Введение

При проведении судебно-медицинских экспертиз по делам о преступлениях против половой неприкосновенности и половой свободы личности, предусмотренных в статьях 131—135 УК РФ, широко используются лабораторные методы исследования, основной задачей которых является выявление материальных следов, свидетельствующих о факте бывшего полового сношения или удовлетворения половой страсти в иных формах, а также совершении развратных действий.

При проведении таких экспертиз требуется, в соответствии с характером преступления, установить наличие спермы в содержимом влагалища, влагалищных, буккальных и ректальных клеток, крови, слюны, кала в мазках-отпечатках и смывах с половых органов подозреваемых, на предметах одежды и иных вещественных доказательствах с определением их видовой, групповой, половой принадлежности и решением вопроса о возможности происхождения выявленных следов от конкретного лица. Последний из перечисленных вопросов успешно разрешается с помощью молекулярно-генетического исследования. Однако без установления природы биологического материала оно не имеет полноценной юридической силы. Поэтому генетический анализ не заменяет собой традиционные методы, а расширяет и конкретизирует их.

Цель работы — провести анализ лабораторной деятельности судебно-медицинских экспертов биологического и цитологического отделений бюро судебно-медицинской экспертизы.

Материал и методы

Был проведен анализ лабораторной деятельности судебно-медицинских экспертов биологического и цитологического отделений ГБУЗ НО «Нижегородское областное бюро судебно-медицинской экспертизы» (НОБСМЭ).

Было проанализировано 482 экспертизы по делам о половых преступлениях за несколько лет, в которых выявлялись следы спермы, слюны, крови, клетки влагалищного эпителия и кожи, элементы каловых масс.

Результаты

Анализ показал, что по видам половые преступления разделились следующим образом:

— изнасилования — 61,4%;

— насильственные действия сексуального характера — 23,2%;

— изнасилования, сопряженные с насильственными действиями сексуального характера — 15,4%.

Насильственные действия сексуального характера подразделялись на:

— введение полового члена в ротовую полость — 34,9%;

— введение полового члена в ротовую полость и прямую кишку — 38,5%;

— введение полового члена в прямую кишку — 14,7%;

— введение инородных предметов во влагалище — 7,3%;

— введение инородных предметов в прямую кишку — 4,6%.

При проведении экспертиз по делам о половых преступлениях объекты исследования в судебно-биологическом отделении распределились следующим образом:

— содержимое влагалища — 25,2%;

— содержимое прямой кишки — 10,6%;

— содержимое ротовой полости — 4,6%;

— предметы одежды потерпевших и подозреваемых, прочие предметы (постельное белье, покрывала, полотенца и т.д.) — 59,6%.

Объекты исследования в судебно-цитологическом отделении были представлены следующим образом:

— смывы и мазки-отпечатки с половых органов подозреваемых — 25%;

— ногти с рук подозреваемых — 20,5%;

— ногти с рук потерпевших — 21%;

— предметы одежды подозреваемых — 27,2%;

— предметы, которые вводили во влагалище или задний проход — 3,8%;

— презервативы — 2,5%.

Затем проанализировали встречаемость следов при исследовании предметов в судебно-биологическом отделении. При этом оказалось, что сперма была обнаружена в 29,8% экспертиз, кровь — в 17,1%, слюна — в 1%. По нашему мнению, относительно «скромные» результаты являются следствием того, что часто следствие направляет на экспертизу предметы, не имеющие отношения к преступлению, например носки, обувь, головные уборы и т.д.

При исследовании предметов в судебно-цитологическом отделении наблюдалась следующая картина: влагалищные клетки были выявлены в 25,8%, кровь — в 16,2%, слюна в 21%, кал — в 8% экспертиз. Более высокая частота выявления следов по сравнению с биологическими экспертизами объясняется тем обстоятельством, что на экспертизу представлялись только предметы одежды подозреваемых в совершении преступлений. В подавляющем большинстве экспертиз это были трусы подозреваемых.

На результативность исследований в огромной степени влияют сроки изъятия объектов, в первую очередь — содержимого влагалища, ротовой полости и прямой кишки потерпевших, смывов и мазков-отпечатков с половых органов подозреваемых мужчин.

Анализ показал, что при изъятии содержимого влагалища, ротовой полости и прямой кишки в 1-е сутки положительные результаты отмечаются в 46,5% экспертиз, на 2-е — в 11,4%, на 3-и — в 7% экспертиз и т.д. по убывающей.

При изъятии мазков-отпечатков и смывов с половых органов мужчин в 1-е сутки положительные результаты наблюдаются в 64%, на 2-е сутки — в 10%, на 3-и — в 2% экспертиз. В сроки изъятия материала на 4-е сутки и более отмечались отрицательные результаты.

Интересные данные получены при проведении экспертиз подногтевого содержимого обвиняемых в совершении половых преступлений. Так, «чужие» клетки кожи, т.е. клетки с антигеном, не свойственным обвиняемому, были выявлены в 30% экспертиз, кровь с антигеном, не свойственным подозреваемому, — в 27,5%, слюна — в 17,5%, влагалищные клетки — в 5% экспертиз.

При проведении экспертиз подногтевого содержимого потерпевших были получены следующие данные: «чужие» клетки выявлены в 35,7% экспертиз, кровь — в 14,3%, слюна — в 7,1%, сперма — в 4,8%.

Более высокая выявляемость слюны в подногтевом содержимом подозреваемых может быть следствием того, что они закрывали потерпевшим рот руками, а высокая частота выявления «чужих» клеток кожи — интенсивным контактом между подозреваемыми и потерпевшими.

Таким образом, результаты проведенного анализа показали, что эффективность лабораторных исследований, играющих решающую роль в диагностике факта изнасилования и насильственных действий сексуального характера, в значительной степени зависит от своевременного изъятия объектов.

Рассмотрим некоторые лабораторные методы исследования, применяемые в судебно-биологическом и судебно-цитологическом отделениях нашей лаборатории, позволяющие повысить качество экспертиз в плане конкретизации выводов.

Так, для выявления спермы самым надежным и достоверным методом является микроскопическое выявление сперматозоидов в следах. Существует много методик окраски препаратов для обнаружения сперматозоидов, но наиболее рациональной оказалась разработанная собственная методика люминесцентно-микроскопического обнаружения спермы при окраске препаратов раствором акридинового оранжевого [1]. При такой окраске сперматозоиды ярко люминесцируют зеленым цветом на темном фоне, поэтому их значительно легче выявить, чем при традиционных методах (рис. 1 и далее на цв. вклейке).

Рис. 1. Сперматозоиды при окраске раствором акридинового оранжевого (люминесцентная микроскопия, ув. 600).

В случаях введения полового члена в ротовую полость и влагалище, частота которых, по данными Ю.И. Пиголкина и О.А. Дмитриевой [2], составляет 23,8%, возникает необходимость дифференцировать клетки вагинального эпителия от буккального.

Для этих целей наиболее эффективной является методика окраски препаратов раствором красителя амидочерного 10Б [3].

При такой окраске клетки поверхностного слоя влагалищного эпителия (которые наиболее часто встречаются в следах) имеют вид тонких пластинок полигональной формы величиной 38—91 мкм (в среднем 67,8±7,92 мкм) с гомогенно и интенсивно окрашенными в черно-синие тона преимущественно округлыми ядрами величиной 4,5—10,5 мкм (в среднем 7,6±1,09 мкм), в 59,6% клеток, располагающимися центрально. Цитоплазма окрашивается интенсивно и неравномерно в синие тона, имеет грубозернистое строение, включения в ней или отсутствуют, или встречаются мелкие (до 2 мкм) неправильной формы, окрашенные в черно-синий цвет (рис. 2). Вокруг ядра в некоторых клетках имеется просветление — «нимб». Края клеток мелкозубчатые, у части клеток завернутые. В препаратах встречаются клетки, цитоплазма которых как бы «вспенена»: заполнена многочисленными пузырьками округлой или многоугольной формы, центральная часть которых не окрашена (рис. 3). Клетки со «вспененной» цитоплазмой появляются только в позднюю стадию (11—14-е сутки) фолликулиновой фазы менструального цикла и поэтому выявляются не у всех женщин. Обнаружение таких клеток является достоверным признаком их вагинальной природы. Кроме отмеченного, в большинстве клеток влагалищного эпителия содержится гликоген, выявляемый парами йода или в ускоренном варианте — раствором Люголя.

Рис. 2. Клетка влагалищного эпителия (ув. 400).

Рис. 3. Клетка влагалищного эпителия со «вспененной» цитоплазмой (ув. 400).

Для разработки критериев диагностики вагинального происхождения эпителиальных клеток по наличию в них гликогена в настоящей работе использовали метод последовательного анализа Вальда, в основе которого лежит рассчитанная с заданной величиной ошибки вероятность принадлежности клеток к влагалищному эпителию в зависимости от числа изученных клеток и содержания гликогена в цитоплазме [4]. Результаты расчетов с 99% надежностью представлены в таблице.

Соотношение гликогенсодержащих клеток и клеток без гликогена для диагностики вагинальной природы клеток

Из данных таблицы следует, что наличие влагалищных клеток может быть установлено уже при изучении всего 4 клеток, если все они содержат гликоген, или 5 гликогенсодержащих клеток из 10 изученных и т.д.

Клетки буккального эпителия имеют вид тонких пластинок неправильно-овальной или полигональной формы со скругленными углами размером 48—152 мкм (в среднем 89,8±10,76 мкм) с интенсивно окрашенными овальными ядрами величиной 8—15 мкм (в среднем 11,3±1,31 мкм), в 70,3% клеток расположенными эксцентрично. Цитоплазма окрашена неинтенсивно в голубые или светло-синие тона, в ней вокруг ядер содержатся многочисленные крупные белковые включения неправильной формы величиной 3—7 мкм, окрашенные в черно-синий цвет (рис. 4). Цитоплазма имеет своеобразное строение в виде мелких параллельно расположенных полосок, которые лучше различаются на периферии клеток. В цитоплазме (рис. 5) края клеток ровные, незавернутые, просветление цитоплазмы вокруг ядер отсутствует. Гликоген в клетках не определяется.

Рис. 4. Клетка буккального эпителия (ув. 400).

Рис. 5. Строение цитоплазмы клетки буккального эпителия в виде полосок (ув. 600).

Для диагностики наличия клеток буккального эпителия в следах использовали способ расчета, предложенный Л.З. Румшиским [5], который позволяет определить минимальное число клеток при заданной вероятности ошибки:

где n — минимальное число клеток с соответствующими признаками; P — степень надежности, с которой осуществляется диагностика; p — встречаемость совокупности признаков в клетке.

Расчеты показали, что для диагностики буккального происхождения клеток с вероятность ошибки 1% достаточно обнаружить 2 клетки, с вероятностью ошибки 0,1% — 3 клетки с соответствующими морфологическими признаками (строение цитоплазмы в виде полосок и наличие в ней крупных, более 0,3 мкм, включений) [3].

Для определения групповой принадлежности клеток в настоящее время широко применяется реакция смешанной агглютинации (РСА). Однако в том виде, как она рекомендована, далеко не во всех случаях можно решить вопрос о наличии искомого антигена в конкретных клетках, интересующих эксперта (например, в смыве с полового члена, где вагинальные клетки, находятся в смеси с безъядерными эпидермальными чешуйками). Это связано с тем, что при постановке РСА используются неокрашенные мазки (а если они и были окрашены, то в процессе инкубации с сыворотками и последующих отмываний от непрореагировавших антител происходит их обесцвечивание), в которых выделить по морфологическим особенностям конкретную клетку практически невозможно.

Нами была разработана методика сочетанной (люминесцентной и световой) микроскопии определения групповой принадлежности изолированных клеток с определенными морфологическими свойствами, интересующими эксперта-цитолога [6].

Данная методика сводится к следующему:

— в препаратах, приготовленных из смывов с половых органов лиц, подозреваемых в совершении половых преступлений, с использованием соответствующих окрасок отыскивают клетки влагалищного (буккального) эпителия;

— с мазками, в которых выявлены интересующие эксперта клетки, ставят РСА: препараты в течение 18 ч инкубируют во влажных камерах при температуре 4 °C с соответствующими сыворотками. Затем мазки отмывают от непрореагировавших антител 5 раз по 20 мин охлажденным физиологическим раствором. Далее препараты 2 мин окрашивают 0,01% раствором акридинового оранжевого, 20—30 с промывают физиологическим раствором, подсушивают, добавляют 0,25% взвесь тест-эритроцитов и сохраняют во влажных камерах в течение 2 ч при температуре 18—22 °C;

— мазки накрывают покровными стеклами и на люминесцентном микроскопе отыскивают ядросодержащие клетки, а затем в режиме световой микроскопии учитывают на них результаты РСА.

Наличие кала в смывах и мазках-отпечатках с половых органов подозреваемых до последнего времени основывалось на микроскопическом выявлении пищевых остатков (полупереваренных волокон мышечной и соединительной тканей, растительной клетчатки, продуктов расщепления крахмала, простейших, яиц гельминтов, йодофильной микрофлоры), а также клеток кубического эпителия столбчатой зоны прямой кишки.

В исследовании А.П. Четвертновой [7] было установлено, что в вытяжках из следов, содержащих кал, присутствуют ферменты амилаза и трипсин. При спектрофотометрии этих вытяжек отмечался пик поглощения в области 498 нм, что является достоверным признаком наличия кала [8]. Также была разработана методика восходящей хроматографии в системе растворителей, используемой для хроматографического установления наличия крови, для диагностики наличия кала, основанная на выявлении продукта распада билирубина (стеркобилина) с помощью 10% раствора парааминобензальдегида в концентрированной соляной кислоте. При этом на хроматограммах появляются полосы красного цвета с Rf 0,55—0,60 [9].

Заключение

Приведенные выше методики, несомненно, расширяют возможности судебно-медицинской экспертизы при половых преступлениях в плане конкретизации экспертных выводов об источнике происхождения следов.

ДНК-исследование при всей своей эффективности не заменяет, а дополняет и конкретизирует судебно-биологические и цитологические исследования вещественных доказательств, т.к. в отрыве от них не может решить самостоятельно ряд важнейших вопросов о природе биологического материала, региональном происхождении клеток.

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.