Введение

В опубликованных последние годы исследованиях все более утверждается мнение, что одним из действенных способов изучения механизма развития осложнения беременности является оценка цитохимического статуса лейкоцитов крови [1—4]. Как считают авторы, оно может помочь, прежде всего, в установлении отдельных фрагментов адаптационных реакций в защитных системах организма на клеточном уровне. И поскольку в плаценте осуществляется контакт материнского организма с плодом, несомненно, здесь возникают процессы, от которых зависит нормальное течение беременности или возможность развития осложнений. При этом исследователями подчеркивается, что именно в маточно-плацентарном комплексе функционируют клетки, осуществляющие защиту как плода, так и материнского организма от возможного поступления антигенов. К этим клеткам относят прежде всего макрофаги и NK-клетки [5, 6]. Но следует отметить, что в указанных работах упускается возможность участия в этих процессах одного из важных компонентов неспецифической защиты организма — нейтрофилов крови. Как известно, это фагоцитирующие клетки, отличающиеся быстротой реагирования в системе противоинфекционной защиты. Вне сомнения, они являются тканевыми фагоцитами, т.е. участвуют в основном в воспалительных реакциях в тканях. Однако следует считать установленным участие в них и циркулирующих форм клеток крови. Так, на возможность участия лейкоцитов периферической крови в воспалительных реакциях указывал еще И.И. Мечников, который пользовался термином «внутрисосудистое воспаление» [7, 8]. Последующие исследования, проведенные на более высоком техническом уровне, подтвердили это мнение. Представляет интерес также высказывание авторов, что имплантация зародыша в стенку матки сопровождается классической воспалительной реакцией [9—11]. В этом случае она, как считают исследователи, направлена не только на разрушение и удаление чужеродных антигенов, но и служит целям созидания путем «утилизации» апоптотического материала, т.е. обеспечению нормального микроокружения для развития зародыша.

С учетом этих данных напрашивается вывод, что нейтрофилы крови наряду с макрофагами выполняют не только функцию защиты от инфекции, но и участвуют в удалении как материнских, так и плодовых антигенов.

Однако, учитывая многообразие функциональных возможностей нейтрофилов, надо полагать, что этим не ограничивается их участие в защитных и компенсаторных реакциях организма. В значительной степени подтверждением тому служат и результаты предыдущих наших исследований. Так, на основании полученных данных нами было высказано мнение, что нейтрофилы крови включают механизмы деградации путем фагоцитоза и при повышенном содержании гормонов щитовидной железы в циркуляции воспринимают их в этой ситуации как вторжение антигенов [12].

Применительно к выбранной тематике одной из частых причин развития осложнений беременности, преимущественно ранних, служит высокий уровень тиреоидных гормонов в крови, т.е. некомпенсированный тиреотоксикоз, который чаще всего является синдромом диффузного токсического зоба (ДТЗ) [13]. Частота выявления его во время беременности довольно значительная — от 0,5 до 3% [14—16]. Это связывают с тем, что содержание тиреоидных гормонов в циркуляции, соответствующее периоду гестации, является существенно важным, и любые нарушения их продукции отражаются на развитии плода.

В единичных опубликованных работах нет единого мнения о динамике цитохимических показателей нейтрофилов крови, отражающих их функциональное состояние при беременности, а также при ее осложнениях [17, 18]. Так, Г.П. Евсеева и соавт. отмечают некоторое снижение активности миелопероксидазы (МПО) в нейтрофилах по мере прогрессирования беременности [19, 20]. К противоположному выводу в своих исследованиях пришли У.Р. Хамадьянов и соавт. [10, 21, 22]. Более того, в доступной литературе мы не встретили работ, посвященных изучению и других компонентов защитной системы нейтрофилов — катионных белков (КБ), гликогена и липидов, также ответственных за состояние их функциональной активности при как патологически, так и физиологически протекающей беременности.

Цель исследования — изучение динамики указанных цитохимических показателей нейтрофилов периферической крови женщин при физиологически протекающей беременности, а также у беременных пациенток с ДТЗ.

Материал и методы

Обследованы 82 пациентки в разные сроки гестации с диагнозом ДТЗ, которых разделили на группы в соответствии с функциональным состоянием щитовидной железы: в 1-ю группу вошли 22 беременные с ДТЗ, выявленным до беременности или в ранние ее сроки, получавшие медикаментозную терапию (пропилтиоурацил, имидазол или тиамазол). Во 2-ю группу включили 19 пациенток с ДТЗ, выявленным во второй половине беременности, имевших синдром тиреотоксикоза средней степени и не получавших лечение. В группу сравнения были включены 20 женщин с физиологическим течением беременности в сроки 21—39 нед, без патологии щитовидной железы. В контрольную группу вошла 21 практически здоровая беременная, бывшая до беременности донором Республиканской станции переливания крови, сопоставимая по возрасту с обследованными.

Всем пациенткам проводили общепринятые для беременных исследования: сбор анамнеза, физикальное и акушерское обследование, биохимические и ультразвуковое исследования акушерского статуса и щитовидной железы. Функциональное состояние щитовидной железы оценивали по содержанию св. Т₄, св. Т₃, ТТГ, аутоантител к тиреопероксидазе, к тиреоглобулину в крови. Цитохимические исследования включали определение активности МПО, содержания КБ, а также гликогена и липидов в нейтрофилах крови. По каждому указанному компоненту защитной системы нейтрофилов вычисляли средний цитохимический показатель — СЦП (M±m).

Для выявления активности МПО в мазках лейкомассы использовали методы по Грехэму-Кноллю и Карновскому [цит. по 23]. Активность МПО выражали методом полуколичественного анализа с вычислением СЦП. Активность катионных белков в лейкоцитах периферической крови определяли методом В.Е. Пигаревского [цит. по 24]. Для выявления и оценки характера распределения гранул гликогена в нейтрофильных гранулоцитах нами был использован метод по J. MacManus [цит. по 25]. Для цитохимической демонстрации липидов, входящих в состав лейкоцитов периферической крови, использовали метод с применением судана черного Б [цит. по 26].

Полученные результаты обрабатывали по программе SPSS (версия 6,0) методом вариационной статистики. Проводили расчеты средней арифметической (M), ошибки средней арифметической (m). Достоверность сравниваемых величин определяли по Стьюденту с вычислением критерия p. Разницу считали достоверной при уровне различий 0,05 и меньше (p<0,05).

Результаты и обсуждение

Картина активности МПО в нейтрофилах крови женщин с физиологическим течением беременности (группа сравнения) сходна с таковой в контрольной группе. Распределение ферментсодержащих азурофильных гранул в цитоплазме клеток равномерное, плотность их расположения в основном умеренная. Однако в I триместре беременности процент нейтрофилов с умеренным и высоким содержанием окрашенных гранул имеет тенденцию к снижению, что отражается на величине СЦП МПО. Как следует из представленных данных (см. таблицу), он в группе сравнения составил 1,40±0,05, контрольной группе — 1,55±0,07 усл.ед. В последующие сроки беременности активность фермента была сопоставима с таковой в контрольной группе.

У беременных 1-й группы активность МПО в нейтрофилах была достоверно снижена по сравнению с показателем в контрольной группе. В мазках определялся рост количества сегментоядерных нейтрофилов с малым и средним содержанием окрашенных продуктов цитохимической реакции. Эти сдвиги были более выражены в мазках крови пациенток 2-й группы. При этом характерно наличие нейтрофилов с неравномерным распределением окрашенных гранул; нередко можно видеть клетки с ферментсодержащими участками в виде отростков. СЦП снижен с высокой степенью достоверности (p<0,01).

В контрольной группе женщин в мазках крови, окрашенных на КБ, преобладающая часть нейтрофилов имела умеренно или слабо насыщенную продуктами реакции цитоплазму. В некоторых клетках их гранулярный компонент не выявлялся; определялся лишь слабо окрашенный диффузный фон.

Цитохимическая картина содержания КБ в нейтрофилах крови беременных группы сравнения, независимо от срока беременности, при сравнении с таковой контрольной группы существенно не была изменена. В мазках заметна лишь тенденция к росту количества сегментоядерных нейтрофилов, насыщенных окрашенными продуктами реакции. СЦП составлял 1,78±0,03 усл. ед., при контрольных значениях 1,62±0,03 усл. ед. (см. таблицу). Однако следует отметить, что у ряда женщин, особенно во второй половине беременности, содержание КБ в клетках было более высоким, при этом отмечена большая выраженность диффузного компонента окрашенных продуктов.

Цитохимические показатели (М±m) нейтрофилов крови женщин при физиологическом течении беременности и у беременных пациенток с диффузным токсическим зобом, усл.ед.

Примечание. Различие показателей по сравнению с таковыми контрольной группы достоверно (* — p<0,05, ** — p<0,01).

Исследование КБ в нейтрофилах крови беременных 1-й группы в динамике лечения показало, что содержание окрашенного материала в цитоплазме клеток было сопоставимо с показателями группы сравнения. Характерным было лишь их распределение: при заметном снижении диффузного фона более четко контурировался гранулярный компонент.

В нейтрофилах крови у женщин с синдромом тиреотоксикоза средней степени тяжести (2-я группа) установлен рост КБ по сравнению с таковым в контрольной группе с высокой степенью достоверности (p<0,01). В мазках было заметно больше сегментоядерных клеток с умеренным и высоким содержанием окрашенных гранул.

В мазках крови беременных группы сравнения при окрашивании на гликоген распределение ШИК-положительного материала в клетках было равномерным. Гранулярный компонент, как правило, слабо контурировался. Окрашивание основной массы нейтрофилов было умеренным и лишь 3—5% клеток имели насыщенную продуктами реакции цитоплазму.

Наблюдение за содержанием гликогена в нейтрофилах крови у беременных женщин 1-й группы с ДТЗ в динамике лечения показало сохранение СЦП во все сроки гестации в пределах, характерных для группы сравнения.

У беременных с синдромом тиреотоксикоза средней степени тяжести (2-я группа) в мазках количество нейтрофилов с умеренным и высоким содержанием окрашенного материала было существенно меньше. Просматривалась зависимость выраженности указанных сдвигов от степени тяжести заболевания. Обращало внимание малое количество или даже полное отсутствие ШИК-положительного материала в периферической зоне значительного количества клеток, в силу чего степень достоверности снижения данного показателя была высокой (p<0,01).

В нейтрофилах крови беременных группы сравнения при окрашивании на липиды значения СЦП были сопоставимы с таковыми контрольной группы (см. таблицу). Приблизительно в 80% клеток наблюдалось умеренное содержание гомогенного судан-положительного материала; гранулярный компонент окрашенных продуктов контурировался весьма слабо.

Статистически достоверное снижение уровня липидов установлено в нейтрофилах крови беременных женщин 1-й группы. При этом количество клеток с умеренным содержанием окрашенных продуктов снижено до 60—65%.

Сдвиги в содержании липидов в нейтрофилах крови были более существенными у пациенток 2-й группы. В мазках большой процент клеток имел малое количество или лишь следы судан-положительного материала, который чаще всего располагался в виде отдельных островков.

Таким образом, при анализе изученных цитохимических показателей нами установлено, что в нейтрофилах крови у соматически здоровых женщин с физиологическим течением беременности отмечается достоверное снижение лишь активности МПО. Представляется, что оно связано с имеющимся в I триместре беременности устойчивым ростом содержания тиреоидных гормонов в крови. В литературе его связывают прежде всего с продукцией плацентарного хорионического гонадотропина.

В попытке объяснить указанные сдвиги активности фермента мы придерживаемся мнения, как отмечалось ранее, что при повышении содержания тиреоидных гормонов в русле крови нейтрофилы включают реакцию их деградации с участием миелопероксидазной защитной системы. Весомым аргументом в его поддержку является отмеченное в работе одновременное снижение содержания и других компонентов фагоцитарной реакции в нейтрофилах крови беременных женщин, отягощенных патологией щитовидной железы. По-видимому, эти результаты и прежде всего низкая активность МПО, особенно выраженная у пациенток с синдромом тиреотоксикоза, являются следствием больших затрат фермента не только на «утилизацию» антигенов, но и на деградацию тиреоидных гормонов.

Подводя итого изложенному, следует отметить, что в нейтрофилах периферической крови беременных с синдромом тиреотоксикоза найдены достоверные сдвиги содержания компонентов фагоцитарной защитной системы. Они, несомненно, являются показателями снижения функционального состояния клеток и общей неспецифической резистентности организма. В связи с этим есть основание полагать, что нейтрофилы материнской крови принимают участие в механизме развития ряда осложнений течения беременности у женщин с ДТЗ.

Заключение

В нейтрофилах крови пациенток с физиологическим течением беременности отмечается низкая активность МПО, более выраженная у пациенток с ДТЗ. Рассматривается мнение, что это может быть связано с участием миелопероксидазной защитной системы клеток не только в «утилизации» плодных антигенов, но и в деградации тиреоидных гормонов.

У беременных с ДТЗ в нейтрофилах выявлено снижение содержания гликогена и липидов. Эти сдвиги следует объяснить тем, что функция деградации тиреоидных гормонов как аналог фагоцитарной нуждается в энергетическом и пластическом обеспечении.

Установленные в работе изменения цитохимических показателей нейтрофилов крови у беременных с ДТЗ, по-видимому, являются фрагментом общей компенсаторной реакции организма. Представляется, что она нацелена на поддержание физиологического уровня тиреоидных гормонов в крови, столь важного для нормального развития плода.

Участие авторов:

Концепция и дизайн исследования — А.З. Алиева, А.Э. Эседова

Сбор и обработка материала — А.З. Алиева, М.А. Идрисова

Статистическая обработка — А.Э. Эседова, А.З. Алиева

Написание текста — А.З. Алиева, М.А. Идрисова

Редактирование — Я.З. Зайдиева, А.Э. Эседова

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Participation of authors:

Concept and design of the study — A.Z. Alieva, A.E. Esedova

Data collection and processing — A.Z. Alieva, M.A. Idrisova

Statistical processing of the data — A.E. Esedova, A.Z. Alieva

Text writing — A.Z. Alieva, M.A. Idrisova

Editing — Ya.Z. Zaidieva, A.E. Esedova

Authors declare lack of the conflicts of interests.