Сравнение компонентов сред и реагентов при культивировании и генетическом редактировании клеток человека A549

Низкая эффективность геномного редактирования является актуальной проблемой в биомедицинских исследованиях. Состав и сочетание компонентов сред может оказывать существенное влияние на успех эксперимента. В работе проведен сравнительный анализ импортных и отечественных компонентов сред и реактивов при культивировании и генетическом редактировании клеток аденокарциномы легкого человека А549. В исследовании использовали эмбриональные телячьи сыворотки (ЭТС) компаний Gibco (США), Intl Kang (Китай) и Technozerg (Россия), реактивы для трансфекции Lipofectamine3000 (США) и GenJect39 (Россия), а также среды OptiMem (США) и FectoMEM (Россия). Клетки, культивируемые на всех типах ЭТС, сохраняли высокую пролиферативную активность, выживаемость и характерное распределение по фазам клеточного цикла, однако тип ЭТС оказал существенное влияние на морфологию клеток. В частности, на среде с Technozerg наблюдалась смена морфологии на фибробластоподобную. Эффективность трансфекции оценивали с использованием экспрессионного вектора pCMV-EGFP и вектора для редактирования гена ДНК-полимеразы лямбда человека PX458-POLL с помощью CRISPR/Cas9. Среды OptiMem и FectoMEM поддерживали высокую эффективность трансфекции с любым вектором. Реактив GenJect39 не уступал по эффективности Lipofectamine3000 при трансфекции pCMV-EGFP, но при геномном редактировании с PX458-POLL эффективность трансфекции реагентом GenJect39 значительно уступала Lipofectamine3000. Кроме того, было показано, что выбор сыворотки оказал значительное влияние на способность клеток к формированию колоний после трансфекции PX458-POLL. Полученные результаты указывают на важную роль выбора трансфекционного реагента и ЭТС для успешности эксперимента.