продемонстрировали сложную структуру нитевидных сосочков дорсальной поверхности языка с наличием биопленки микрофлоры на вторичных сосочках.

Для нитевидных сосочков слизистой оболочки языка при ГЭРБ характерно появление участков с частичной или полной утратой вторичных сосочков и повышенной десквамацией эпителиальных клеток. Происходит транслокация биопленки микрофлоры на первичные сосочки, за исключением их чашеобразных углублений (зоны утраченных вторичных сосочков). При транслокации микрофлоры нарастает ее морфологическое разнообразие.

Участие авторов:

Концепция и дизайн исследования: И.В.М., Э.А.Б

Сбор и обработка материала: Э.А.Б., Г. И.Л., А.А.Ч.

Написание текста: Г. И. Л., О.В.З., А.А.Ч.

Редактирование: О.В.З.

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Сведения об авторах

Зайратьянц Олег Вадимович — д-р мед. наук, проф., зав. каф. патологической анатомии; e-mail: ovzair@mail.ru; https://orcid.org/ 0000-0003-3606-3823

Маев Игорь Вениаминович — https://orcid.org/0000-0001-6114-564X

Базикян Эрнест Арамович — https://orcid.org/0000-0002-9184-3737

Лукина Галина Ильхамовна — https://orcid.org/0000-0003-4145-3797

Чунихин Андрей Анатольевич — https://orcid.org/0000-0002-9054-9464