Введение

Одной из самых сложных проблем своевременной диагностики на сегодняшний день остается морфологическая верификация рака яичников [1].

Рак яичников (РЯ) — это группа гетерогенных по морфологической структуре заболеваний, которые продолжают оставаться одними из наиболее прогностически неблагоприятных среди всей онкологической патологии. С 2011 по 2021 г. в России отмечено увеличение заболеваемости РЯ с 64,5 до 80,5 больных на 100 тыс. населения. Из них у 39,6% больных РЯ диагностирован на I—II стадии, у 38,8% — на III стадии, у 20,6% — на IV стадии [2].

Обязательным и решающим в установлении диагноза и выборе тактики лечения больных с опухолями яичника является морфологическое исследование [3]. Пункция яичника для получения аспирата допускается лишь в том случае, если полностью исключена малигнизация. При наличии выпотов в серозных полостях основным методом диагностики злокачественных новообразований является цитологическое исследование экссудата [4]. Однако диагностическая точность существующего традиционного цитологического исследования выпотных жидкостей не превышает 40—60%, что недостаточно для установления точного морфологического диагноза. Одной из причин низкой точности классического цитологического метода исследования выпотных жидкостей является недостаточное содержание в выпотах опухолевых и мезотелиальных клеток [4]. Асцитическая жидкость является легкодоступным и ценным источником клеточного и внеклеточного компонентов, задействованных в овариальном канцерогенезе. Среди растворимых высокомолекулярных и низкомолекулярных компонентов асцита ведется активный поиск дополнительных прогностических и предикторных факторов, позволяющих уточнить молекулярный фенотип рака и персонифицировать лечение больных РЯ [5]. Возможности морфологической диагностики опухолей яичников хорошо проанализированы в отечественной литературе [6].

В настоящее время в некоторых лабораториях успешно используют новый подход к приготовлению и обработке цитологических препаратов с использованием клеточных блоков; он расширяет возможности применения иммуногистохимического исследования (ИГХИ), что имеет большое значение при уточнении цитологических диагнозов. Не вызывает сомнений необходимость применения дополнительных методов (клеточные блоки, ИГХИ) для улучшения точности цитологической диагностики опухолей яичника. Однако данных о возможности использования ИГХИ на материале клеточных блоков выпотных жидкостей пациенток с опухолями яичников недостаточно.

Материал и методы

Исследование основано на материале выпотных жидкостей, полученных от 39 пациенток, проходивших обследование и лечение в различных медицинских учреждениях города Москвы в период 2019—2022 гг.

Возраст пациенток составил от 22 до 84 лет (средний возраст 50,5±12,8 года). У 22 пациенток гистологически установлена серозная аденокарцинома яичника, у 17 пациенток (контрольная группа) — реактивные выпоты. Гистологические исследования выполнены в патолого-анатомических отделениях учреждений здравоохранения города Москвы, где проводилось хирургическое лечение.

Материал для цитологического исследования был получен в ходе пункции передней брюшной стенки или трансторакальной пункции. Всем пациенткам проведено цитологическое исследование и ИГХИ с маркерами p53, p63, TTF-1, CEA на клеточных блоках выпотных жидкостей. Оценку иммуногистохимической реакции проводили качественно (по наличию коричневого окрашивания зоны локализации изучаемого антигена).

При определении экспрессии CEA оценивали мембранную и цитоплазменную реакции. При определении экспрессии p53, p63 и TTF-1 оценивали ядерную реакцию.

Приготовление клеточного блока выпотной жидкости проводили следующим образом.

Рабочий раствор желатина приготавливали из гранулированного пищевого желатина объемом 1 мл, растворенного в горячей воде (t +45/50°C) в соотношении 1:5—1:12. В дальнейшем желатин хранили в холодильнике (t +4°C). Предварительно растопленный желатин смешивали с клеточным осадком выпотной жидкости в соотношении 1:1. Для фиксации материала использовали 10% забуференный формалин (t +4°C) в соотношении 10:1 к объему клеточного блока. Пробирку с клеточным блоком хранили в холодильнике при t +4°C. Гистологическую проводку осуществляли по аналогии с биопсийным материалом.

Приготовление препаратов для ИГХИ на клеточных блоках выпотной жидкости проводили согласно протоколу на аппарате Dako CoverStainer с антителами этого же производителя.

Статистическую обработку результатов исследования проводили по общепринятым методикам с использованием пакета StatTech v. 2.6.2 (разработчик — ООО «Статтех», Россия). Статистически достоверными считались различия между сравниваемыми величинами при уровне p<0,05.

Результаты

Для морфологической оценки материала клеточных блоков из выпотной жидкости готовили препараты, окрашивали их гематоксилином эозином (рис. 1) и проводили ИГХИ. При определении экспрессии СЕА оценивали мембранную и цитоплазменную экспрессию (рис. 2). Для определения экспрессии p63, TTF-1 и p53 оценивали ядерную реакцию (рис. 3).

Рис. 1. Рак яичника. Опухолевые клетки в препарате клеточного блока выпотной жидкости.

Окраска гематоксилином и эозином, ×200.

Рис. 2. Рак яичника. ИГХИ на клеточном блоке выпотной жидкости.

Отсутствие экспрессии CEA в опухолевых клетках, ×200.

Рис. 3. Рак яичника. ИГХИ на клеточном блоке выпотной жидкости.

Опухолевые клетки с выраженной положительной ядерной экспрессией p53, ×200.

При проведении ИГХИ маркеров CEA, TTF-1, p53, p63 в группе пациенток с РЯ и контрольной группе (пациентки с реактивным выпотом) получены следующие результаты. В группе пациенток с РЯ отсутствовала экспрессия маркеров CEA и TTF-1, была выявлена положительная экспрессия маркера p53 в 18 наблюдениях и маркера p63 в одном наблюдении. В контрольной группе отсутствовала экспрессия всех изучаемых маркеров.

Результаты экспрессии маркеров в группе пациенток с РЯ и контрольной группе (пациентки с реактивным выпотом) представлены в таблице.

Таблица. Экспрессия маркеров в соответствии с гистологическими заключениями

На основании полученных результатов, можно сделать вывод о том, что у пациенток с РЯ из всех иммуногистохимических маркеров только p53 статистически значимо отличался от контрольной группы (p<0,001). Таким образом, имеется корреляция между наличием у пациенток РЯ и экспрессией маркера p53 в материале клеточного блока выпотной жидкости.

Исходя из полученных в нашем исследовании результатов, можно рассматривать иммуногистохимическое исследование маркера p53 на материале клеточных блоков выпотной жидкости в качестве потенциального дополнительного маркера для дифференциальной диагностики доброкачественных поражений и серозного рака яичников (p<0,001).

Заключение

Сложность морфологической диагностики РЯ заключается в том, что, как правило, она выполняется во время операции, в связи с чем в первичной диагностике важное значение имеет цитологическое исследование выпотов в брюшной и плевральной полостях. Однако в исследовании выпотов остается ряд трудностей, связанных со сложностью дифференциальной диагностики клеток опухоли и пролиферирующих клеток мезотелия, а также с определением первичного очага поражения и гистологической формы новообразования.

Таким образом, существует потребность определения роли и новых возможностей диагностики опухолей яичника с применением современных дополнительных методов, в частности клеточных блоков и ИГХИ. Исследование клеточных блоков из выпотных жидкостей позволяет повысить эффективность диагностики патологических состояний. Однако в настоящее время не выделены иммуногистохимические маркеры, обладающие стопроцентной чувствительностью и специфичностью; кроме того, значение их в диагностике злокачественных поражений яичников еще не определено. В связи с этим актуален и постоянно ведется поиск новых маркеров и оптимального их сочетания.

В нашем исследовании в ходе проведенного ИГХИ маркеров TTF-1, CEA, p63, p53 в материале клеточных блоков выпотных жидкостей у пациенток с РЯ определена корреляционная взаимосвязь между экспрессией маркера p53 и наличием у пациенток РЯ, что позволяет рассматривать маркер p53 как потенциальный дополнительный метод для дифференциальной диагностики серозной аденокарциномы яичника, однако требуется проведение дальнейших исследований с большей выборкой пациенток.

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.