Красный плоский лишай (КПЛ) — это хроническое иммуноопосредованное воспалительное заболевание, приводящее к поражениям кожи и слизистых оболочек, характеризующееся полиморфизмом клинических симптомов, возможностью малигнизации очагов поражения и устойчивостью к проводимой терапии [1—4]. Проявления КПЛ в полости рта имеют высокую распространенность среди заболеваний слизистой оболочки рта (СОР), поэтому диагностике данной патологии необходимо уделить особое внимание [5, 6].

Флюоресцентная диагностика нашла широкое применение в различных областях медицины, в том числе при исследовании заболеваний СОР. Данный метод исследования активно используется в последнее десятилетие как для диагностических целей, так и при разработке новых методов лечения, таких как фотодинамическая терапия (ФДТ) [7—10]. Он основан на способности биологических тканей флюоресцировать при поглощении фотосенсибилизатора (ФС). Флюоресценцию биологических тканей можно наблюдать визуально в виде флюоресцентных изображений либо оценивать количественно при проведении спектрально-флюоресцентных измерений. Для неинвазивных измерений спектров флюоресценции разработаны волоконно-оптические флюоресцентные диагностические установки и методики локальной флюоресцентной спектроскопии (ЛФС), которые позволяют получать количественную информацию о локальной (точечной) флюоресценции биологической ткани. ЛФС применяется при разработке методов аутофлюоресцентной диагностики рака, и также для оценки кинетики накопления ФС в тканях пациентов при разработке новых методик ФДТ в онкологии, гинекологии, урологии и других областях [11—14].

В данной работе для оценки накопления и распределения ФС в очагах поражения СОР у пациентов с КПЛ при его аппликационном нанесении применяли как методику ЛФС, так и визуальную оценку флюоресцентных изображений СОР.

Цель исследования — изучение накопления и распределения ФС при аппликационном нанесении на патологические очаги поражения у пациентов с тяжелыми формами КПЛ.

Материал и методы

В отделении заболеваний СОР в ФГБУ НМИЦ «ЦНИИСиЧЛХ» Минздрава России было проведено клинико-лабораторное обследование и лечение 50 пациентов (6 мужчин и 44 женщины в возрасте от 18 до 70 лет) с тяжелыми формами (буллезной и эрозивно-язвенной) КПЛ. Диагноз был поставлен на основании клинического, гистологического и иммуногистохимического методов исследования. Локализация очагов поражения наблюдалась в области щек, на вентральной и боковой поверхностях языка, на дне полости рта.

Для определения степени накопления ФС в очагах поражения применяли флюоресцентную диагностику. Для флюоресцентной визуализации использовали аппарат светодиодный АФС-400 (регистрационное удостоверение N ФСР 2011/106669, 000, «Полироник» Москва) с принадлежностями, к которым относятся светодиоды. При освещении полости рта аппаратом АФС-400 индуцируется флюоресценция СОР в зеленой области спектра, а в красной области спектра индуцируется флюоресценция ФС (рис. 1). Осмотр СОР в свете флюоресцентного излучения проводили при выключенном освещении. Излучение аппарата АФС-400 направляли в полость рта и через специальные очки с желтым светофильтром проводили осмотр всех отделов СОР. Предварительно перед нанесением ФС проводилась медикаментозная обработка участков СОР с помощью ферментов и антисептиков с целью устранения бактериального налета, поскольку он имеет красную флюоресценцию за счет присутствия эндогенных порфиринов. ФС наносили на очаг поражения, изолировав поле от слюны, и по истечении времени экспозиции смывали водой.

Рис. 1. Спектры лазер-индуцированной аутофлуоресценции здоровых слизистых оболочек щек и языка; патологические очаги при КПЛ (после 10-ти минутной аппликации ФС).

Для проведения ЛФС использовали компьютеризированную спектрально-флюоресцентную диагностическую установку Спектр-Кластер (регистрационный номер 29/05020401/3958-02) (ООО «Кластер», ИОФ РАН, Москва), разработанную совместно с Московским научно-исследовательским онкологическим институтом им. П.А. Герцена и институтом общей физики им. А.М. Прохорова Российской академии наук и применяемую при исследованиях эндогенного и экзогенного излучения биологических тканей. Для возбуждения флюоресценции использовали диодный лазер с длиной волны генерации 407 нм (3 мВт с конца катетера). Флюоресцентное излучение регистрировали в спектральном диапазоне 430—750 нм. Измерения спектров проводили в участках видимой патологии (центр и периферия) каждого очага и симметричных участках визуально неизмененной СОР. Измерения проводили до нанесения ФС и через 10, 20 и 30 мин после нанесения.

Для анализа кинетики накопления и распределения ФС в очагах поражения использовали средние значения параметра D_f. Величину данного параметра определяли по формуле:

,

где: (I_(650–700)) — интегральная интенсивность регистрируемого спектра в максимуме экзогенной флюоресценции; (I_(480–520)) — интегральная интенсивность регистрируемого спектра в максимуме эндогенной флюоресценции.

На используемой установке величина параметра D_f автоматически рассчитывается в реальном режиме времени и вносится в электронный протокол измерений спектров.

Результаты и обсуждение

По данным флюоресцентного исследования, у пациентов с КПЛ наблюдалась следующая картина: спектр видимо неизмененных участков СОР имел широкую полосу излучения максимумом в области 480—500 нм, типичную для спектров эндогенной флюоресценции при лазерном возбуждении от 360 до 450 нм. Данное излучение формируется из спектров флюоресценции отдельных эндогенных флюорофоров, которыми являются элементы дыхательной цепи (флавины), соединительной ткани, а также продуктов метаболизма (микроорганизмов) и естественного старения СОР [15, 16]. У пациентов, имеющих эрозивно-язвенные и буллезные элементы поражения при КПЛ вид спектра менялся: наблюдалось резкое падение интенсивности эндогенного излучения, что отражалось на величине спектрально-флюоресцентных параметров (средняя величина в нормальной слизистой оболочке составляла 0,3±0,1 отн. ед.; в патологических очагах — 1,2±0,6 отн. ед.).

При освещении аппаратом АФС 400 излучение с длиной волны 400 нм эффективно поглощается как эндогенными флюорофорами СОР, так и экзогенным ФС хлоринового ряда. В результате индуцируется и эндогенная аутофлюоресценция СОР с максимумом в зеленой области спектра, и экзогенная флюоресценция ФС в красной области спектра (650—700 нм) (рис. 2).

Рис. 2. ФС нанесен на патологический очаг на боковой поверхности языка.

Нормальная СОР флюоресцирует в зеленой области спектра. При исследовании боковых поверхностей языка методом флюоресценции отмечается темно-зеленый оттенок за счет повышенного содержания гемоглобина. Это является отражением нормальной СОР. У пациентов с буллезной и эрозивно-язвенной формами КПЛ очаги визуализируются в виде темных пятен.

При аппликации ФС в очагах поражения на фоне широкой полосы эндогенного излучения появляются узкие полосы экзогенной флюоресценции, интенсивность флюоресценции ФС значительно варьирует в зависимости от топографической зоны на СОР, где располагался патологический очаг (щека, язык, дно полости рта). У большинства пациентов при эрозивно-язвенной и буллезной формах КПЛ накопление ФС в очагах возрастало по мере увеличения времени экспозиции от 20 до 30 мин.

Следует отметить, что при аппликационном нанесении ФС на патологический очаг, располагающийся на боковой поверхности языка и дне полости рта, уже начиная с 10 мин выявлялась интенсивная флюоресценция, пик которой достигался на 20-й минуте. При исследовании очагов поражения, локализующихся на слизистой оболочке щек, интенсивность наблюдалась на 20-й минуте экспозиции ФС и достигала максимума на 30-й минуте экспозиции.

Заключение

У большинства пациентов с тяжелыми формами КПЛ степень накопления ФС в патологических очагах возрастала по мере увеличения времени экспозиции до 20 или 30 мин. Неоднородное распределение ФС на слизистой оболочке было связано с нахождением очагов поражения в различных топографических зонах слизистой оболочки рта, имеющих различные особенности строения и капиллярного кровотока. Так, быстрее всего ФС накапливался в участках поражения, расположенных на слизистой оболочке языка и в области дна полости рта, а также имели значение размеры очагов поражения. У пациентов, имеющих эрозивно-язвенные и буллезные элементы поражения при КПЛ, отмечалось резкое падение интенсивности эндогенного излучения, что имело значение при выборе экспозиции ФС на патологический очаг. У пациентов с буллезной и эрозивно-язвенной формами КПЛ очаги визуализировались в виде темных пятен.

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.