Назаров В.Д.

Центр рассеянного склероза и других демиелинизирующих заболеваний Городской клинической больницы №31, Санкт-Петербург

Макшаков Г.С.

Центр рассеянного склероза и других демиелинизирующих заболеваний Городской клинической больницы №31, Санкт-Петербург

Мазинг А.В.

ГБОУ ВПО ПСПбГМУ им. акад. И.П. Павлова Минздрава России

Суркова Е.А.

ГБОУ ВПО «Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. акад. И.П. Павлова» Минздрава России, Санкт-Петербург, Россия

Краснов В.С.

Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. акад. И.П. Павлова, кафедра неврологии с клиникой;
Федеральный центр сердца, крови и эндокринологии им. В.А. Алмазова, Санкт-Петербург

Шумилина М.В.

Академическая группа акад. РАМН А.А. Скоромца (Университет Эмори - Атланта, США);
Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. И.П. Павлова

Тотолян Н.А.

Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. акад. И.П. Павлова

Евдошенко Е.П.

Санкт-Петербургское ГБУЗ "Городская клиническая больница №31", Санкт-Петербургский городской Центр рассеянного склероза и аутоиммунных заболеваний, Санкт-Петербург

Лапин С.В.

ГБОУ ВПО «Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. акад. И.П. Павлова», Санкт-Петербург, Россия

Эмануэль В.Л.

ФГБОУ ВО «Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. акад. И.П. Павлова» Минздрава России, Санкт-Петербург, Россия

Скоромец А.А.

ФГБОУ ВО «Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. акад. И.П. Павлова», Санкт-Петербург, Россия

Роль определения свободных легких цепей иммуноглобулинов в диагностике дебюта рассеянного склероза

Авторы:

Назаров В.Д., Макшаков Г.С., Мазинг А.В., Суркова Е.А., Краснов В.С., Шумилина М.В., Тотолян Н.А., Евдошенко Е.П., Лапин С.В., Эмануэль В.Л., Скоромец А.А.

Подробнее об авторах

Просмотров: 2402

Загрузок: 35


Как цитировать:

Назаров В.Д., Макшаков Г.С., Мазинг А.В., и др. Роль определения свободных легких цепей иммуноглобулинов в диагностике дебюта рассеянного склероза. Журнал неврологии и психиатрии им. С.С. Корсакова. Спецвыпуски. 2017;117(2‑2):60‑65.
Nazarov VD, Makshakov GS, Mazing AV, et al. Diagnostic value of immunoglobulin free light chains at the debut of multiple sclerosis. S.S. Korsakov Journal of Neurology and Psychiatry. 2017;117(2‑2):60‑65. (In Russ.)
https://doi.org/10.17116/jnevro20171172260-65

Рекомендуем статьи по данной теме:
Ва­ли­да­ция элек­трон­ной вер­сии рас­ши­рен­ной шка­лы ста­ту­са ин­ва­ли­ди­за­ции (РШСИ) на рус­ском язы­ке для па­ци­ен­тов с рас­се­ян­ным скле­ро­зом в Рос­сий­ской Фе­де­ра­ции. Ме­ди­цин­ские тех­но­ло­гии. Оцен­ка и вы­бор. 2024;(1):9-16
Эф­фек­тив­ность те­ле­ре­аби­ли­та­ции па­ци­ен­тов с рас­се­ян­ным скле­ро­зом в ус­ло­ви­ях пан­де­мии ко­ро­на­ви­рус­ной ин­фек­ции в 2020—2021 гг.. Жур­нал нев­ро­ло­гии и пси­хи­ат­рии им. С.С. Кор­са­ко­ва. 2024;(3):75-81
Эф­фек­тив­ность и бе­зо­пас­ность двух­лет­ней те­ра­пии ди­во­зи­ли­ма­бом у па­ци­ен­тов с рас­се­ян­ным скле­ро­зом в рам­ках ран­до­ми­зи­ро­ван­но­го двой­но­го сле­по­го пла­це­бо-кон­тро­ли­ру­емо­го кли­ни­чес­ко­го ис­сле­до­ва­ния BCD-132-4/MIRANTIBUS. Жур­нал нев­ро­ло­гии и пси­хи­ат­рии им. С.С. Кор­са­ко­ва. 2024;(4):86-96
Кли­ни­чес­кий слу­чай COVID-ас­со­ци­иро­ван­ной эн­це­фа­ло­па­тии у па­ци­ен­та с рас­се­ян­ным скле­ро­зом. Жур­нал нев­ро­ло­гии и пси­хи­ат­рии им. С.С. Кор­са­ко­ва. 2024;(4):159-163
Оп­ти­чес­кая ко­ге­рен­тная то­мог­ра­фия-ан­ги­ог­ра­фия в ди­аг­нос­ти­ке рас­се­ян­но­го скле­ро­за. Вес­тник оф­таль­мо­ло­гии. 2024;(2):63-70
Элек­тро­эн­це­фа­лог­ра­фия: осо­бен­нос­ти по­лу­ча­емых дан­ных и их при­ме­ни­мость в пси­хи­ат­рии. Жур­нал нев­ро­ло­гии и пси­хи­ат­рии им. С.С. Кор­са­ко­ва. 2024;(5):31-39
Роль це­реб­ро­вас­ку­ляр­ных за­бо­ле­ва­ний в прог­рес­си­ро­ва­нии рас­се­ян­но­го скле­ро­за. Жур­нал нев­ро­ло­гии и пси­хи­ат­рии им. С.С. Кор­са­ко­ва. 2024;(5):53-57
Оп­ти­чес­кая ко­ге­рен­тная то­мог­ра­фия в ди­аг­нос­ти­ке рас­се­ян­но­го скле­ро­за. Вес­тник оф­таль­мо­ло­гии. 2024;(3):59-68
Оп­рос­ни­ки для оцен­ки фун­кции ру­ки у па­ци­ен­тов с рас­се­ян­ным скле­ро­зом. Жур­нал нев­ро­ло­гии и пси­хи­ат­рии им. С.С. Кор­са­ко­ва. 2024;(6):36-42
Осо­бен­нос­ти пер­вич­ных форм го­лов­ной бо­ли при рас­се­ян­ном скле­ро­зе. Жур­нал нев­ро­ло­гии и пси­хи­ат­рии им. С.С. Кор­са­ко­ва. 2024;(6):70-73

Рассеянный склероз (РС) — аутоиммунное демиелинизирующее заболевание ЦНС. В основе патогенеза лежит воспалительное повреждение миелиновых оболочек нервных волокон ЦНС [1]. Первый эпизод демиелинизации, проявляющийся характерной клинической картиной, называется клинически изолированным синдромом (КИС). Согласно современным критериям диагностики РС по McDonald 2010, установить переход из КИС в достоверный РС (ДРС) можно на основании развития второго обострения, а также при выявления новых или контрастируемых гадолинием очагов при МРТ [2]. Время до второго обострения сильно варьирует у разных пациентов [3]. У части больных КИС не трансформируется в ДРС, и предшествующий эпизод неврологического дефицита остается единственным за всю жизнь [4]. В ряде исследований было показано улучшение прогноза течения РС и удлинение времени до второго обострения при начале терапии на этапе КИС [5]. Поиск биомаркеров, предсказывающих конверсию КИС в РС, поможет не только в дифференциальной диагностике данного заболевания, но и в оценке риска перехода в ДРС, а также в определении терапевтической тактики.

Главным иммунологическим маркером РС является повышенная интратекальная продукция иммуноглобулинов (IgG), а также их клональная рестрикция, которая характеризуется появлениям олигоклональных полос (ОКП) IgG при проведении изоэлектрофокусирования цереброспинальной жидкости (ЦСЖ) [6—9]. Определение ОКП IgG считается «золотым стандартом» лабораторной диагностики РС [6]. Было показано, что обнаружение ОКП IgG во время КИС предсказывает будущую трансформацию КИС в ДРС [10]. Однако поскольку результаты методики являются качественными, а не количественными, это определяет ее субъективный характер [11].

Другим маркером интратекальной активации В-лимфоцитов при РС является повышение концентрации свободных легких цепей каппа и лямбда (k-СЛЦ, λ-СЛЦ) в ЦСЖ [12, 13]. СЛЦ представляют собой фрагменты IgG различных фракций, синтезирующихся параллельно ОКП. Было показано, что СЛЦ играют роль медиаторов в воспалительных реакциях, могут связываться с поверхностными рецепторами ряда клеток, а также обладают антигенной специфичностью [14]. В отличие от ОКП, у пациентов с КИС или РС возможно проводить количественную оценку СЛЦ в ЦСЖ, используя высокочувствительную и специфичную методику иммуноферментного анализа (ИФА). Цель работы — оценка диагностической значимости определения СЛЦ IgG в дебюте РС.

Материал и методы

В исследовании приняли участие 226 пациентов Городского центра РС (ГЦРС) Санкт-Петербурга. Исследование было одобрено Локальным этическим комитетом ГКБ № 31. Все пациенты подписали добровольное информированное согласие на участие в исследовании. Проведен ретроспективный анализ данных, полученных за период с 2012 по 2016 г. В исследование были включены четыре группы пациентов. В 1-ю группу вошли пациенты с КИС, у которых переход в достоверный рецидивирующее-ремиттирующий РС (РРРС) был подтвержден в течение 2 лет в соответствии с критериями McDonald 2005 и 2010 г. (n=111). Во 2-ю группу вошли пациенты с КИС, у которых в течение первых 2 лет с момента КИС диагноз РРРС не был подтвержден (n=49). В 3-ю группу вошли пациенты с воспалительными заболеваниями ЦНС (3-я группа, n=20). Группа сравнения (4-я) состояла из пациентов с невоспалительными заболеваниями ЦНС (n=46). Всем пациентам с КИС люмбальная пункция выполнялась в течение первого года с момента первых симптомов до конверсии в достоверный РРРС. Пациенты из 3-й и 4-й групп обращались в Центр для консультации в связи с подозрением на РС. У всех из них на МРТ головного мозга имелись гиперинтенсивные очаги, схожие с таковыми при демиелинизирующем заболевании. По результатам дообследования диагноз РРРС был исключен, и было установлено другое заболевание воспалительного или невоспалительного генеза. Характеристики групп пациентов представлены в табл. 1.

Таблица 1. Общая характеристика пациентов Примечание. **** — значение p<0,0001 для сравнения возраста между 1-й и 4-й группами; * — значение p<0,05 для сравнения 2-й и 4-й групп; ** — значение p=0,05 для сравнения 1-й и 3-й групп; ‡ — сравнение количества ОКП-позитивных пациентов в 1-й и 2-й группах методом χ2 (p<0,0001); † — тест χ2 для сравнения количества ОКП-позитивных пациентов во 2-й и 3-й группах (p=0,034).

Концентрация k-СЛЦ, λ-СЛЦ определялась в ЦСЖ (kл-СЛЦ и λл-СЛЦ) и сыворотке с помощью иммуноферментного анализа (ИФА) с анти-k- и анти-λ-моноклональными антителами против скрытых эпитопов СЛЦ (ООО «Полигност», Санкт-Петербург, Россия). Для оценки влияния сывороточной концентрации СЛЦ нами дополнительно оценивался коэффициент (Q) концентрации k-СЛЦ и λ-СЛЦ, определяемый по формуле (Q-k и Q-λ соответственно): Q-СЛЦ=СЛЦЦСЖ/СЛЦСЫВОРОТКА. Для учета проницаемости гематоэнцефалического барьера (ГЭБ) использовался коэффициент альбумина: QАЛЬБ=АЛЬБЦСЖ/АЛЬБСЫВОРОТКА. Для интерпретации содержания СЛЦ в ЦСЖ с учетом проницаемости ГЭБ использовались индексы k- и λ-цепей (I-k и I-λ соответственно): IСЛЦ=QСЛЦ/QАЛЬБ.

Образцы ЦСЖ и сыворотки крови после забора хранились при температуре –80 °С. Определение ОКП проводилось методом изоэлектрофокусирования в агарозном геле с последующим имуноблоттингом. Анализ результатов осуществлялся на основании международных рекомендаций [15, 16].

Анализ данных был проведен при помощи программы для статистической обработки данных GraphPadPrism 7 («Graph Pad Software Inc., CA», USA). Проверка на нормальность проводилась тестом Колмогорова—Смирнова. В зависимости от типа распределения нами использовались параметрические (t-тест Стьюдента) или непараметрические (U-тест Манна—Уитни) методы оценки выборок. Для сравнения групп качественных признаков применялся тест χ2. Числовые данные в результатах представлены как медиана и межквартильный диапазон. Уровень статистической значимости для всех тестов принимался при p<0,05.

Результаты

Количество ОКП-позитивных пациентов во 2-й группе (43%) было значимо меньше, чем в 1-й (88%; p<0,0001) и 3-й (75%; p=0,0340).

Концентрации kл-СЛЦ, λл-СЛЦ, Q-λ и Q-λ были значимо выше в 1-й и 2-й группах, чем в 4-й группе. Сывороточные показатели СЛЦ не превышали норму во всех четырех группах (данные не представлены). В 1-й группе все показатели СЛЦ были значимо выше, чем во 2-й. При сравнении концентраций во 2-й и 4-й группах, оказалось, что только концентрация kл-СЛЦ и Q-k значимо отличались от показателей 4-й группы. В 3-й группе также наблюдалось значимое повышение всех показателей СЛЦ в сравнении с 4-й группой. Показатели синтеза СЛЦ в 3-й группе значимо не отличались от показателей в 1-й группе, однако были значимо выше, чем во 2-й группе (табл. 2).

Таблица 2. Концентрации и коэффициенты концентраций СЛЦ в ЦСЖ (Ме [Q1; Q4])

Поскольку продукция ОКП и СЛЦ при РС является следствием интратекальной активации В-лимфоцитов, нами была оценена связь между продукцией ОКП и концентрациями СЛЦ. Концентрации СЛЦ и их коэффициенты были значимо выше у ОКП-позитивных пациентов (рис. 1).

Рис. 1. Сравнение концентраций kл-СЛЦ и λл-СЛЦ в 1-й и 2-й группах (данные объединены) среди ОКП-позитивных и ОКП-негативных пациентов.

Концентрации СЛЦ в 1-й и 2-й группах были оценены отдельно для ОКП-позитивных и ОКП-негативных пациентов. Выявлена значимая разница в концентрациях kл-СЛЦ, но не λл-СЛЦ между ОКП-позитивными пациентами в 1-й и 2-й группах (p=0,02 для kл-СЛЦ; p=0,1031 для λл-СЛЦ). При анализе результатов обследования ОКП-негативных пациентов также была установлена значимая разница в концентрациях kл-СЛЦ, а также в концентрациях λл-СЛЦ между 1-й и 2-й группами (р=0,0016 для kл-СЛЦ; р=0,0344 для λл-СЛЦ) (рис. 2).

Рис. 2. Сравнение концентраций kл-СЛЦ и λл-СЛЦ у пациентов 1-й и 2-й групп с разным ОКП-статусом.

По данным ROC-анализа наилучшими диагностическими характеристиками чувствительности и специфичности обладали kл-СЛЦ и Q-k (табл. 3, рис. 3).

Таблица 3. ROC-анализ показателей концентраций СЛЦ

Рис. 3. Анализ ROC-кривой показателей синтеза СЛЦ в 1-й и 4-й группах.

В 1-й группе среди ОКП-негативных пациентов повышенная концентрация (>0,103 мкг/мл) kл-СЛЦ наблюдалась у 50% (n=6/12), что не встречалось ни у одного пациента из 2-й группы. Учитывая наличие повышенного синтеза СЛЦ при отсутствии синтеза ОКП, мы сравнили чувствительность определения ОКП и СЛЦ отдельно и при наличии хотя бы одного из этих показателей методом χ2. Чувствительность определения ОКП составила 88%, значимо не отличалась от чувствительности при использовании обоих методов (94%; p=0,0934) (или ОКП-позитивный статус, или повышение СЛЦ). Чувствительность определения kл-СЛЦ составляла 88% и также значимо не отличалась от показателя при использовании обоих методов (94%; p=0,001).

Обсуждение

Поиск и определение значимости клинических, лабораторных и инструментальных диагностических маркеров на сегодняшний день является одним из приоритетов в исследованиях Р.С. Анализ распространенности ОКП в нашей популяции показал, что у 88% пациентов 1-й группы имел место интратекальный синтез ОКП, что соответствует данным других авторов о чувствительности данного маркера [9, 10].

Уровень интратекальной продукции СЛЦ в 1-й и 2-й группах был значительно выше, чем в 4-й, что отражает наличие интратекального воспаления у пациентов с КИС и Р.С. Данные, полученные нами, также сопоставимы с результатами других исследований диагностической значимости СЛЦ при КИС и РС [17, 18]. Также было обнаружено, что уровень СЛЦ значительно выше у пациентов 1-й группы, чем 2-й. Возможно, это объясняется более выраженными воспалительными изменениями в случае предшествующей трансформации в РС. В представленном исследовании мы также сравнили уровень синтеза СЛЦ у пациентов с КИС и у пациентов с различными воспалительными заболеваниями ЦНС, которые в основном были ОКП-положительными. Концентрациия СЛЦ при воспалительных заболеваниях значительно варьировала, однако значимой разницы с 1-й группой получено не было. Это соответствует данным других исследований, хотя в некоторых из них концентрация k-СЛЦ при РС оказалась выше при вирусных и бактериальных инфекциях ЦНС [17]. Нами также показано, что концентрация kл-СЛЦ у ОКП-положительных пациентов в 1-й группе оказалась значительно выше, чем у ОКП-положительных пациентов во 2-й группе.

В данном исследовании концентрации λл-СЛЦ в 1-й группе не превышали показатели во 2-й группе, что отражает свойственную для РС тенденцию к интратекальному синтезу преимущественно k-СЛЦ. СЛЦ могут также быть независимым от ОКП показателем уровня интратекальной воспалительной активности заболевания. Нами обнаружена статистически значимая разница концентрации kл-СЛЦ и λл-СЛЦ между 1-й и 2-й группами у ОКП-отрицательных пациентов. Возможно, этот факт отражает стадийность развития РС, когда у пациентов с КИС олигоклональный синтез Ig еще не обнаруживается, но присутствует значительное интратекальное воспаление. Обнаруженный феномен требует дальнейших исследований.

Анализ ROC-кривой показателей синтеза СЛЦ продемонстрировал, что наиболее высокой диагностической информативностью обладают kл-СЛЦ и Q-k, что также сопоставимо с данными других исследований [11]. Чувствительность kл-СЛЦ оказалась сопоставима с чувствительностью ОКП. Использование индексов I-k, I-λ, учитывающих уровень проницаемости ГЭБ, оцениваемого с помощью Qальб, не привело к увеличению чувствительности показателей. Нужно отметить, что некоторыми авторами отмечено значительное улучшение диагностических показателей СЛЦ при учете уровня проницаемости ГЭБ [17]. Кроме этого, нами показано, что в группе использование kл-СЛЦ в качестве дополнительного маркера позволяет на 50% уменьшить количество ложноотрицательных результатов анализа на ОКП.

В ходе исследования нами было показано, что kл-СЛЦ и Q-k обладают достаточно высокой чувствительностью и специфичностью для диагностики КИС, использование СЛЦ как лабораторного маркера может повышать точность диагностики РС для ОКП-негативных пациентов, а также дает возможность косвенно оценить риск перехода КИС в ДРС в течение последующих 2 лет.

Работа выполнена на средства гранта Российского Научного Фонда, номер заявки 16−15−10203.

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Подтверждение e-mail

На test@yandex.ru отправлено письмо со ссылкой для подтверждения e-mail. Перейдите по ссылке из письма, чтобы завершить регистрацию на сайте.

Подтверждение e-mail

Мы используем файлы cооkies для улучшения работы сайта. Оставаясь на нашем сайте, вы соглашаетесь с условиями использования файлов cооkies. Чтобы ознакомиться с нашими Положениями о конфиденциальности и об использовании файлов cookie, нажмите здесь.