Целенаправленная доставка химиотерапевтических средств с аптамерами является очень эффективным методом, поскольку увеличивает терапевтический индекс по сравнению с нецелевыми препаратами.
ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ
Изучить эффективность терапевтического воздействия in vitro ковалентного конъюгата ДНК-аптамера GR20 с химиопрепаратом доксорубицином на опухолевые клетки глиобластомы в сравнении с его воздействием на референсную культуру фибробласты человека.
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ
Из образца опухолевой ткани глиобластомы получали клеточную культуру Sus/fP2 для анализа эффективности конъюгата. В качестве контроля использовали линейную культуру дермальных фибробластов (мезенхимальные стволовые клетки) человека DF1. Для оценки антипролиферативной активности ковалентного конъюгата аптамера GR20 с антрациклиновым антибиотиком доксорубицином использовали MTS-тест. Измерение величины Клеточного индекса проводили на клеточном анализаторе xCelligence S16, который оценивает жизнеспособность клеточных культур, регистрируя изменения в режиме реального времени.
РЕЗУЛЬТАТЫ
Показано, что клетки глиобластомы человека Sus/fP2 снижают пролиферативный потенциал при воздействии доксорубицина (0,5 мкМ, 72 ч, MTS-тест) на 80%, при воздействии аптамера GR20 (10 мкМ, 72 ч, MTS-тест) на 9%, ковалентный конъюгат DOX-GR20 (0,5 мкМ, 72 ч, MTS-тест) — на 26%. Пролонгированное исследование воздействия на пролиферативный потенциал клеток Sus/fP2 на анализаторе xCelligence S16 показало значительное снижение количества клеток под действием доксорубицина и ковалентного конъюгата DOX-GR20, при этом эффективность второго снижается вдвое. Показано, что аптамер GR20 в концентрации 10 мкМ и его конъюгат с доксорубицином DOX-GR20 в концентрации 1 мкМ не оказывают негативного влияния на клетки контрольной культуры фибробластов DF1, тогда как доксирубицин токсичен для этих клеток. И в MTS-тесте, и на клеточном анализаторе xCelligence S16 не было зарегистрировано снижения метаболической активности клеток DF1 и их способности к пролиферации.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Установлено наличие выраженного антипролиферативного эффекта от воздействия ковалентного конъюгата DOX-GR20 на перевиваемую клеточную культуру глиобластомы человека Sus/fP2 при полном отсутствии его токсического воздействия на референсную культуру — дермальные фибробласты DF1.
