ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ
Данная работа подчеркивает важность оптимизации нуклеотидной последовательности целевого гена при разработке вакцинных препаратов. Целью исследования являлось сравнение иммуногенности рекомбинантных аденовирусов, экспрессирующих ген гликопротеина S вируса SARS-CoV-2 варианта Омикрон (BA.5.3.1) с оптимизированной нуклеотидной последовательностью (Ad5-S-BA5opt) или неоптимизированной (Ad5-S-BA5).
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ
Наращивание рекомбинантных аденовирусов проводили на культуре клеток HEK293, очистку осуществляли методом ультрацентрифугирования в ступенчатом градиенте плотности CsCl. Полученные препараты аденовирусов характеризовали по подлинности (методом ПЦР в режиме реального времени (ПЦР-РВ) и иммуноблоттинга), количеству вирусных частиц (спектрофотометрически) и инфекционному титру (титрованием по конечным точкам ТЦД50). Оценку титра RBD-специфических IgG антител в сыворотке крови иммунизированных животных проводили методом иммуноферментного анализа (ИФА).
РЕЗУЛЬТАТЫ
По результатам исследований на животной модели вектор, экспрессирующий оптимизированный ген (Ad5-S-BA5opt), приводил к формированию более высокого уровня IgG-специфических антител по сравнению с аналогичным вектором, содержащим ген белка «дикого типа». Особенно интересным является факт, что подход, направленный исключительно на оптимизацию нуклеотидной последовательности целевого гена, а не других компонентов вектора, способен внести значительные изменения в иммуногенность.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Полученные результаты имеют важное значение для разработки новых более эффективных стратегий создания вакцин и препаратов для генной терапии. Оптимизация нуклеотидной последовательности может привести к повышению стабильности мРНК и значительному увеличению трансляционной эффективности, и как следствие усилению протективных свойств кандидатного препарата. Можно полагать, что данный метод окажется перспективным для разработки вакцин против вирусов, содержащих низкоиммуногенные антигены.
