Результаты и обсуждение

Исследование пролиферативной активности по ядерному белку Ki-67 при ЭГ показало наличие иммунопозитивных клеток только в ростковом слое (см. рисунок,

а, б). При SIN и CIS во всех случаях пролиферация клеток установлена как в мальпигиевом слое эпителия, так и в шиповатом (см. рисунок, д, е, и, к). При П.Р. пролиферация клеток выявлена по периферии и в центре солидных образований (см. рисунок, н, о). Количественные показатели представлены в таблице.

Митотическую активность изучали с использованием ядерного белка фосфогистона Н3. При Э.Г., SIN и CIS митозы выявлены в зонах пролиферации клеток (см. рисунок, в, ж, л). Количественные показатели представлены в таблице.

Поскольку белок СК15 является цитоплазматическим, при ИГХ-исследовании отмечали окрашивание цитоплазмы эпителиоцитов в коричневый цвет. При Э.Г. установлено интенсивное окрашивание только клеток мальпигиевого слоя, в вышележащих слоях реакция отсутствовала либо была слабой (см. рисунок, г). При SIN все клеточные слои были интенсивно окрашены (см. рисунок, з). Для CIS отмечено снижение интенсивности окрашивания цитоплазмы клеток как мальпигиевого, так и шиповатого стоя, однако отмечали единичные клетки с выраженной цитоплазматической ИГХ-реакцией (см. рисунок, м). Подобную ИГХ-картину наблюдали и при ПР СОР (см. рисунок, р). Количественные показатели представлены в таблице. В 9 (37,5%) случаях низкодифференцированного ПР реакция отсутствовала.

Из представленных в таблице данных видно, что при дисплазии эпителия СОР пролиферирующие клетки появляются в шиповатом слое, отмечается также увеличение пролиферативной активности клеток в ростковом слое. Митотическая активность клеток во всех исследуемых группах достоверно не различается. Наиболее выраженная экспрессия белка СК15 наблюдается при SIN СОР с интенсивным окрашиванием цитоплазмы во всех слоях. При CIS резко снижается экспрессия этого белка в ростковом и шиповатом слоях, а при ПР она полностью отсутствует в центральной зоне и резко снижена в периферической.

При проведении рангового дисперсионного анализа пролиферативной активности клеток в исследуемых группах Н-критерий составил 19,03 (p<0,01) для мальпигиевого слоя и 38,35 (p<0,01) для шиповатого, что указывает на неоднородность сравниваемых показателей.

Достоверные различия пролиферативной активности клеток в мальпигиевом слое отмечали между ЭГ и SIN (U=99,5; p<0,01), ЭГ и CIS (U=28,0; p<0,048), также в мальпигиевом слое при ЭГ и периферической зоне при ПР СОР (U=32,0; p<0,01). При сравнении других групп различия были недостоверны (см. таблицу). В шиповатом слое достоверные отличия пролиферативной активности эпителиальных клеток установлены между ЭГ и SIN (U=8,5; p<0,01), ЭГ и CIS (U=0; p<0,01), подобные различия были достоверны между шиповатым слоем при ЭГ и центральной зоной ПР СОР (U=0; p<0,01). В других исследуемых группах различия по маркеру Ki-67 были недостоверны (см. таблицу).

При проведении рангового дисперсионного анализа митотической активности клеток в исследуемых группах Н-критерий составил 2,134 (p=0,54), что указывает на однородность сравниваемых показателей и отсутствие достоверных различий между ними (см. таблицу).

Ранговый дисперсионный анализ экспрессии белка СК15 установил неоднородность сравниваемых показателей в группах по критерию Краскела—Уоллиса. Для мальпигиевого слоя Н-критерий составил 58,97 (p<0,01) и для шиповатого — 59,48 (p<0,01).

В интенсивности окрашивания цитоплазмы клеток по белку СК15 в мальпигиевом слое достоверные различия установлены между ЭГ и SIN (U=42,0; p<0,01), ЭГ и CIS (U=0; p<0,01), SIN и CIS (U=0; p<0,01), также в мальпигиевом слое при ЭГ и периферической зоне при ПР (U=0; p<0,01) и SIN и ПР (U=0; p<0,01). При сравнении CIS и ПР различия были недостоверны (см. таблицу). В шиповатом слое достоверные различия выявлены между ЭГ и SIN (U=0; p<0,01), SIN и CIS (U=0; p<0,01), а также в шиповатом слое при SIN и центральной зоне при ПР (U=0; p<0,01). В других исследуемых группах достоверных различий не выявлено (см. таблицу).

При исследовании корреляционных отношений установлена достоверная умеренная положительная корреляция между ИП в шиповатом слое и МА при SIN (r=0,76, p<0,05), достоверная сильная положительная корреляция между ИП в шиповатом слое и МА при CIS (r=0,96; p<0,05) и достоверная умеренная положительная корреляция между ИП и интенсивностью окрашивания цитоплазмы по белку СК15 в шиповатом слое при SIN (r=0,48; p<0,05). При изучении зависимости интенсивности окрашивания цитоплазмы клеток по белку СК15 от их пролиферативной активности установлена слабая отрицательная корреляция (r=–0,258; p<0,05). Более выраженные корреляционные отношения установлены между ИП в шиповатом слое и МА (r=0,431; p<0,05) по сравнению с мальпигиевым слоем (r=0,291; p<0,05).

Повышение пролиферативной активности клеток является одним из важных звеньев патогенеза опухолевого роста. Белок Ki-67 считается универсальным маркером пролиферирующих клеток. Известно, что пролиферативная активность эпителиоцитов повышается как в базальном слое, так и в шиповатом в процессе опухолевой трансформации клеток СОР. Маркеры М.А., которые выявляются в определенных фазах клеточного цикла, дают возможность лучше прогнозировать течение заболевания, чем маркер Ki-67, который окрашивает ядра во всех фазах пролиферации, кроме G0 [11]. Для этого можно использовать белок фосфогистон Н3, появляющийся в позднюю G2- и М-фазу клеточного цикла. Гистон 3 — это ядерный белок, который вместе с другими гистонами формирует основную часть хроматина эукариотической клетки. Маркер РНН3 специфично выявляет гистон Н3 только в процессе его фосфорилирования в серин 10 или серин 28 [9]. Мы провели исследование МА в эпителии СОР на разных этапах малигнизации, которое не выявило достоверных различий во всех исследуемых группах.

Цитокератины (кератины) — белки, которые формируют промежуточные филаменты цитоскелета во всех эпителиальных клетках и функционируют как супрамолекулярный каркас, соединяя цитоплазму с мембраной собственной и соседних клеток [12]. Их особенностью является способность к полимеризации в филаменты без участия вспомогательных белков. Кератиноциты многослойного плоского эпителия в митотически активном базальном слое всегда экспрессируют пару К5/К14. В процессе дифференцировки базальные кератиноциты выходят из клеточного цикла и двигаются в поверхностные слои эпителия. В мигрирующих на поверхность эпителия клетках подавляется экспрессия белков К5/К14 и активируется экспрессия другой пары кератиноцитов в зависимости от типа ткани. В ороговевающем эпителии кожи и десны дифференцированные кератиноциты экспрессируют пару белков К1/К10, тогда как в неороговевающем многослойном плоском эпителии — пару К4/К13. СК15 относится к I типу кератинов, который не имеет белка-партнера из II типа белков. Известно, что в неизмененном эпителии экспрессия СК15 отмечается только в клетках базального слоя [13], а изменения его экспрессии отмечаются при различных злокачественных опухолях [10]. В настоящем исследовании установлены увеличение экспрессии данного белка по мере нарастания диспластических изменений в эпителии СОР и значительное ее снижение при П.Р. Возможно, появление большого количества белка СК15 при SIN связано с перемещением эпителиальных клеток от базальной мембраны к поверхности без должной дифференцировки, что характерно для диспластических процессов в целом [7]. При CIS и ПР количество белка СК15 в цитоплазме резко снижается, а при низкодифференцированном ПР этот белок полностью отсутствует в опухолевых клетках. Подобный процесс, помимо опухолевого роста, возможен в период эмбриогенеза и при заживлении ран. При опухолевом росте данную закономерность можно объяснить феноменом эпителиально-мезенхимальной трансформации, в процессе которой опухолевые эпителиальные клетки приобретают свойства мезенхимальных клеток, которые обладают способностью инфильтрировать. При этом образуются подвижные клетки вместо жестко сцепленных межклеточными связями эпителиальных клеток [11].