Введение
В настоящее время считается, что мутации в гене MYBPC3 приводят к развитию гипертрофической кардиомиопатии (ГКМП) в большинстве генетически обусловленных случаев [1]. Довольно подробно структура гена, функционирование белка и возможные механизмы развития патологии, обусловленной мутациями, описаны в обзоре B.S. Tudurachi и соавт. [2]. Кроме того, B.S. Tudurachi и соавт. приводят обширный обзор литературы, описывающий возможные ассоциации генотипа и фенотипа, демонстрируя, что четкая корреляция с тяжестью заболевания наблюдается лишь для отдельных мутаций [2].
Тем не менее, несмотря на многолетние исследования, как в мире, так и в России генетический ландшафт ГКМП все еще недостаточно изучен. Лишь небольшой ряд работ демонстрирует распространенность тех или иных мутаций в российской популяции [1, 3—6]. Более того, недостаточная изученность генетически обусловленных случаев ГКМП в российской популяции не позволяет изучить возможную связь фенотипических особенностей пациентов с ГКМП с теми или иными патогенными вариантами генома этих пациентов. Особенно остро данная проблема стоит при изучении очень редких патогенных вариантов генома, таких как rs730880711 и rs397515974, приводящих к формированию преждевременных стоп-кодонов в положениях p.Val453Ter и p.Tyr847Ter MYBPC3.
В связи с этим целью нашей работы стало изучение распространенности редких патогенных вариантов rs730880711 и rs397515974 в гене MYBPC3 у пациентов с ГКМП из России и оценка влияния данных мутаций на тяжесть течения данного заболевания.
Материал и методы
Пациенты были рекрутированы в кардиологическом отделении городской клинической больницы №52 Департамента здравоохранения города Москвы (180 пациентов, группа пациентов со средней степенью тяжести ГКМП) и в кардиохирургическом отделении хирургического лечения дисфункций миокарда и сердечной недостаточности ФГБНУ «РНЦХ им. академика Б.В. Петровского» (137 пациентов, группа пациентов с тяжелой формой ГКМП). Критерии отбора пациентов с ГКМП описаны ранее [6]. Выборка состояла исключительно из пробандов: родственников пациентов в выборку не включали. Средний возраст пациентов в группе со средней тяжестью заболевания составил 59,4±15,0, в группе с тяжелой формой — 55,45±13,07, соотношение полов (М/Ж) в группах было 86/94 и 73/64 соответственно. Клинические характеристики пациентов из исследованной выборки представлены в таблице. Письменное информированное согласие на участие в исследовании получено от всех пациентов и членов их семей в соответствии с Хельсинкской декларацией. Исследование одобрено этическим комитетом РНИМУ (протокол №139 от 10 ноября 2014 г.). Фенокопии ГКМП у всех пациентов были исключены [6].
Таблица. Клинические характеристики пациентов, вовлеченных в исследование
| Группа | ГКМП средней тяжести | Тяжелая форма ГКМП |
| Клиническая характеристика | N (мужчины) | N (мужчины) |
| Семейная история ГКМП | 16 (5) | 19 (9) |
| Семейная история внезапной смерти | 38 (16) | 8 (2) |
| Клиническая смерть | 0 | 0 |
| Использование имплантируемого кардиовертера-дефибриллятора (ИКД) | 4 (1) | 1 (1) |
| Миоэктомия | 1 (1) | 137 (76) |
| История внезапной остановки сердца: инфаркт миокарда | 29 (9) | 4 (2) |
| Боль в груди: стенокардия, кардиалгия | 90 (34) | 53 (32) |
| Синкопа / история синкоп | 26 (10) | 22 (7) |
| Головокружение | 47 (19) | 25 (11) |
| Одышка | 128 (58) | 129 (64) |
| Шумы в сердце | 32 (12) | 130 (69) |
| Трепетания | 81 (32) | 60 (29) |
| Аномалии ЭКГ | 105 (45) | 123 (65) |
| Гипертония | 60 (25) | 93 (46) |
| Функциональный класс сердечной недостаточности по по NYHA | ||
| I | 50 (26) | 2 (2) |
| II | 122 (59) | 74 (40) |
| III | 6 (2) | 59 (26) |
| IV | 2 (0) | 2 (1) |
Примечание. N — количество пациентов.
Геномную ДНК из лейкоцитов периферической крови выделяли методом, описанным ранее [6]. ПЦР проводили так, как описано ранее [1].
Праймеры и зонды были подобраны на основе последовательности генома человека в базе данных NCBI (участок, содержащий пары нуклеотидов 47342820-47343040 для варианта rs727503203 (NC_000011.10:g.47342928_47342929insG) и 47337328-47337564 для варианта rs397515974 (NC_000011.9:g.47359003G>C или NM_000256.3(MYBPC3):c.2541C>G (p.Tyr847Ter)) в последовательности NC_000011.10, хромосома 11 Homo sapiens, первичная сборка GRCh38.p13). Последовательности праймеров и зондов доступны по запросу. Анализ генотипов и статистическую обработку результатов генотипирования проводили так, как описано ранее [1].
Результаты
В данной работе мы провели анализ распространенности редких патогенных вариантов rs730880711 и rs397515974 в гене MYBPC3 у пациентов с ГКМП из России. Нам удалось выявить только двух индивидуумов — носителей изученных мутаций, оба из группы пациентов с ГКМП средней тяжести: по одному носителю каждого патогенного варианта. В группе пациентов с тяжелой формой ГКМП изученных мутаций обнаружено не было.
Обсуждение
Согласно базе данных GnomAD_exome, встречаемость данных патогенных вариантов в мире крайне низка и составляет 0,000008 для обоих вариантов. В связи с этим описание указанных мутаций на данный момент приводится лишь в нескольких статьях. Ранее нам также удалось показать наличие данных мутаций в небольшой выборке пациентов с ГКМП из России [6].
Вариант rs727503203, приводящий к сдвигу рамки считывания в 453-м кодоне и в итоге к преждевременной остановке транскрипции, впервые был обнаружен у пациентов с ГКМП из двух семей из Индии [7]. У большинства пациентов при этом наблюдалась средняя тяжесть заболевания, что согласуется с нашими данными.
Вариант rs397515974 приводит к замене NM_000256.3 (MYBPC3):c.2541C>G и формированию стоп-кодона вместо тирозина в 847-м положении в белке MYBPC3. Впервые данный вариант был описан S.L Van Driest и соавт. при изучении частоты и соответствующего фенотипа мутаций в гене MYBPC3 у пациентов с ГКМП [8]. Данный вариант также был выявлен у одного из 60 индивидуумов из выборки пациентов с ГКМП и аритмогенной кардиомиопатией [9]. J.D. Kapplinger и соавт. также выявили всего 5 пациентов с данной мутацией в смешанной выборке, состоящей из 2178 пациентов с ГКМП [10]. Кроме того, данный вариант был обнаружен и в Китае у одного из 37 пациентов с данным заболеванием [11], у 1 из 696 в Норвегии [12] и у 4 из 29 в Польше [13]. Большинство авторов отмечают более молодой возраст больных носителей данного патогенного варианта. Наши данные согласуются с данными других авторов, поскольку возраст пациента — носителя p.Tyr847Ter из нашей выборки на момент постановки диагноза был 43 года, что на 16 лет меньше среднего возраста в группе пациентов с ГКМП средней тяжести. То же наблюдается и для варианта p.Val453Ter: возраст пробанда на момент постановки диагноза составил 39 лет.
Кроме того, оба эти варианта, rs730880711 и rs397515974, были выявлены у 5 пациентов из Бразилии [14]. Авторы данной работы отмечают, что не смогли выявить фенотипические отличия, характерные именно для этих мутаций. Интересно, однако, что для части этих пациентов было выдвинуто предположение об «эффекте основателя».
Заключение
В данной работе проведен анализ распространенности редких патогенных вариантов rs730880711 и rs397515974 в гене MYBPC3 у пациентов со средней степенью тяжести и с тяжелой формой ГКМП из России. Частота каждой мутации составила 0,003. Оба патогенных варианта были выявлены у индивидуумов с заболеванием средней степени тяжести. В связи с этим можно предположить, что, несмотря на более раннюю манифестацию заболевания у носителей данных мутаций, эти патогенные варианты не приводят к развитию тяжелой формы ГКМП.
Таким образом, указанные мутации крайне редко встречаются у пациентов с ГКМП из России и не вносят значительного вклада в развитие данного заболевания в российской популяции. Однако их можно включить в панель патогенных вариантов для генетической диагностики ГКМП, поскольку они приводят к более ранней манифестации заболевания.
Финансирование. Работа поддержана Российским научным фондом (грант №22-15-00243).
Соблюдение этических стандартов. Письменное информированное согласие на участие в исследовании получено от всех пациентов и членов их семей в соответствии с Хельсинкской декларацией. Исследование одобрено этическим комитетом РНИМУ им. Н.И. Пирогова (протокол №139 от 10 ноября 2014 г.).
Письменное информированное согласие на публикацию результатов исследования получено от всех участвовавших пациентов и членов их семей.
Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.