Введение
Хронический риносинусит (ХРС) представляет собой сложную по этиологии и патогенезу гетерогенную группу заболеваний, характеризующуюся стойким воспалением слизистой оболочки носа и околоносовых пазух [1, 2]. Патологический процесс при ХРС может быть ограничен только околоносовыми пазухами (ОНП) или распространяться с вовлечением других структур. Инфекционные агенты, аллергические факторы, различные преморбидные состояния способны инициировать развитие данного заболевания. В настоящее время динамика показателей первичных случаев заболевания ХРС в целом по Российской Федерации имеет тенденцию к росту и насчитывает около 70 тыс. в год, а с учетом субклинических форм и отсутствия единой системы статистики намного выше [3]. Обнаруживаются различные варианты взаимодействия аллергии и инфекции при ХРС: инфицирование вирусами верхних дыхательных путей способствует формированию иммунологической недостаточности, которая вызывает обострение ХРС. Соответствующая патогенетическая ситуация облегчает проникновение в ткани неинфекционных аллергенов, при этом сама инфекция выступает как проводник неинфекционной сенсибилизации. Разнообразие взаимоотношений воспалительного и истинного аллергического начал приводит к сложной патогенетической картине ХРС и IgE-опосредованного ХРС, в которой ведущую роль играет иммунная система организма, что еще раз указывает на актуальность изучения клеточного и гуморального звеньев иммунитета при этих заболеваниях. Наличие атопии может являться еще одним фактором в развитии ХРС, при этом отек слизистой оболочки при аллергических реакциях вызывает блок естественных соустий и застой секрета в пазухах. Таким образом, даже небольшого отека слизистой оболочки бывает достаточно, чтобы нарушилась нормальная аэрация, что ведет за собой замедление мукоцилиарного транспорта, снижение парциального давления кислорода в пазухах, нарушение эвакуации секрета из ОНП [4, 5]. Это, в свою очередь, способствует адгезии и более длительному контакту патологических агентов и дальнейшему повреждению слизистой оболочки, манифестации воспаления.
Ведущая роль в обеспечении и поддержании гомеостаза организма с формированием согласованных реакций систем организма на воздействие инфекционных и/или аллергических факторов отводится иммунной системе. Действие иммунной системы при различных жизненно важных процессах организма приводит к тому, что изменение иммунореактивности человека способствует появлению функциональных и структурных патологических процессов и развитию заболеваний [6]. Клетки иммунной системы, используя цитокиновую сеть, наряду с нервной и гуморальной регуляцией способствуют согласованности работы внутренних органов и систем. Интересным направлением современных исследований является изучение роли фенотипического состава лимфоцитов и показателей гуморального звена иммунитета и их ассоциаций в развитии различных заболеваний, в том числе при ХРС и IgE-опосредованном ХРС.
Цель исследования — изучить популяционный и субпопуляционный состав лимфоцитов и иммуноглобулинов и их ассоциаций при IgE-опосредованном ХРС относительно ХРС другой этиологии и показатели у лиц контрольной группы.
Материал и методы
Объектом исследования были пациенты с хроническими заболеваниями ОНП, госпитализированные в оториноларингологическое отделение Научно-исследовательского института медицинских проблем Севера г. Красноярска — обособленного подразделения ФИЦ «КНЦ СО РАН». Обследование пациентов проводилось врачами-оториноларингологами на базе клиники института, исследование выполняли в лаборатории клинической патофизиологии Научно-исследовательского института медицинских проблем Севера г. Красноярска — обособленного подразделения ФИЦ «КНЦ СО РАН».
Всего обследованы 90 пациентов (средний возраст 37,8±7,9 года) с ХРС (без полипоза носа и с полипозом носа). При обследовании выявлены 23 пациента с IgE-опосредованным ХРС (средний возраст 40,1±5,4 года). С хроническим риносинуситом с нормальным содержанием IgE в крови было 67 больных (средний возраст 39,4±6,7 года).
Критерием включения являлось наличие ХРС, верифицированного согласно отечественным методическим рекомендациям [7], рекомендациям EPOS-20201. Комплексное клиническое обследование всех пациентов проведено в условиях амбулаторно-поликлинического приема и включало сбор анамнеза, осмотр врачом-оториноларингологом, лабораторные и инструментальные исследования (переднюю риноскопию, эндоскопию, компьютерную томографию полости носа и ОНП). В контрольную группу включены 73 условно здоровых человека, сопоставимых по возрасту с пациентами исследуемых групп.
В работе с обследованными пациентами соблюдались этические принципы, предъявляемые ст. 24 Конституции Российской Федерации и Хельсинкской декларацией Всемирной медицинской ассоциации при заполнении информированного добровольного согласия пациентов, которое не ущемляет права обследуемых.
Фенотипирование лимфоцитов периферической крови проводили методом прямой иммунофлуоресценции, анализ окрашенных клеток выполняли на проточном цитофлуориметре Cytomics FC500 («Beckman Coulter, Inc.», США) с использованием моноклональных антител CD3+, CD4+, CD8+, CD16+, CD19+. Концентрацию иммуноглобулинов классов A, M, E и G в сыворотке крови определяли методом иммуноферментного анализа (ИФА) на ИФА-анализаторе Multiskan FC («Thermo Fisher Scientific Instruments Co., Ltd.», США).
Статистическую обработку результатов осуществляли в программе Statistica 7.0 («StatSoft Inc.», США). Показатели представлены в виде медианы (Me) и интерквартильного размаха (25-й и 75-й процентили). Для выявления межгрупповых различий применяли непараметрический критерий Манна—Уитни. Корреляционный анализ проводили с помощью подсчета рангового коэффициента корреляции Спирмена (r). Статистически значимыми считали различия при p<0,05 [8—10].
Результаты
Лабораторно-иммунологическое обследование пациентов с ХРС и IgE-опосредованным ХРС позволило выявить особенности изменений в клеточном и гуморальном звеньях иммунитета. У большинства обследуемых наблюдались отклонения иммунологических показателей от нормативных значений, в целом у больных ХРС в 73% случаев выявлены изменения в сторону повышения показателей в T-клеточном звене иммунитета и в 90% случаев — в B-клеточном звене, что подтверждает роль инфекционного фактора в развитии ХРС. У остальных пациентов с ХРС (27% и 10% случаев соответственно) значения указанных показателей были в пределах нормы. Анализ медианы показателей клеток иммунной системы позволил выявить статистически значимое увеличение у всех больных ХРС абсолютного количества Т-лимфоцитов (CD3+-клеток) (р1—2=0,04; р1—3=0,023), NK-клеток (CD16+) (р1—2=0,04; р1—3=0,04), B-лимфоцитов (CD19+- клеток) (р1—2=0,03; р1—3=0,01) по сравнению с участниками контрольной группы (табл. 1). Дополнительно у больных IgE-опосредованным ХРС по сравнению с ХРС другой этиологии и с показателями у лиц контрольной группы обнаруживалось увеличение абсолютного содержания Т-лимфоцитов-хелперов (CD4+-клеток) (р1—3=0,034), цитотоксических клеток (CD8+) (р1—3=0,01). При определении иммунорегуляторного индекса CD4+/CD8+ выявлено снижение данного показателя у больных IgE-опосредованным ХРС относительно контрольной группы (р1—3=0,04).
Таблица 1. Популяционный и субпопуляционный состав лимфоцитов и иммуноглобулинов у пациентов с IgE-опосредованным хроническим риносинуситом, хроническим риносинуситом другой этиологии и у лиц контрольной группы, Me (Q25—Q75)
| Показатели | Единица измерения | Контроль (n=73) (1) | ХРС (n=67) (2) | IgE-ХРС (n=23) (3) | Статистическая значимость различий между группами, p |
| Лейкоциты | ⋅109/л | 5,73 (4,85—7,75) | 6,4 (5,2—7,7) | 6,78 (5,8—8,3) | — |
| Лимфоциты | % | 31,0 (29,8—45,0) | 38,0 (31,0—45,5) | 43,0 (34,0—46,1) | — |
| Т-лимфоциты (CD3+) | % | 67,0 (60,0—72,0) | 56,2 (50,7—60,3) | 58,1 (56,4—73,2) | — |
| ⋅109/л | 1,19 (1,01—1,88) | 1,36 (0,8—1,7) | 1,68 (1,07—2,79) | р1—2=0,04; р1—3=0,023; p2—3=0,03 | |
| Т-хелперы (CD4+) | (%) | 44,0 (34,0—49,0) | 32,6 (28,4—40,7) | 32,5 (30,1—37,7) | — |
| ⋅109/л | 0,78 (0,55—1,27) | 0,79 (0,45—1,15) | 0,9 (0,57—2,79) | р1—3=0,034; p2—3=0,03 | |
| Т-киллеры/супрессоры (CD8+) | (%) | 27,0 (20,0—34,0) | 23,9 (21,1—24,5) | 28,3 (25,7—36,4) | — |
| ⋅109/л | 0,48 (0,38—0,89) | 0,58 (0,33—0,69) | 0,82 (0,48—1,4) | р1—3=0,01; p2—3=0,01 | |
| NK-клетки (CD16+) | (%) | 20,0 (17,0—23,0) | 26,1 (24,7—28,4) | 17,4 (16,2—25,4) | — |
| ⋅109/л | 0,36 (0,31—0,60) | 0,63 (0,39—0,8) | 0,5 (0,3—0,97) | р1—2=0,04; р1—3=0,04 | |
| CD4+/CD8+ | — | 1,62 (1,4—1,76) | 1,36 (1,38—1,66) | 1,18 (1,08—1,99) | р1—3=0,04 |
| B-лимфоциты (CD19+) | (%) | 13,5 (9,0—16,0) | 20,3 (17,4—22,7) | 18,6 (14,3—24,9) | — |
| ⋅109/л | 0,24 (0,18—0,39) | 0,49 (0,28—0,64) | 0,53 (0,27—0,95) | р1—2=0,03; р1—3=0,01 | |
| IgA | г/л | 1,91 (1,33—3,20) | 2,3 (1,62—2,8) | 2,6 (1,9—3,7) | р1—3=0,04 |
| IgM | г/л | 1,20 (0,50—1,80) | 0,8 (0,6—1,3) | 2,1 (1,8—3,6) | р1—3=0,03; p2—3=0,01 |
| IgG | г/л | 10,30 (8,18—14,12) | 7,4 (6,3—10,8) | 7,6 (7,2—13,5) | — |
При изучении гуморального звена иммунитета (содержания иммуноглобулинов) выявлено увеличение IgA (р1—3=0,04) и IgM (р1—3=0,03; p2—3=0,01) у больных с IgE-опосредованным ХРС относительно участников контрольной группы.
В результате корреляционного анализа между показателями у пациентов с ХРС, IgE-опосредованным ХРС и участников контрольной группы зарегистрированы новые патогенетически значимые прямые зависимости, которые нехарактерны для лиц контрольной группы. Установлены различия как по характеру полученных корреляций, так и по их количеству (у пациентов с ХРС и с IgE-опосредованным ХРС — по 19 связей, у лиц контрольной группы — 2 связи) (табл. 2). У лиц контрольной группы выявлены следующие корреляционные связи: между CD3+-клетками и CD4+ (r=0,554), а также между CD3+ и CD8+ (r=0,532).
Таблица 2. Характеристика корреляционных взаимосвязей (r) между фенотипическими субпопуляциями лимфоцитов и иммуноглобулинов у пациентов с IgE-опосредованным хроническим риносинуситом, хроническим риносинуситом другой этиологии и у лиц контрольной группы
| Показатели | CD4+ | CD8+ | CD16+ | CD19+ | IgA | IgM | IgG |
| Т-лимфоциты (CD3+) | 0,726 (p=0,008) | 0,644 (p=0,004) | 0,573 (p=0,03) | 0,632 (p=0,000) | — | 0,421 (p=0,04) | 0,578 (p=0,002) |
| 0,776 (p=0,02) | 0,692 (p=0,005) | 0,581 (p=0,002) | 0,537 (p=0,007) | — | 0,478 (p=0,03) | 0,521 (p=0,03) | |
| 0,554 (p=0,004) | 0,532 (p=0,03) | — | — | — | — | — | |
| Т-хелперы (CD4+) | 0,525 (p=0,008) | 0,785 (p=0,027) | — | — | 0,533 (p=0,02) | 0,586 (p=0,0005) | |
| 0,593 (p=0,03) | 0,621 (p=0,03) | — | — | 0,602 (p=0,003) | 0,563 (p=0,03) | ||
| — | — | — | — | — | — | ||
| Т-супрессоры (CD8+) | 0,682 (p=0,001) | 0,487 (p=0,007) | — | 0,632 (p=0,001) | 0,592 (p=0,0005) | ||
| 0,677 (p=0,001) | 0,502 (p=0,003) | — | 0,612 (p=0,002) | 0,721 (p=0,003) | |||
| — | — | — | — | — | |||
| NK-клетки (CD16+) | 0,467 (p=0,003) | — | 0,519 (p=0,003) | 0,515 (p=0,001) | |||
| 0,432 (p=0,01) | — | 0,548 (p=0,004) | 0,521 (p=0,001) | ||||
| — | — | — | — | ||||
| B-лимфоциты (CD19+) | — | 0,463 (p=0,005) | 0,479 (p=0,002) | ||||
| — | 0,501 (p=0,002) | 0,462 (p=0,03) | |||||
| — | — | — |
Примечание. Представленные значения r соответствуют p=0,05; верхняя строка — значения показателя у пациентов с IgE-опосредованным хроническим риносинуситом; средняя строка — пациенты с ХРС; нижняя строка — значения показателя у лиц контрольной группы.
У пациентов всех групп выявлены следующие корреляционные связи: между CD3+ и CD4+-клетками (r=0,726, r=0,776), CD3+ и CD8+ (r=0,644, r=0,692), между зрелыми T-лимфоцитами (CD3+) и CD16+ (r=0,573, r=581), CD3+ и CD19+ (r=0,632, r=0,537), CD3+ и IgM (r=0,421, r=0,478), CD3+ и IgG (r=0,578, r=0,521); между T-хелперами (CD4+) и CD8+ (r=0,525, r=593), CD4+ и CD16+ (r=0,785, r=0,621), CD4+ и IgM (r=0,533, r=0,602), CD4+ и IgG (r=0,586, r=0,563); между T-киллерами/супрессорами (CD8+) и CD16+ (r=0,682, r=0,677), CD8+ и CD19+ (r=0,487, r=0,502), CD8+ и IgM (r=0,632, r=0,612), CD8+ и IgG (r=0,592, r=0,721); между NK-клетками (CD16+) и CD19+ (r=0,467, r=0,432), CD16+ и IgM (r=0,519, r=0,548), CD16+ и IgG (r=0,515, r=0,521); между B-лимфоцитами (CD19+) и IgM (r=0,463, r=0,501), CD19+ и IgG (r=0,479, r=0,462).
Обсуждение
Важная роль в развитии и течении ХРС отводится иммунным механизмам с учетом инфекционных, аллергических и других факторов в патогенезе заболевания. ХРС является широко распространенным во всем мире заболеванием, и ежегодно количество больных ХРС, особенно IgE-опосредованной формой, по мнению ряда авторов, будет только увеличиваться, поэтому чрезвычайно актуальным является изучение регуляторной активности клеток иммунной системы, а также содержания иммуноглобулинов у данной категории пациентов.
При анализе результатов обследования выявлены нарушения в основных популяциях лимфоцитов у пациентов, указывающие на гиперактивацию как T-, так и B-клеточного иммунного ответа. Об этом свидетельствует увеличение уровня T-лимфоцитов (CD3+), NK-лимфоцитов (CD16+) и B-лимфоцитов у всех больных с ХРС, что указывает на развитие сложных иммунных реакций с участием клеток врожденного и адаптивного иммунитета. Более выраженные нарушения в иммунном статусе выявляются у пациентов с IgE-опосредованными ХРС, имеется более выраженная активация Т-клеточного иммунного звена за счет увеличения клеток T-хелперов (CD4+), T-киллеров/супрессоров (CD8+); дисбаланс в их количестве сопровождается снижением их соотношения в иммунорегуляторном индексе относительно показателей у лиц контрольной группы. Выявленное нами увеличение всех изучаемых субпопуляций Т-лимфоцитов, вероятно, обусловлено хронической стимуляцией иммунной системы сложными этиологическими факторами, включая инфекционные агенты и аллергические реакции. Повышение количества NK-клеток также отражает активность эффекторных клеток и наличие активного воспалительного процесса у больных [11].
Активация иммунной системы у больных с ХРС также связана с увеличением содержания зрелых В-лимфоцитов (CD19+), при этом только у пациентов с IgE-опосредованным ХРС выявлялось увеличение содержания двух иммуноглобулинов. Повышение содержания секреторного иммуноглобулина (IgA) и IgM свидетельствует о более выраженном воспалительном процессе при данном состоянии [12].
В результате корреляционного анализа, проведенного между субпопуляциями лимфоцитов и иммуноглобулинов у пациентов с ХРС и IgE-опосредованным ХРС, обнаружены новые зависимости по количеству и характеру, отличные от контрольной группы. У пациентов с ХРС и с IgE-опосредованным ХРС выявлено по 19 связей, у контрольной группы — только 2 связи. Наибольшее количество зависимостей выявлено, с одной стороны, между зрелыми Т-лимфоцитами и Т-хелперами, цитотоксическими лимфоцитами, NK-клетками, В-лимфоцитами, иммуноглобулинами M и G, с другой стороны, у пациентов с ХРС и IgE-опосредованным ХРС (по 6 связей), что указывает на важную роль зрелых Т-лимфоцитов во всех иммунных реакциях при данных заболеваниях. Не получено ни одной корреляционной зависимости с иммуноглобулином А, несмотря на то что данный показатель повышался при IgE-опосредованном ХРС, вероятно, это связано с его функцией при данном состоянии. При ХРС, особенно при IgE-опосредованном ХРС, воздействие сложных этиологических факторов приводит к выделению компонентов иммунной системы для выполнения защитных функций организма. Полученные результаты доказывают наличие более высокой нагрузки на иммунную систему пациентов с IgE-опосредованным ХРС, так как для реализации ее функциональных возможностей включается большее количество компонентов иммунной системы, что ведет к иммунному перенапряжению и способствует прогрессированию патологии [13—15].
Заключение
Таким образом, у пациентов с ХРС и IgE-опосредованным хроническим риносинуситом выявлена гиперактивация как в Т-, так и в В-клеточном звеньях иммунитета, проявляющаяся увеличением уровня T-лимфоцитов (CD3+), NK-лимфоцитов (CD16+) и B-лимфоцитов. Более выраженные нарушения в иммунном статусе выявляются у пациентов с IgE-опосредованным ХРС, имеется более выраженная активация Т-клеточного иммунного звена за счет увеличения клеток T-хелперов (CD4+), T-киллеров/супрессоров (CD8+), дисбаланс в их количестве сопровождается снижением их соотношения в иммунорегуляторном индексе. Активация иммунной системы у больных ХРС также связана с увеличением содержания зрелых В-лимфоцитов (CD19+), при этом только у пациентов с IgE-опосредованным ХРС выявлялась гипергаммаглобулинемия по классам А и М. Изменения в иммунном статусе свидетельствуют о нарушении иммунной регуляции, подтверждающемся выявленными корреляционными зависимостями между субпопуляциями лимфоцитов и иммуноглобулинов, реализующих иммунный ответ при данном состоянии. Наибольшее количество нарушений регуляции связано со зрелыми Т-лимфоцитами как при хроническом риносинусите, так и при IgE-опосредованном хроническом риносинусите, при этом полностью сохраняется функция только IgA.
Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
1 European Position Paper on Rhinosinusitis and Nasal Polyps 2020. Rhinology. Supplement. 2020;29:1-464. Accessed September 23, 2023. https://rhinology.ru/wp-content/uploads/2020/03/epos2020.pdf