Согласно многочисленным клиническим наблюдениям, в настоящее время имеет место повсеместное увеличение числа инфертильных состояний у мужчин [4, 15, 18, 21, 22]. Не вызывает сомнений, что рост значимости мужского фактора в патогенезе супружеского бесплодия может быть обусловлен как органической патологией репродуктивной системы, так и неблагоприятными воздействиями эндогенного и экзогенного характера [8, 12]. Вместе с тем роль стрессорной составляющей в механизмах нарушения мужской фертильности изучена крайне недостаточно [2, 5, 23]. Общепризнано, что в системе регуляции функции яичек, в том числе генеративной, особое место занимают клетки Лейдига, секретирующие тестостерон, необходимый для регуляции сперматогенеза [17].

Цель настоящего исследования - анализ морфофункционального состояния клеток Лейдига семенников у половозрелого потомства самок крыс с экспериментальным хроническим поражением печени различного генеза.

Исследования проведены на белых лабораторных крысах самках Вистар и их половозрелом (70-дневном) потомстве. Для достижения поставленной цели у самок крыс моделировалось хроническое поражение печени различного генеза.

Хроническая алкогольная интоксикация с пре­имущественным поражением печени создавалась путем поения животных в течение 3 мес 15% раствором этилового спирта (условия свободного доступа) [3].

Мезенхимальное поражение печени у самок крыс воспроизводили путем введения им 20 ЕД активности щелочной фосфатазы [11].

Хроническое поражение печени у животных верифицировали на основании морфологических (некробиотические изменения гепатоцитов, носящие очаговый характер, дискомплексация гепатоцитов, гиперплазия печеночных макрофагов, расширение синусоидных капилляров, массивная лимфогистиоцитарная периваскулярная инфильтрация портальных трактов, распространяющаяся на периферию долек), иммунологических (высокий титр противопеченочных аутоантител 1:160, 1:320), биохимических (гипергаммаглобулинемия, увеличение активности аланин-, аспартатаминотрансферазы, содержания билирубина) критериев.

Через 7 дней после моделирования хронического поражения печени к самкам подсаживали интактных самцов. Объектом исследования служили семенники половозрелого (70-дневного) потомства от самок крыс с хроническим алкогольным (алкогольная группа 12 крысят из 12 пометов) и мезенхимальным (мезенхимальная группа 10 крысят из 10 пометов) поражением печени. Группу сравнения составили 14 крысят из 14 пометов (контрольная группа). Зрелые сперматозоиды получали из придатка семенника, разрезая его вдоль в среде дозированного количества 5% раствора глюкозы (в объеме 1 мл) при 37 °С. Затем отрезком отмытой резиновой трубки эпидидимис активно перемещали в течение 2 мин для освобождения от части сперматозоидов [10]. С помощью камеры Горяева подсчитывали количество сперматозоидов в единице объема (1 мл).

Функциональное состояние клеток Лейдига оценивали на серийных гистологических срезах, окрашенных гематоксилином и эозином, с определением с помощью морфометрической установки Motic BA 400 (фирма «Motic», Германия) площади интерстициальной ткани, суммарного количества клеток Лейдига, в том числе фракции активных и неактивных эндокриноцитов, их диаметра. Кроме того, определяли индекс активности клеток Лейдига, представляющий собой отношение числа активных эндокриноцитов к числу неактивных. Вместе с тем определяли коэффициент, отражающий отношение суммарного количества клеток Лейдига на 1 семенной извитой каналец к таковому клеток Сертоли.

С целью изучения особенностей антистрессорной резистентности клеток Лейдига семенников у потомства экспериментальных животных нами моделировался иммобилизационный стресс. Стресс вызывали иммобилизацией животных на спине в камере Когана. Первоначально иммобилизация продолжалась с 10:00 до 15:00. Затем после 2 ч отдыха животных вновь помещали в камеру на ночь. На следующее утро иммобилизацию прекращали до вечера. В 17:00 того же дня животных вновь подвергали иммобилизации до утра [9].

Работа с экспериментальными животными проводилась в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных» (приказ №755 от 12.08.77 МЗ СССР).

Полученные результаты обрабатывали на компьютере с использованием программы Statistica v.6.0 («Statsoft Inc.»). Учитывая небольшую выборку животных, достоверность полученных результатов определяли при помощи непараметрического метода - критерия Манна-Уитни.

Первоначально нами было установлено, что содержание сперматозоидов в 1 мл эпидидимальной взвеси у подопытных животных алкогольной (51,2±1,18·10⁶) и мезенхимальной (17,15±1,49·10⁶) групп отличалось от такового у интактных крысят (44,2±3,88·10⁶). Под влиянием стресса содержание сперматозоидов у всех экспериментальных животных как интактной, так и подопытных групп снижается. Так, если исследуемый показатель у интактных крысят, подвергшихся воздействию стресса, составил 13,25±0,02·10⁶, то у крысят алкогольной и мезенхимальной групп он был намного ниже (3,20±0,154·10⁶ и 0,29±0,03·10⁶ соответственно).

Известно, что сперматогенез является одним из наиболее динамичных процессов в организме млекопитающих и человека, связанных с клеточной пролиферацией и дифференцировкой, протекающих под влиянием разнообразных гормонов, цитокинов и факторов роста [6, 24]. Среди регуляторных факторов особое место занимает тестостерон, вырабатываемый клетками Лейдига.

Нами установлено, что изменение суммарного количества сперматозоидов у подопытных животных сопровождается снижением суммарного количества интерстициальных клеток. При этом, как видно из таблицы, у подопытных животных имеет место снижение числа неактивных и увеличение числа активных клеток Лейдига по сравнению с контролем.

Рядом исследователей [4, 5, 7, 16, 20] установлено, что сперматозоиды проявляют высокую чувствительность к действию разнообразных экзогенных повреждающих факторов, в том числе стрессорных. Эти данные находятся в полном соответствии с результатами наших исследований. Так, нами установлено, что иммобилизационный стресс обусловливает у всех экспериментальных животных существенное снижение концентрации сперматозоидов. Если у интактных животных, подвергшихся иммобилизационному стрессу, концентрация сперматозоидов составила 13,25±0,02·10⁶, то у подопытных крысят алкогольной и мезенхимальной групп она оказалась существенно ниже (3,20±0,15·10⁶ и 0,29±0,03·10⁶ соответственно). Обращает на себя внимание, что у подопытных крысят концентрация сперматозоидов под влиянием стрессорных факторов снижается до более низких величин, чем в группе сравнения. При этом у всех экспериментальных животных содержание интерстициальных клеток снижается. Как видно из таблицы, у под­опытных животных обеих групп суммарное количество клеток Лейдига также снижается до уровня более низкого, чем в контроле.

Анализ содержания субпопуляционного состава клеток Лейдига у экспериментальных животных выявил следующую закономерность. Как видно из таблицы, стрессорный фактор обусловил у интактных животных увеличение относительного количества активных клеток Лейдига. В то же время у под­опытных крысят обеих групп иммобилизационный стресс вызывает, напротив, снижение количества активных эндокриноцитов и увеличение числа фракции неактивных клеток. Эти изменения об­условливают и снижение индекса активности клеток Лейдига у животных мезенхимальной и особенно алкогольной групп до уровня более низкого, чем в группе сравнения.

В настоящее время не вызывает сомнений, что количественные и качественные изменения половых и эндокринных клеток семенников могут в определенной мере служить своеобразным индикатором адаптационных и дезадаптационных процессов, протекающих под влиянием стрессорных факторов [7, 14].

Таким образом, полученные результаты убедительно свидетельствуют, что клетки Лейдига семенников у потомства самок крыс обладают сниженной антистрессорной резистентностью. Известно, что кортикостероиды, выработка которых резко увеличивается при стрессе, угнетают активность клеток Лейдига, секретирующих тестостерон [17]. В клетках Сертоли тестостерон превращается в более активную форму - дигидротестостерон, который участвует в регуляции сперматогенеза и спермиогенеза. Логично предположить, что под влиянием стрессорного фактора у потомства самок крыс с хронической патологией печени активность клеток Лейдига еще больше угнетается под влиянием кортикостероидов [19], что обусловливает изменения оптимальной концентрации тестостерона, необходимого для регуляции сперматогенеза. В свою очередь нарушения гормонального гомеостаза внутри семенных извитых канальцев приводят к снижению концентрации сперматозоидов и их функционального состояния [1, 13], в том числе их двигательной активности.