В настоящее время одной из важнейших медико-социальных проблем в России становится алкогольная и наркотическая зависимость. В последние годы отмечается значительное увеличение распространенности различных наркоманий, причем темп роста этих заболеваний очень высок и превышает аналогичные показатели в большинстве стран [1]. Появляется все больше химических веществ, вызывающих формирование синдрома зависимости. В связи с этим было предложено объединить эти вещества в одну группу и назвать их психоактивными веществами (ПАВ). Нейрофизиологические механизмы развития зависимости от ПАВ базируются в стволовых и лимбических структурах мозга, в тех его областях, где располагается так называемая система подкрепления. Эта система участвует в обеспечении регуляции эмоционального состояния, настроения, мотивационной сферы, психофизического тонуса, поведения человека в целом, его адаптации к окружающей среде. Изучение механизмов действия психоактивных препаратов показало, что каждый из них имеет свой фармакологический спектр действия. Однако у всех веществ, способных вызвать синдром зависимости, имеется общее звено фармакологического действия — это характерное влияние на катехоламиновую нейромедиацию в лимбических структурах мозга, в частности в системе подкрепления. Воздействие ПАВ приводит к интенсивному выбросу из депо в этих отделах мозга нейромедиаторов из группы катехоламинов, в первую очередь дофамина, следовательно — к значительно более сильному возбуждению системы подкрепления [2—4]. Такое возбуждение нередко сопровождается положительно окрашенными эмоциональными переживаниями. Свободные катехоламины подвергаются действию ферментов метаболизма и быстро разрушаются. Часть свободного медиатора при помощи механизма обратного захвата возвращается в депо. Повторные приемы ПАВ приводят к истощению запасов нейромедиаторов, что проявляется недостаточно выраженным возбуждением системы подкрепления при поступлении «нормального» импульса. Психофизически у человека это выражается падением настроения, ощущением вялости, слабости, переживаниями скуки, эмоционального дискомфорта, депрессивными симптомами. Прием ПАВ на этом фоне вновь вызывает дополнительное высвобождение нейромедиаторов из депо, что временно компенсирует их дефицит в синаптической щели и нормализует деятельность лимбических структур мозга. Этот процесс сопровождается субъективным ощущением улучшения состояния, эмоциональным и психическим возбуждением и т. д. Однако свободные катехоламины вновь быстро разрушаются, что приводит к дальнейшему падению уровня их содержания, ухудшению психоэмоционального состояния и, соответственно, к стремлению вновь использовать наркотик. Этот «порочный круг» лежит в основе формирования психической зависимости от алкоголя и наркотических средств [5]. Описанные механизмы являются ведущими, но они сопровождаются и многими другими расстройствами нейрохимических процессов, функций мозга и поведения.

При прекращении приема наркотика, т. е. при абстиненции, усиленного высвобождения катехоламинов из депо не происходит, но сохраняется их ускоренный синтез, как следствие появляется избыточная концентрация метаболитов катехоламинов (адреналина, норадреналина и дофамина). Вследствие изменения активности ферментов в биологических жидкостях и тканях (главным образом в мозге) накапливается дофамин [6—8]. Именно этот процесс обусловливает развитие таких основных клинических признаков абстинентного синдрома, как высокая тревожность, напряженность, возбуждение, подъем артериального давления, учащение пульса, появление других вегетативных расстройств, нарушения сна и др. [9]. Иными словами, описанные выше изменения нейрохимических функций мозга формируют физическую зависимость от наркотических препаратов.

На ранних стадиях различных наркоманий изменения метаболизма катехоламинов и серотонина проявляются на уроне наноконцентраций, поэтому для определения концентраций метаболитов катехоламинов и серотонина нужны высокочувствительные методы их определения, такие как газовая хроматография — масс-спектрометрия (ГХ-МС). Данный метод позволяет с точностью до 10^–9—10^–12 г определять изменения концентраций метаболитов катехоламинов и серотонина и диагностировать различные виды наркотической зависимости на ранних стадиях [10, 11].

Целью данной работы является изучение диагностической значимости определения основных метаболитов серотонина и катехоламинов в суточной моче больных наркотической зависимостью при абстинентном синдроме.

В исследование был включен 51 пациент мужского пола с героиновой или амфетаминовой наркотической зависимостью. Пациенты находились на стационарном лечении в клинике Национального научного центра наркологии Росздрава по поводу наркотической зависимости. Из исследования исключались пациенты с сопутствующими психическими заболеваниями, острыми психотическими расстройствами, хроническими соматическими заболеваниями в стадии обострения, а также больные, у которых зависимость от героина или амфетаминов сочеталась с зависимостью от других наркотиков. Все пациенты имели полностью сформированную зависимость, которая включала: психическую зависимость; сформировавшийся абстинентный синдром; высокую толерантность; негативные соматические и социальные последствия употребления наркотика. Длительность заболевания варьировала от 1,5 года до 8 лет, составляя в среднем 3,5 года. Суточные дозы употребляемого героина — от 0,25 до 3,0 г, амфетаминов — 0,08—0,1 г. Все больные вводили наркотик внутривенно.

Контрольную группу составили 20 практически здоровых добровольцев мужского пола, сопоставимых по возрасту, не употребляющих наркотические средства и не имеющих хронических заболеваний.

Характеристика сформированных групп представлена в табл. 1.

В качестве исследуемого биоматериала использовали суточную мочу. Суточную мочу собирали в градуированные пластиковые контейнеры емкостью 4 л, содержащие в качестве консерванта 10 мл 6 ммоль/л соляной кислоты, после чего 50 мл отливали из тары в отдельную стерильную емкость с указанием объема суточной мочи.

Анализ мочи на основные метаболиты катехоламинов и серотонина проводили методом ГХ-МС на анализаторе GC-MSShimadzuQP5050A (Япония). В работе были использованы следующие параметры хроматографического анализа: колонка газохроматографическая SupelcoMDN-5S 0,25mm*30m*0,25um, начальная температура колонки 70 °C, увеличение температуры со скоростью 5 °С/мин до 320 °C с выдержкой при конечной температуре 5 мин, режим постоянного потока «Constantflow» 1 мл/мин. Температура инжектора 270 °С, устройства сопряжения с масс-спектрометром 270 °С. Ввод пробы с задержкой сброса 1 мин и последующим разделением потока 1:20. Вводимый объем образца 1 мл. Параметры масс-спектрометра: регистрация ионного тока осуществляется в режиме сканирования (SCAN) в диапазоне от 50 до 500 а.е.м. через 6,5 мин после ввода пробы (задержка на время выхода растворителя). Напряжение на электронном умножителе соответствовало параметрам Autotune. Температура источника ионов 230 °C, температура квадруполя 150 °C.

После окончания процедуры измерения проб полученные данные анализировали с помощью компьютерной системы обработки данных CLASS-VP Chromatography Data Systemдля газового хромато-масс-спектрометра, в результате чего получали искомые концентрации.

Определяли следующие метаболиты:

— ванилилминдальная кислота (ВМК) — основной метаболит адреналина и норадреналина;

— гомованилиновая кислота (ГВК) — основной метаболит дофамина;

— 5-гидроксииндолуксусная кислота (5-ГИУК) — основной метаболит серотонина.

Для работы использовали стандарты ВМК, ГВК, 5-ГИУК и метилтестостерон (внутренний стандарт), силирующий агент BSTFA bis-(Trimethylsilyl) trifluoroacetamide, производство компании Sigma-Aldrish. Стандартные растворы веществ (100 мг/л) приготовили разбавлением в соляной кислоте (10 ммоль/л, производство «Химмед», Россия) и хранили при температуре 4 °C (стабильность 6 мес). Рабочие растворы готовили путем разбавления стандартного раствора в 10 раз.

Статистический анализ проводили параметрическими и непараметрическими методами с использованием программы статистической обработки Statistica 6.0. в зависимости от нормальности распределения полученных данных. В качестве пороговой вероятности для принятия нулевой гипотезы о статистически значимом различии результатов использовали значение p<0,05.

Результаты измерения метаболитов катехоламинов и серотонина показали, что в контрольной группе концентрации ГВК, ВМК и 5-ГИУК не выходят за референтные пределы (1,4—8,8, 1,4—6,5, 2,0—7,0 мг/сут соответственно [12]). У пациентов с героиновой зависимостью в стадии абстиненции наблюдается статистически значимое повышение концентрации всех метаболитов более чем в 2 раза по сравнению с контрольной группой (табл. 2). Полученные данные свидетельствуют о диагностической значимости этих показателей для пациентов с героиновой зависимостью в стадии абстиненции.

У пациентов с амфетаминовой зависимостью в стадии абстиненции наблюдается статистически значимое повышение концентрации всех метаболитов более чем в 1,3 раза по сравнению с контрольной группой (см. табл. 2). При этом разброс значений концентраций ВМК и 5-ГИУК не выходил за референтные пределы, поэтому концентрация данных метаболитов у больных наркоманией с амфетаминовой зависимостью не является диагностически значимой, что согласуется, в частности, с данными о том, что при формировании амфетаминовой зависимости метаболизм серотонина не играет ключевой роли [13]. Таким образом, полученные данные свидетельствуют о диагностической значимости концентрации ГВК для пациентов с амфетаминовой зависимостью в стадии абстиненции.

Результаты проведенного исследования могут помочь оценить состояние симпатоадреналовой системы при формировании зависимости от той или иной группы ПАВ. Применяемая технология исследования — метод ГХ-МС, в настоящее время является лидером по точности, надежности и признан «золотым стандартом» в мире лабораторной диагностики. Очевидным преимуществом данного метода также является скорость и относительная дешевизна производимых исследований, что является как экономически выгодным, так и эффективным средством для ранней диагностики наркотической зависимости.

В ходе проведенного исследования выявлены изменения уровней исследуемых метаболитов, связанные с последствиями употребления наркотических веществ. Активация системы положительного подкрепления, развивающаяся при приеме наркотических средств, в первую очередь проявляется в быстрых рецепторных и метаболических изменениях, которые заключаются в повышении концентраций метаболитов катехоламинов и серотонина.

Таким образом, повышение концентрации метаболитов катехоламинов и серотонина можно использовать для ранней диагностики героиновой зависимости, а повышение ГВК на фоне референтных значений концентрации остальных метаболитов — для ранней диагностики амфетаминовой зависимости у пациентов с абстинентным синдромом.

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов и источника финансирования.