Одним из приоритетных научных направлений для судебной медицины и судебно-медицинской экспертной практики является диагностика давности наступления смерти (ДНС) [1—4].

При назначении судебно-медицинских экспертиз трупов чаще прочих перед экспертом ставят вопрос об установлении ДНС. Это обусловлено необходимостью правильного принятия решений в уголовном и гражданском судопроизводстве.

В настоящее время разработано и предложено множество методов и методик диагностики ДНС, основанных на визуально-описательных, лабораторно-инструментальных диагностических критериях. Несмотря на это, по данной проблеме остается целый ряд нерешенных задач [5].

В работе врача-судебно-медицинского эксперта может возникнуть ситуация, когда для производства экспертизы в качестве объекта ему предоставлен забальзамированный труп, и среди прочих вопросов поставлен вопрос о времени наступления смерти. В нашей практической деятельности мы столкнулись с таким случаем. Проанализировав научную литературу, мы не нашли сведений о диагностических критериях установления ДНС у забальзамированных трупов. Общепринятые методы, применяемые практикующими экспертами при решении такой задачи, оказались неэффективны и неинформативны, так как мышечное окоченение было разрешено, трупные пятна отсутствовали, значения ректальной термометрии и пробы Прокопа в заданных условиях использовать было нельзя.

Вышеизложенное побудило нас провести экспериментальное исследование, позволяющее установить возможность диагностики ДНС у забальзамированных трупов.

Цель исследования — изучить возможность исследования стекловидного тела глаза от забальзамированных трупов методом спиновых зондов для разработки диагностических критериев давности наступления смерти.

Материал и методы

В качестве метода исследования был выбран хорошо зарекомендовавший себя для диагностики времени наступления смерти метод спиновых зондов электронного парамагнитного резонанса (ЭПР) [6]. Перспективность выбора метода спиновых зондов обусловлена тем, что развитие посмертных изменений связано с нарушением окислительно-восстановительных процессов на субклеточном и молекулярном уровнях. В свою очередь, это приводит к нарушению и прекращению обмена веществ, в результате чего происходят разрушение и дезинтеграция клеточных структур и, как следствие, изменение биохимических и биофизических показателей.

Таким образом, изучение посмертных изменений, происходящих в клетках, позволит достовернее диагностировать ДНС. Метод спиновых зондов ЭПР дает возможность изучать эти процессы, получать информацию о биологическом объекте на органном, клеточном, субклеточном и молекулярном уровнях [6].

Объектом изучения в настоящем исследовании послужило стекловидное тело по причине его преимуществ перед другими тканями и органами тела человека: оно расположено в замкнутом пространстве, окружено длительно не поддающимися гнилостным изменениям оболочками, хорошо защищено от внешних воздействий, стерильно, обладает сравнительно постоянным составом и, что немаловажно, доступно для изъятия [6].

Исследования проводили на практическом судебно-медицинском материале. Всего изучили 6 стекловидных тел из левого и правого глаза трех забальзамированных трупов лиц мужского пола, умерших скоропостижно от сердечно-сосудистой патологии. Время наступления смерти в каждом случае было известно из сопроводительной документации (смерть в присутствии медицинских работников выездных бригад скорой медицинской помощи). Исследования проводили в соответствии с действующим законодательством Российской Федерации.

Для бальзамирования тел применяли артериальный (внутрисосудистый) способ введения через общую сонную артерию консервирующей жидкости, содержащей в том числе до 1,5—2% формалина.

На момент исследования температура окружающего воздуха составляла +21±2 °C, относительная влажность воздуха — 40—60%.

Стекловидное тело в объеме 0,3 мл получали путем пункции глазного яблока забальзамированного трупа. Пункцию осуществляли 2-миллиметровым стерильным медицинским шприцем с иглой для внутримышечных инъекций. Вкол иглой производили через роговицу, отступив от радужной оболочки на 0,2 см. Следует соблюдать определенное направление иглы — несколько кзади и к центру глаза, глубина проникновения не должна превышать 8—12 мм [6].

Использовали раствор водорастворимого спинового зонда 1-oxyl-4-oxo-2.2.6.6-tetramethyl-piperidin. Раствор изготавливали путем разбавления спинового зонда дистиллированной водой до концентрации 10−2 М.

Образцы для исследования получали путем добавления 30 мкл раствора спинового зонда 1-oxyl-4-oxo-2.2.6.6-tetramethyl-piperidin в 0,3 мл стекловидного тела до концентрации зонда в образце 10−4 М/л. Полученный образец инкубировали 1,5—2,0 мин, после чего помещали в резонатор радиоспектрометра и производили запись спектра ЭПР (всего было изучено 510 спектров). В период одного исследования запись спектра каждого образца осуществляли каждые 5 мин до его стабилизации или полного исчезновения. Эту методику проводили с каждым из 6 образцов ежедневно в течение 10 сут после бальзамирования.

Параметром, отражающим состояние спинового зонда после добавления его в стекловидное тело, была выбрана скорость реакции восстановления спинового зонда. При инкубации спинового зонда в стекловидном теле они вступали в реакции, которые приводили к восстановлению зонда. В результате спиновый зонд терял свои парамагнитные свойства, что приводило к постепенному исчезновению сигнала ЭПР.

По изменению спектра ЭПР можно определить долю восстановленного за определенное время зонда по отношению к количеству первоначально введенного.

Поскольку уменьшение концентрации спинового зонда в исследуемом объекте происходит за счет протекания реакции восстановления, то реакцию его восстановления в соответствии с полученной зависимостью можно считать реакцией первого порядка и характеризовать ее константой скорости реакции восстановления спинового зонда — «К».

где А₀ — амплитуда центральной компоненты спектра, записанного через 1,5—2,0 мин после добавления зонда в образец; А — амплитуда центральной компоненты спектра, записанного в момент стабилизации спектра; t — время стабилизации спектра.

Анализ полученных результатов осуществляли с применением методов стандартной количественной статистики в соответствии с правилами, принятыми для медицинской статистики.

Результаты и обсуждение

Проведенные исследования позволили получить динамические ряды значений изменения скорости реакции восстановления спинового зонда в ткани стекловидного тела глаза забальзамированного трупа, количественно характеризующие его изменения в зависимости от давности бальзамирования.

После расчета константы «К» для каждых суток отдельно выявлена определенная закономерность снижения показателя с увеличением сроков бальзамирования (таблица).

Показатели скорости реакции восстановления спинового зонда в стекловидном теле глаза забальзамированного трупа

Примечание. Т — значение давности наступления смерти в сутках; M±m — среднее значение «К» ± ошибка среднего «К».

Как видно из данных таблицы, имеется закономерность в изменении скорости реакции восстановления спинового зонда: на 4-е сутки исследования стекловидного тела глаза забальзамированного трупа произошло снижение величины константы «К» от 1,6±0,11 до 0,009±0,0003.

С 4-х суток с момента бальзамирования трупа сигнал ЭПР от спинового зонда становится практически постоянным, изменяясь в диапазоне значений от 0,009±0,0003 до 0,007±0,0001. Это объясняется тем, что в стекловидном теле спиновый зонд взаимодействует с белками, а после внутрисосудистого введения раствора формалин проникает в том числе и в стекловидное тело глаза, разрушая белки. Поскольку формальдегид разрушает белки, то спиновому зонду не с чем вступать во взаимодействие [8].

Заключение

Предложенный метод спиновых зондов с исследованием стекловидного тела глаза у забальзамированных трупов позволяет определять время в интервале с 1-х по 4-е сутки после бальзамирования с точностью до одних суток.

С учетом относительной простоты методики, высокой точности метода и возможности проведения исследований забальзамированных трупов установлена принципиальная возможность разработки диагностических критериев ДНС, что доказывает перспективность дальнейших исследований в этом направлении.

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.