Узелковая дегенерация Зальцманна (УДЗ) представляет собой невоспалительное заболевание глазной поверхности, характеризующееся наличием проминирующих голубовато-серых помутнений в роговице [1, 2]. Роговичная строма может терять прозрачность по нескольким причинам: в результате отека, воспалительной инфильтрации, избыточного накопления внеклеточного матрикса [3]. Последний сценарий, связанный с нарушением ремоделирования матрикса из-за избыточной активации миофибробластов, по-видимому, и наблюдается при УДЗ [4], что делает эту нозологию интересной с точки зрения изучения процессов, связанных с фиброгенезом в строме роговицы. Клетки, полученные из такой патологической ткани, могут быть моделью для тестирования антифибротических препаратов.

На ранних стадиях УДЗ протекает бессимптомно, однако по мере прогрессирования процесса и распространения его на более глубокие слои заболевание может приводить к выраженному нарушению зрительных функций и снижению качества жизни [5—7].

Как правило, УДЗ возникает как следствие хронического воспаления передней поверхности глаза, в результате искаженной формы ремоделирования эпителиального дефекта с нарушением функции стромальных фибробластов и развитием их гиперактивации [8].

О срыве регуляторных механизмов регенерации свидетельствует ряд наблюдений. Так, в эпителии, покрывающем узелки, зарегистрирована повышенная экспрессия матриксной металлопротеиназы-2 (MMP-2) [8] — фермента, который растворяет коллаген IV типа, что нарушает целостность боуменовой мембраны и, как следствие, обеспечивает проникновение в строму трансформирующего фактора роста (TGF)-β1 и тромбоцитарного фактора роста (PDGF) [9]. Воздействие этих факторов роста инициирует дифференцировку миофибробластов, которые мигрируют в переднюю строму и откладывают дезорганизованные компоненты экстрацеллюлярного матрикса (ЭЦМ), формирующие узелки. Об активации миофибробластов в зоне узелков свидетельствует положительное окрашивание стромы в этой зоне на α-гладкомышечный актин (α-SMA) [8]. В норме после заживления раны миофибробласты подвергаются апоптозу, при хроническом же воспалении они продолжают продуцировать белки ЭЦМ, что приводит к нарушению архитектуры ткани и ее патологическому фиброзированию с отложением дезорганизованных волокон коллагена в эпителиальных слоях роговицы и формированием рубцовых изменений в передней строме [10].

Среди офтальмологов не существует единого мнения об оптимальной тактике медикаментозного и хирургического лечения УДЗ. На ранних стадиях предпочтительной является консервативная терапия, при распространении патологических очагов на оптическую ось роговицы и снижении остроты зрения рекомендовано хирургическое лечение, заключающееся в удалении узелков — нодулэктомии. При этом доля случаев рецидивирования, по данным разных авторов, может достигать 31% [11].

Способность митомицина C (ММС) ингибировать пролиферацию фибробластов и синтез коллагена [11] подтолкнула исследователей к его применению в качестве средства адъювантной терапии. Интраоперационное применение ММС во время поверхностной кератэктомии привело к отсутствию рецидивов в послеоперационном периоде [12]. Высокая эффективность ММС у пациентов с прогрессирующей УДЗ может свидетельствовать о том, что ММС через ингибирование активированных фибробластов способен размыкать патологический круг формирования УДЗ [13, 14]. Результаты использования ММС немногочисленны. Кроме того, известно, что применение ММС ассоциировано с риском тяжелых осложнений. В связи с этим для разработки патогенетически ориентированных схем лечения УДЗ необходим поиск альтернативных современных и безопасных препаратов.

Пирфенидон (5-метил-1-фенил-2[1H]-пиридон) представляет собой противовоспалительный и антифиброзный препарат, клинически используемый в лечении идиопатического фиброза легких [15]. Исследования in vitro и in vivo подтвердили его влияние на ингибирование дифференцировки, пролиферации и высвобождения профибротических цитокинов миофибробластов [16, 17]. Пирфенидон дозозависимым образом ингибировал пролиферацию клеток в культурах клеток фибробластов теноновой капсулы человека, вызывал снижение подвижности клеток, а также снижение экспрессии профибротических белков TGF-β1 и -β2 [18]. Аналогичные результаты были опубликованы J. Wang с соавторами, согласно им препарат ингибировал миграцию клеток пигментного эпителия сетчатки, а также снижал уровень продукции фибронектина, фактора роста соединительной ткани, α-SMA и TGF-β [19]. В клеточной культуре фибробластов птеригиума пирфенидон аналогичным образом ингибировал пролиферацию и миграцию [20]. Исследования антифибротических свойств пирфенидона в профилактике рубцевания при хирургии глаукомы, дакриостеноза, посттравматической пролиферативной витреоретинопатии in vitro и на моделях лабораторных животных также продемонстрировали высокую эффективность и безопасность препарата [18, 21—24].

Циклоспорин A (ЦсА) является одним из наиболее перспективных иммунодепрессантов и широко используется для лечения различных воспалительных заболеваний поверхности глаза благодаря его способности снижать экспрессию провоспалительных цитокинов Т-клетками и подавлять местное воспаление [25]. ЦсА предотвращает активацию и ядерную транслокацию цитоплазматических факторов транскрипции, которые необходимы для активации Т-хелперов и продукции воспалительных цитокинов [26]. Действие ЦсА на резидентные стромальные клетки роговицы и конъюнктивы и негемопоэтические клетки менее известно. Влияние ЦсА на фибробласты исследовалось главным образом в связи с развитием гиперплазии десен, зарегистрированном при его системном применении. В экспериментах in vitro и in vivo были получены противоречивые данные, свидетельствующие как о стимулировании, так и об ингибировании фибробластов десны ЦсА [27,28]. Исследование воздействия препарата на клеточную культуру конъюнктивальных фибробластов продемонстрировало, что ЦсА снижает их пролиферацию [29]. Применение ЦсА на клеточной культуре, полученной от пациентов с птеригиумом, подтвердило ингибирующее действие на активацию и пролиферацию фибробластов, что указывает на потенциальный антифибротический эффект этого препарата [30—32].

Таким образом, перспективным является изучение роли фибротизации передней стромы при формировании узелков Зальцманна и использование клеточных культур от пациентов с УДЗ в качестве мишени для изучения антифибротических свойств препаратов.

Цель исследования — изучение антифибротических свойств препаратов «Пирфенидон» и «ЦсА» на клеточных культурах, полученных от пациентов с УДЗ.

Материал и методы

Этическая экспертиза. Исследование проведено в соответствии с международными требованиями и российскими этическими принципами и нормами. Информированное добровольное согласие было получено у всех пациентов, предоставивших материал для культивирования клеток. Протоколы были одобрены этическим комитетом и утверждены ученым советом ФГБНУ «НИИГБ им. М.М. Краснова». Все экспериментальные этапы проводили в лаборатории фундаментальных исследований в офтальмологии ФГБНУ «НИИГБ им. М.М. Краснова».

Образцы ткани роговицы получали во время кератэктомии, выполняемой по поводу УДЗ, подтвержденной данными анамнеза, биомикроскопического исследования, оптической когерентной томографии роговицы.

Критериями исключения пациентов из исследования являлись острые воспалительные процессы и новообразования переднего отрезка глаза.

Гистологическое исследование. Для оценки общей морфологии удаленных при УДЗ поверхностных слоев стромы роговицы образцы сразу после иссечения фиксировали в растворе глутарового альдегида, заливали в смолу для изготовления полутонких срезов. Полученные срезы окрашивали метиленовым синим и фуксином. Визуализацию проводили на микроскопе Leica DM 2500, фотосъемку осуществляли камерой Leica DFC320 с последующей обработкой изображений в программе Leica Application Suite.

Протокол диссоциации и культивирования. Образцы ткани диссоциировали в растворе коллагеназы 2 мг/мл в течение 2 ч при 37 °C, пипетировали для высвобождения клеток, осаждали, и полученную клеточную суспензию засевали на чашки Петри площадью 10 см². Клетки растили в среде RPMI 1640 с 10% фетальной бычьей сыворотки (Global Kang Biotechnology, Китай), 2 mM глутамина, антибиотиков (пенициллин 100 ед/мл; стрептомицин 100 мкг/мл), во влажной атмосфере при температуре 37 °C и 5% содержании СО₂. При достижении конфлюэнтного монослоя клетки пассировали с использованием 0,25% раствора Трипсин-ЭДТА. В работе использовали клетки 3—12-го пассажей. Все использованные культуральные реагенты — производства «ПанЭко» (Россия), если не указано иное.

Протокол окрашивания. Для типирования клетки 3-го пассажа рассеивали на чашки Петри с центральным отверстием для конфокальной микроскопии. Клетки фиксировали 10% формалином, после пермеабилизации и блокировки неспецифического связывания вносили первичные антитела к CK-19 (Invitrogen, MA5-15884), виментину (Invitrogen, MA3-745), α-SMA (Invitrogen, 14-9760-82), в разведении 1:200/1:20/1:100 соответственно, инкубировали в течение ночи при 4 °C. На следующий день после промывки добавляли вторичные антитела, конъюгированные с Alexa Fluor 594 (Invitrogen, A-11032) в разведении 1:500, и инкубировали в течение 1 ч при комнатной температуре. Для докраски ядер добавляли краситель Хёхст 33342 в концентрации 0,1 мкг/мл. Окраску визуализировали на инвертированном микроскопе Zeiss Axio Vert.A1 (Carl Zeiss AG, ФРГ) в режиме эпифлюоресценции. Фотофиксацию выполняли на фотоаппарат Canon700d через приложение EOS utility.

Использованные препараты. В эксперименте были использованы:

— порошковая форма препарата пирфенидон (пр-ва ЗАО «Обнинская химико-фармацевтическая компания», Россия). Для получения стокового раствора с концентрацией 1 мг/мл препарат сначала растворяли в воде для инъекций;

— препарат циклоспорин А 0,05% (Рестасис) производства «Аллерган Фармасьютикэлз Айэрлэнд» (Ирландия).

Для получения заданных в эксперименте концентраций препараты разводили питательной средой.

Метаболический тест. Клетки рассевали с плотностью 15 тыс./см² в лунки 96-луночного планшета за сутки до тестирования. На следующий день в лунки вносили исследуемый препарат в выбранных концентрациях. В качестве контрольных образцов использовали клетки, к которым добавляли соответствующий объем растворителя без действующего вещества. Анализ проводили через 24 и 48 ч после инкубации с препаратом. Для этого среду в каждой лунке меняли на свежую и добавляли к 100 мкл среды 20 мкл тетразолиевого красителя МТТ из стока 5 мг/мл, инкубировали 1,5 ч при 37 °C в атмосфере с 5% CO₂. Затем растворяли содержимое лунки в 100 мкл ДМСО, инкубировали на шейкере 15 мин для растворения гранул формазана. Оптическую плотность измеряли при длине волны 570 нм на планшетном фотометре Multiscan FC (Thermo, США).

Миграционный тест. Для оценки эффекта препаратов на миграционную способность была использована модель раны монослоя. Клетки рассевали на чашки Петри в плотности 30 тыс/см² за сутки до тестирования. Наносили линейный дефект — «царапину» носиком пипетки (до 100 мкл). Динамику закрытия дефекта оценивали после 24 и 48 ч инкубации клеток с препаратом. Площадь дефекта вычисляли после обработки изображения в программе ImageJ.

Оценка пролиферативной активности. Количество делящихся клеток оценивали визуально на фотографиях культур после экспозиции с тестируемым препаратом. Подсчитывали общее количество клеток на изображении и количество фигур митоза. Были обработаны 15 не пересекающихся полей зрения для каждой группы.

Подсчет времени удвоения популяции. Количество клеток подсчитывалось визуально на одном и том же поле зрения в течение 5 дней с использованием компактного вьюера Nexcope NCM (Novel, Китай) непосредственно в инкубаторе.

Оценка клеточной гибели. Для определения процента клеток, находящихся в стадии гибели (ранний апоптоз / поздний апоптоз / некроз), клеткам за сутки до анализа меняли среду на свежую с добавлением тестируемых препаратов. Через 24 ч окрашивали набором для обнаружения апоптоза ApoDetect в соответствии с руководством производителя (Invitrogen, 331200). Интактные клетки, а также клетки, обработанные препаратами, анализировали на проточном цитометре BeamCyte 1026M

Оценка уровня α-SMA. Для оценки уровня экспрессии α-SMA клетки рассевали плотностью 15 тыс/см² за сутки до тестирования. Через 24 ч после внесения препарата клетки снимали, фиксировали 10% формалином, после пермеабилизации и блокировки неспецифического связывания проводили окрашивание на α-SMA. Уровень экспресии анализировали на проточном цитометре BeamCyte 1026M.

Статистический анализ. Статистическую обработку полученных данных проводили в программе GraphPad Prism. Все данные представлены в виде среднего значения ± стандартное отклонение. Каждая планка погрешностей означает отклонение среди значений как минимум трех технических повторностей. Проверку на нормальность осуществляли с помощью теста Колмогорова—Смирнова. Для множественного сравнения данных использовали однофакторный дисперсионный анализ ANOVA. Значимость различия нескольких групп с контрольной группой оценивали с помощью критерия Даннетта. Уровень значимости p<0,05 принимали как статистически достоверный.

Результаты

Часть полученного интраоперационно биоптата, содержащего фрагменты ткани узелков, была отправлена на гистологическое исследование. На изготовленных полутонких срезах можно увидеть «узелки», сформированные дезорганизованными волокнами ЭЦМ и аморфным веществом. Строма узелка инфильтрирована активированными фибробластоподобными клетками, воспалительные клетки отсутствуют, что соответствует гистологической картине пролиферативной стадии воспаления с исходом в фиброз. Поверхность «узелка» возвышается над уровнем стромы, покрыта измененными эпителиоцитами. Боуменова мембрана в области узла отсутствует (рис. 1).

Рис. 1. Гистологический срез «узелка».

Заливка в смолу, окраска метиленовым синим, фуксином. Бар 50 мкм.

Из дублирующих фрагментов ткани узелков была получена клеточная культура фибробластного морфотипа — веретеновидной формы, с овальными ядрами. С помощью иммуноцитохимического окрашивания было показано, что клетки экспрессируют виментин и α-SMA, при этом экспрессия эпителиального маркера цитокератина-19 отсутствует (рис. 2). Такой паттерн окрашивания позволяет отнести эти клетки к миофибробластам. Диффузное расположение α-SMA в цитоплазме клеток позволяет предположить, что клетки находятся в фазе преактивации [33].

Рис. 2. Иммуноцитохимический профиль полученной культуры клеток.

Окрашивание антителами: а — к цитокератину-19; б — к виментину; в — к α-SMA (красный). Окрашивание ядер с использованием красителя Hoechst 33342 (синий). Эпифлюоресцентная микроскопия. Масштабная линейка — 50 мкм.

Время удвоения популяции в логарифмической фазе роста составило 33 ч для клеток 3—12-го пассажей, что соответствует опубликованным данным других авторов, работающих с первичными культурами мезенхимальных клеток [34].

Полученная нами клеточная популяция может быть предложена в качестве модельного объекта для тестирования эффекта потенциальных терапевтически активных лечебных субстанций. В нашем исследовании в таком качестве выбраны два типа ингибиторов — антифибротический препарат пирфенидон и цитостатик ЦсА.

При оценке метаболического статуса культуры клеток с помощью формазанового МТТ-теста выявили, что уже через 24 ч инкубации с тестируемыми препаратами наблюдается дозозависимый ответ на воздействие (рис. 3). Минимальные дозировки (5 мкг/мл ЦсА и 100 мкг/мл пирфенидона) на сроке 24 ч не приводят к угнетению метаболизма клеток, а ЦсА даже наоборот — оказывает стимулирующее воздействие, повышая показатели теста выше контрольных значений. В то же время средние и максимальные дозировки приводят к статистически значимому снижению показателей МТТ-теста. После воздействия в течение 48 ч все концентрации пирфенидона значимо снижают метаболическую активность клеток, тогда как ответ на воздействие ЦсА наблюдается только для средней и максимальной концентраций.

Рис. 3. МТТ-анализ культуры миофибробластов после воздействия пирфенидона в концентрациях 100, 500 и 1000 мкг/мл и ЦсА в концентрациях 5, 25 и 50 мкг/мл в течение 24 ч (а) и 48 ч (б).

На следующем этапе исследования было выяснено, за счет каких механизмов происходит наблюдаемое снижение показателей МТТ-теста.

При предварительной визуальной оценке массивной гибели клеток не наблюдалось, подсчет общего количества клеток после воздействия также не выявил снижения этого показателя. Это позволяет выдвинуть предположение о том, что наблюдаемое снижение метаболической активности миофибробластов, экспонированных с препаратами, относительно интактных клеток достигается преимущественно за счет мягкого воздействия — вследствие снижения скорости их пролиферации, включения механизмов программированной гибели и угнетения их метаболизма.

При визуальном подсчете было выявлено, что процент митотически активных клеток после воздействия препаратов уменьшается, составляя 0,8; 0,6 и 0,15% (p<0,05 во всех случаях) для возрастающих концентраций ЦсА и 2,96; 1,47 и 0,57% (p<0,05 в двух последних случаях) для пирфенидона соответственно, в то время как в интактной культуре он составляет 3,88% (p<0,05).

Таким образом, выявлено, что оба тестируемых препарата эффективно влияют на миофибробласты роговицы — дозозависимо снижают их пролиферативную активность. Эффект пирфенидона проявляется, начиная с концентрации 500, ЦсА — с 5 мкг/мл.

Показатели общей клеточной гибели (некроз + апоптоз), измеренные методом проточной цитометрии, увеличиваются примерно в два раза для максимальных концентраций препаратов, составляя 12 и 19% для пирфенидона и ЦсА соответственно против 6,7% в интактной культуре. Прирост значений идет в основном за счет некротических клеток (рис. 4).

Рис. 4. Экспрессия аннексина-V-FITC и PI, показывающая долю клеток, подвергшихся некрозу и апоптозу, в интактных клетках и в клетках, обработанных в течение 24 ч пирфенидоном (1000 мкг/мл) и ЦсА (50 мкг/мл) соответственно.

Для минимальных и средних концентраций пирфенидона показатель общей клеточной гибели находится на уровне показателей в интактной культуре (5,34 и 4,27%), что говорит об отсутствии цитотоксического действия препарата в этих концентрациях.

ЦсА в минимальной и средней концентрациях дает некоторый прирост клеточной гибели (8,56 и 9,13%), причем прирост значений идет за счет клеток в стадии позднего апоптоза.

При тестировании влияния препаратов на миграционную способность клеток нами выявлены следующие факты (рис. 5). ЦсА эффективно тормозит миграцию клеток в зону дефекта. Эффект начинает проявляться уже в минимальной концентрации и дозозависимо нарастает, показывая статистически значимые различия с контролем для средней и максимальной концентраций через 24 ч и для всех концентраций через 48 ч. Пирфенидон же в тестируемых концентрациях не влияет на миграционные способности клеток.

Рис. 5. Площадь незакрытого дефекта в интактной культуре и в культурах, обработанных пирфенидоном (100; 500 и 1000 мкг/мл) и ЦсА (5; 25 и 50 мкг/мл), в течение 24 и 48 ч.

Значения представлены в процентном отношении от изначальной площади дефекта. Звездочкой отмечены статистически значимые отличия от показателей контрольной группы.

Уровень экспрессии белка α-SMA может быть маркером активности миофибробластов. Поэтому мы оценили, меняется ли он после экспозиции с тестируемыми препаратами через 24 ч экспозиции.

Выявлено, что медианное значение уровня экспрессии интактных клеток, не обработанных препаратом, составило 17 060, тогда как после воздействия пирфенидоном (1000 мкг/мл) медианное значение экспрессии α-SMA составило 8750, а после воздействия ЦсА (50 мкг/мл) — 10 855.

Таким образом, наблюдалось снижение уровня экспрессии α-SMA под воздействием обоих препаратов.

Обсуждение

Узелковая дегенерация роговицы Зальцманна характеризуется образованием проминирующих помутнений в субэпителиальном слое роговицы и часто ассоциируется с хроническим воспалением глазной поверхности. В нормальных условиях миофибробласты отсутствуют в роговичной ткани, они дифференцируются из резидентных кератоцитов под действием TGF-β1, высвобождаемого эпителиальными клетками при повреждении [35], а также из эпителиоцитов в результате эпителиально-мезенхимального перехода [36]. Миофибробласты обычно отвечают за синтез компонентов ЭЦМ при повреждении, но в случае запуска патологического процесса они становятся гиперактивными и участвуют в развитии УДЗ. Их гиперфункция может приводить к избыточному локальному накоплению неоформленных компонентов матрикса с нарушением высокоупорядоченной структуры роговицы и, как следствие, к ее прогрессирующему фиброзированию [8].

Полученные гистологические данные подтверждают диагноз УДЗ у пациентов. На препаратах видна типичная для этого процесса картина — дисплазия эпителия над проминирующей зоной, активные фибробластоподобные клетки в строме. Матрикс при этом теряет свою упорядоченную структуру и сформирован дезорганизованными волокнами. В норме пролиферативная стадия заживления должна сменяться стадией ремоделирования и возвратом к исходной структуре ткани, в случае УДЗ мы, вероятно, видим «застревание» на промежуточном этапе. Мы показали, что из таких забранных интраоперационно фрагментов ткани узелков возможно выделить виментин- и α-SMA-положительные клетки миофибробластов, играющие ключевую роль в процессе фибротизации. Таким образом, полученная нами клеточная популяция может быть использована в качестве модели фиброзирующих заболеваний роговицы для оценки воздействия потенциальных терапевтически активных субстанций.

В нашей работе мы показали, что пирфенидон оказывает дозозависимое воздействие на жизнеспособность культуры миофибробластов роговицы. После воздействия препаратом в концентрациях 500 и 1000 мкг/мл в течение 24 и 48 ч наблюдалось статистически значимое снижение жизнеспособности клеток. С точки зрения терапевтического применения, интерес представляет концентрация пирфенидона, при которой снижается пролиферативная активность, но при этом не происходит массовой гибели клеток. Мы обнаружили, что значимое снижение пролиферативной активности наблюдалось при использовании концентраций 500 и 1000 мкг/мл в течение 24 ч. При этом концентрации 100 и 500 мкг/мл не приводят к цитотоксическому эффекту, поскольку тест на клеточную гибель не показал статистически значимых изменений в доле погибших клеток между контрольными и обработанными клетками. Таким образом, значимое снижение пролиферативной активности без выраженной цитотоксичности наблюдалось после воздействия пирфенидоном в концентрации 500 мкг/мл в течение 24 ч. Полученные результаты соотносятся с данными других исследователей, изучавших действие пирфенидона на фибробласты [16, 17]

Также было отмечено, что уровень экспрессии маркера активации фибробластов α-SMA снижался под воздействием пирфенидона; это свидетельствует в пользу того, что он может эффективно влиять на разрыв «порочного круга» избыточной активации миофибробластов. Аналогичные результаты, свидетельствующие о подавлении α-SMA и других профибротических молекул, были опубликованы в исследовании, в котором изучалось влияние пирфенидона на клетки пигментного эпителия сетчатки [19].

Результаты исследования применения ЦсА в выделенной культуре клеток миофибробластов показали, что в минимальной концентрации ЦсА (5 мкг/мл) не наблюдалось снижения их жизнеспособности после 24 ч культивирования. Напротив, было отмечено статистически значимое стимулирующее воздействие, что согласуется с некоторыми данными литературы, указывающими на увеличение пролиферации фибробластов при воздействии ЦсА в низких концентрациях [27, 28]. Однако мы обнаружили, что значимое снижение жизнеспособности культуры клеток миофибробластов роговицы человека наблюдается уже через 24 ч воздействия ЦсА в концентрациях 25 и 50 мкг/мл. Антипролиферативное действие ЦсА в этих концентрациях на миофибробласты приводит к практически полному подавлению митотической активности культуры клеток, что соответствует опубликованным данным мировой литературы [24—28]. Наблюдаются также признаки цитотоксичности для этих концентраций, выраженные в повышении уровня клеточной гибели. На фунциональный маркер — уровень экспрессии α-SMA — ЦсА влияет угнетающе, что характеризует его как потенциально эффективный препарат для лечения УДЗ.

Отмечено также, что ЦсА дозозависимо влияет на миграцию клеток, в то время как пирфенидон не оказывает влияния на этот процесс в диапазоне концентраций 100—1000 мкг/мл. Это может свидетельствовать о различиях в механизмах действия данных препаратов на клетки миофибробластов.

Заключение

Гистологически установлено, что в ткани узелков наблюдается дисрегуляция ремоделирования стромы. Фенотипические характеристики выделенной от пациентов с УДЗ клеточной культуры свидетельствуют о наличии в ней активированных миофибробластов, вовлеченных в формирование порочного круга избыточного фиброзирования роговицы. Культура, полученная из патологического очага, может быть использована как модель для тестирования терапевтически активных субстанций при патологии, сопровождающейся избыточным рубцеванием роговицы.

Исследование эффекта пирфенидона и ЦсА на фибробласты роговицы in vitro продемонстрировало выраженное антипролиферативное действие обоих протестированных препаратов. При этом действие пирфенидона отличалось незначительным влиянием на миграционную активность клеток и низкой цитотоксичностью в эффективной концентрации 500 мкг/мл. Для подтверждения эффективности и безопасности использования препаратов в клинических условиях и разработки алгоритмов их применения необходимы дальнейшие исследования in vitro и in vivo.

Участие авторов:

Концепция и дизайн исследования: Крахмалева Д.А., Суббот А.М.

Сбор и обработка материала: Суббот А.М., Крахмалева Д.А., Кривулина Д.А., Токарева В.В., Емец Е.В.

Статистическая обработка: Суббот А.М., Токарева В.В.

Написание текста: Суббот А.М., Крахмалева Д.А.

Редактирование: Маложен С.А., Осипян Г.А.

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.