Сайт издательства «Медиа Сфера»
содержит материалы, предназначенные исключительно для работников здравоохранения. Закрывая это сообщение, Вы подтверждаете, что являетесь дипломированным медицинским работником или студентом медицинского образовательного учреждения.

Дмитриев Г.А.

Первый МГМУ им. И.М. Сеченова

Фриго Н.В.

ГБУЗ «Московский научно-практический центр дерматовенерологии и косметологии Департамента здравоохранения Москвы», Москва, Россия, 119071

Негашева Е.С.

Московский научно-практический центр дерматовенерологии и косметологии Департамента здравоохранения Москвы, Москва, Россия, 119071

Ротанов С.В.

ГОБУ ВПО «Российский научно-исследовательский медицинский университет им. Н.И. Пирогова» Минздрава России, Москва, Россия, 117997

Китаева Н.В.

ГБУЗ «Московский научно-практический центр дерматовенерологии и косметологии» Департамента здравоохранения Москвы, Москва, Россия

Доля О.В.

Первый МГМУ им. И.М. Сеченова

Лабораторная диагностика сифилиса: современные приоритеты

Авторы:

Дмитриев Г.А., Фриго Н.В., Негашева Е.С., Ротанов С.В., Китаева Н.В., Доля О.В.

Подробнее об авторах

Просмотров: 7228

Загрузок: 341


Как цитировать:

Дмитриев Г.А., Фриго Н.В., Негашева Е.С., Ротанов С.В., Китаева Н.В., Доля О.В. Лабораторная диагностика сифилиса: современные приоритеты. Клиническая дерматология и венерология. 2020;19(2):154‑161.
Dmitriev GA, Frigo NV, Negasheva ES, Rotanov SV, Kitaeva NV, Dolia OV. Laboratory diagnosis of syphilis: current priorities. Russian Journal of Clinical Dermatology and Venereology. 2020;19(2):154‑161. (In Russ.)
https://doi.org/10.17116/klinderma202019021154

Рекомендуем статьи по данной теме:
Ла­бо­ра­тор­ная ди­аг­нос­ти­ка «клю­че­вых» ин­фек­ций, пе­ре­да­ва­емых по­ло­вым пу­тем (об­зор ли­те­ра­ту­ры). Часть I. Кли­ни­чес­кая дер­ма­то­ло­гия и ве­не­ро­ло­гия. 2023;(6):643-650
Ла­бо­ра­тор­ная ди­аг­нос­ти­ка ней­ро­си­фи­ли­са: пу­ти оп­ти­ми­за­ции. Часть I. «Клас­си­чес­кие» ме­то­ды ис­сле­до­ва­ния. Кли­ни­чес­кая дер­ма­то­ло­гия и ве­не­ро­ло­гия. 2023;(6):652-660
Ла­бо­ра­тор­ная ди­аг­нос­ти­ка «клю­че­вых» ин­фек­ций, пе­ре­да­ва­емых по­ло­вым пу­тем. Часть II. Кли­ни­чес­кая дер­ма­то­ло­гия и ве­не­ро­ло­гия. 2024;(1):6-11
Ла­бо­ра­тор­ная ди­аг­нос­ти­ка ней­ро­си­фи­ли­са: пу­ти оп­ти­ми­за­ции. Часть II. Сов­ре­мен­ные под­хо­ды и би­омар­ке­ры. Кли­ни­чес­кая дер­ма­то­ло­гия и ве­не­ро­ло­гия. 2024;(1):28-36
Пти­хот­роп­ный по­ро­ке­ра­тоз (porokeratosis ptychotropica): осо­бен­нос­ти кли­ни­чес­ких и гис­то­ло­ги­чес­ких про­яв­ле­ний. Кли­ни­чес­кая дер­ма­то­ло­гия и ве­не­ро­ло­гия. 2024;(1):56-62
Собствен­ный опыт при­ме­не­ния пре­па­ра­та ате­зо­ли­зу­маб у па­ци­ен­тов с рас­простра­нен­ным мел­кок­ле­точ­ным ра­ком лег­ко­го. Он­ко­ло­гия. Жур­нал им. П.А. Гер­це­на. 2023;(6):63-67
Ак­тив­ность аце­тил­хо­ли­нэс­те­ра­зы кро­ви и слю­ны при бо­ко­вом ами­от­ро­фи­чес­ком скле­ро­зе. Жур­нал нев­ро­ло­гии и пси­хи­ат­рии им. С.С. Кор­са­ко­ва. 2024;(1):128-134
Диаг­нос­ти­ка ВИЧ-ин­фек­ции в Че­чен­ской Рес­пуб­ли­ке: сов­ре­мен­ное сос­то­яние и пер­спек­ти­вы. Про­фи­лак­ти­чес­кая ме­ди­ци­на. 2024;(1):17-24
Эн­доб­рон­хи­аль­ная га­мар­то­ма. Он­ко­ло­гия. Жур­нал им. П.А. Гер­це­на. 2024;(1):59-62
Хро­ни­за­ция го­лов­ной бо­ли: ана­лиз выз­ван­ных по­тен­ци­алов на сти­мул. Рос­сий­ский жур­нал бо­ли. 2024;(1):18-26

Актуальность

Среди множества инфекций, передаваемых половым путем (ИППП), наиболее проблематичным с точки зрения постановки диагноза, терапии и установления критерия излеченности является сифилис, вызванный инвазией бледной трепонемы (T. pallidum).

В отличие от гонококковой, трихомонадной, хламидийной инфекций и других ИППП возбудитель сифилиса T. Pallidum благодаря особым структурно-функциональным характеристикам может проникать практически в любые органы и ткани человека, вызывая специфические, неспецифические или атипичные симптомы, имитирующие иные заболевания, что значительно затрудняет постановку диагноза. Так, при первичном сифилисе могут встречаться атипичные проявления в виде линейного шанкра, множественных поражений, сопровождаемых лимфангитом или тромбофлебитом спинки полового члена, сопутствующим воспалительным отеком полового члена или фимозом, появлением гигантского некротического шанкра, болезненных, зудящих или незаживающих язв [1, 2]. При вторичном сифилисе классическая пятнисто-папулезная сыпь может имитировать красный плоский лишай; папулосквамозные высыпания могут напоминать псориаз. Могут также наблюдаться эффлоресценции, имитирующие дискоидную красную волчанку, многоформную эритему, анетодермию и др. [3—6].

После эпидемии сифилиса, которую Россия пережила в 1990-е годы, отмечен ряд изменений в течении заболевания: увеличение доли больных скрытым сифилисом, рост заболеваемости другими поздними формами, в том числе нейро-, висцеральным сифилисом [7]. В связи с этим основная роль в установлении диагноза принадлежит лабораторной диагностике, оперирующей достоверными качественными, полуколичественными и количественными данными о наличии (отсутствии) T. pallidum и/или ее компартментов в биопробах, в том числе в тканях, а также антител к T. pallidum в сыворотке крови, цереброспинальной и тканевой жидкости.

Обсуждение

В настоящее время для диагностики значительного количества инфекций, в том числе ИППП, применяются молекулярно-биологические исследования, позволяющие практически со 100% достоверностью установить наличие/отсутствие патогенных возбудителей в биопробах. Возможность использования одного из вариантов таких методологий — полимеразной цепной реакции (ПЦР) продемонстрирована при диагностике ранних форм сифилиса [8]. Ранее эти формы заболевания исследовали прямым методом — так называемой темнопольной микроскопией (ТПМ). Метод применяли при выявлении подвижных микроорганизмов (спирохеты, трихомонады и др.). Положительный результат микроскопии в темном поле зрения является безусловным основанием для постановки диагноза «сифилис» при исключении непатогенных представителей семейства спирохет, отличающихся формой, размером и характером движений. Отрицательный результат не имеет диагностического значения, поскольку может быть обусловлен некачественным получением образца, отсутствием трепонем в данной локализации на момент взятия пробы, потерей возбудителем подвижности и малым содержанием трепонем. Чувствительность ТПМ для диагностики первичного сифилиса составляет примерно 80%. Тест может быть отрицательным, если на пораженные участки были нанесены антибиотики, и непригоден для исследования высыпаний в полости рта, где непатогенные трепонемы микроскопически неотличимы от T. pallidum [9].

Еще одним прямым методом диагностики сифилиса является тест заражения кроликов биоматериалом пациентов с подозрением на сифилис (rabbit infectivity test — RIT), он довольно широко использовался в прошлом веке. За рубежом эта методика применяется в единичных исследовательских лабораториях, главным образом для оценки чувствительности других методов диагностики сифилиса.

Первые сообщения об использовали ПЦР для определения последовательности ДНК, специфической для патогенных трепонем, появились в начале 1990-х годов XX века [10—12]. По данным зарубежных и российских авторов, чувствительность ПЦР превышает чувствительность ТПМ [8, 13]. Наиболее адекватным биоматериалом для исследования методом ПЦР является отделяемое генитальных язв [14—16]. Как показали результаты недавних метаанализов [17, 18], клиническая чувствительность ПЦР с использованием в качестве мишеней генов T.pallidum tpp47 и polA при исследовании генитальных язв больных ранним сифилисом (референс-метод — ТПМ) составила соответственно 79,8% и 71,4%, специфичность — 95,3% и 93,7%. Исходя из данных литературы, следует отметить следующие приоритеты использования ПЦР для диагностики сифилиса: исследование генитальных язв при первичном сифилисе и отрицательных результатах серологических тестов; локализация высыпаний на слизистой оболочке полости рта и в других местах, где возможна контаминация трепонемами-комменсалами.

Таким образом, ТПМ и ПЦР-анализ можно использовать лишь при ранних манифестных формах заболевания (первичном, вторичном, раннем врожденном), их нельзя применять при скрытых, поздних формах инфекции, а также с целью изучения динамики патологического процесса в ходе терапии [7, 8, 19, 20]. Поэтому в настоящее время лабораторная диагностика сифилиса базируется главным образом на изучении ответной реакции организма на инвазию T. pallidum, определяемой с помощью серологических тестов.

Механизм развития иммунной реакции при сифилисе во многом неизвестен, и для установления заболевания применяется целый спектр методологий, история создания которых началась сразу после открытия (1905 г.) бледной трепонемы и фактически продолжается до сих пор. Современный алгоритм диагностики сифилиса в России регламентирован приказом Минздрава России от 26.03.01 №87 [21], который отменил реакцию связывания (фиксации) комплемента и ввел в практику реакцию пассивной гемагглютинации (РПГА), иммуноферментный анализ (ИФА) и другие методы диагностики. Регламентированные методы лабораторной диагностики сифилиса, подразделяемые на нетрепонемные и трепонемные, в обязательном порядке применяют в комплексе.

К нетрепонемным тестам относят реакции преципитации1 (МР, или РМП, Venereal Diseases Research Laboratory — VDRL, RPR, USR, TRUST), основанные на феномене флоккуляции2 — образовании и выпадении в виде хлопьев образующихся в ходе реакции комплексов «антиген — антитело». Метод основан на образовании преципитата при добавлении к плазме, сыворотке или ликвору больного сифилисом эмульсии кардиолипинового антигена. Контролем служат заведомо отрицательные или положительные биологические жидкости [21].

Вместе с тем следует учитывать, что РМП (или RPR), широко применяемые в диагностике сифилиса, рекомендованы лишь для исследования сыворотки и плазмы крови, тогда как VDRL на протяжении многих лет с успехом применяется за рубежом для исследования цереброспинальной жидкости (ЦСЖ, или ликвора) при постановке диагноза нейросифилиса. Получены многочисленные сведения о более высокой эффективности в том числе российской тест-системы VDRL по сравнению с РМП и RPR, причем выводы сделаны на основании результатов, полученных у значительного количества пациентов с подозрением на нейросифилис [22—24].

Нетрепонемные тесты являются неспецифическими, при их постановке применяют кардиолипиновый антиген; отдельно результаты этих тестов имеют ничтожное значение, и при постановке диагноза ведущая роль принадлежит трепонемным, специфическим, методам исследования, определяющим ответную реакцию организма на внедрение T. pallidum. Важное значение нетрепонемные тесты приобретают в процессе и по окончании терапии за счет более быстрой по сравнению с трепонемными тестами негативации.

В зависимости от формы и стадии заболевания при диагностике сифилиса используют разнообразные трепонемоспецифические тесты: реакцию иммобилизации бледных трепонем (РИБТ, или РИТ), РПГА, реакцию иммунофлюоресценции (РИФ) и ее модификации — РИФабс, РИФ200, РИФц, а также относительно новые для Российской Федерации ИФА (ELISA) и иммуноблоттинг (Western Вlot).

С помощью РИТ, основанной на феномене иммобилизации бледной трепонемы (штамм Nichols) — потере подвижности в присутствии специфических противотрепонемных антител в исследуемой сыворотке и/или ликворе и комплемента, в анаэробных условиях определяют так называемые иммобилизины, которые образуются позже комплементсвязывающих антител, что позволяет, по мнению ряда специалистов, использовать эту методологию при более поздних формах сифилиса. Принцип реакции хорошо известен и описан в различных методических документах, монографиях, научных статьях [25]. Результат рассчитывают в процентах иммобилизации по соотношению подвижных и неподвижных трепонем в опыте (активный комплемент) и контроле (неактивный). Получение результата на практике представляется весьма субъективным, длительным, требует высокой профессиональной подготовки и опыта. Установлены расхождения результатов РИТ с другими (более чувствительными) тестами при поздних формах сифилиса (нейросифилис и др.). Кроме того, этот метод весьма затратный и сложный в постановке, так как для его выполнения требуется наличие вивария и еженедельная перевивка штамма T. pallidum на кроликах, а применение метода в качестве критерия излеченности в отличие от других диагностических методик нецелесообразно, поскольку иммобилизины определяются в крови больных сифилисом весьма длительное время. Более того, РИТ в ряде случаев (например, при первичном сифилисе) вследствие небольшого количества иммобилизинов может быть отрицательной, что не позволяет поставить адекватный диагноз. Сейчас эту реакцию, считавшуюся в прошлом веке реакцией экспертизы [25], дополняют современными методологиями.

РПГА — одна из наиболее широко используемых в практической медицине реакций с целью определения G- и М-антител, заключается в агглютинации частиц-носителей, сенсибилизированных трепонемным антигеном, в присутствии специфических противотрепонемных антител в исследуемой пробе (сыворотка крови, ликвор и др.). Для РПГА применяют искусственные полимерные сферические частицы: латекс, хитин, полиакриламид и другие, более совершенные по сравнению с ранее используемыми носителями (эритроциты барана или птиц), а также с желатином [26].

Современные РПГА-наборы, в том числе и российские, для определения антител к T. pallidum являются микромодификациями, обеспечивающими экономичность и быстроту постановки диагноза. К преимуществам метода относят также высокую чувствительность и специфичность, простоту выполнения, доступность, одноэтапность, а также возможность применения методики в небольших лабораториях. К достоинствам РПГА можно отнести и весьма небольшое количество ложноположительных результатов (>1%) среди здорового населения.

РИФ и ее модификации с учетом чувствительности и специфичности остаются востребованными при диагностике всех форм сифилитической инфекции как в России, так и за рубежом [21]. Вместе с тем к недостаткам РИФ следует отнести субъективность оценки результатов, так как критерии специфичности, заключающиеся в характерной морфологии, размерах и расположении возбудителя в мазке, а также в характере свечения объекта и интенсивности флюоресценции, разные исследователи могут расценивать по-разному. Другими словами, РИФ-тесты технически сложны, требуют постоянного количественного контроля для получения достоверных и воспроизводимых результатов. Тест по этой методике должен выполнять высококвалифицированный, опытный врач-лаборант, поскольку она не может быть автоматизирована даже после разработки коммерческих отечественных тест-систем [21].

С этой точки зрения значительным преимуществом обладает так называемый твердофазный ИФА, разработанный в 1970-х годах и широко используемый в диагностике многих инфекционных заболеваний, в том числе сифилиса [19, 21]. Принцип наиболее часто применяемого непрямого варианта метода заключается в следующем: антиген фиксируют на твердофазном носителе — поверхности лунок пластикового планшета, после чего инкубируют с испытуемой сывороткой, затем следует инкубация с антителами к иммуноглобулинам человека, меченными ферментом, результат исследования учитывают с помощью цветной реакции с субстратом (количественно, спектрофотометрически). Антигены, применяемые для сенсибилизации, могут быть лизатными, рекомбинантными или пептидными.

Таким образом, ИФА предназначен для определения специфических антител классов М, G и А (IgM, IgG и IgA) в биопробах больных при взаимодействии испытуемой сыворотки с антителами этих классов и антигеном. В настоящее время в непрямом варианте ИФА в качестве антигена используют главным образом рекомбинантные и пептидные антигены T. pallidum.

ИФА одновременно является и скрининговым, и подтверждающим диагностическим тестом, с его помощью можно выявлять как комплекс иммуноглобулинов (IgG+IgM), так и отдельные их виды (IgM), что важно для ранней диагностики сифилиса. Для диагностики врожденного сифилиса используется «ловушечный» метод, обладающий более высокой чувствительностью и специфичностью. Установлена возможность применения ИФА для дифференциальной диагностики раннего и позднего скрытого сифилиса, а также для диагностики нейросифилиса [22, 27].

Высокая чувствительность (98—100%) и специфичность (96—100%), автоматизированный учет результатов реакции, позволяющей одновременно анализировать значительное число биопроб, выдвигает ИФА в число ведущих методов в диагностике сифилиса и других заболеваний. Вместе с тем ИФА, как и другие трепонемоспецифические методы лабораторной диагностики сифилиса, нельзя применять для ранней оценки эффективности терапии — ввиду того, что тест длительно сохраняется позитивным.

Еще одним высокочувствительным методом выявления антител к T. pallidum является так называемый линейный ИФА, или линейный иммуноблоттинг, который применяют для определения IgG и IgM. Принцип реакции в том, что антигены T. pallidum подвергаются электрофорезу в градиенте концентрации додецилсульфата натрия, в результате на нитроцеллюлозной мембране происходит разделение белковых иммунодетерминант бледной трепонемы. Затем осуществляется обработка разделенных участков (blots) исследуемой пробы (сыворотка, ликвор и др.) конъюгатом — антителами к IgG либо к IgM человека, меченными ферментами, которые разлагают субстрат. Изменение цвета полосок (blots) свидетельствует о наличии антител к T. pallidum в пробе.

Применяемые в настоящее время в серологической диагностике сифилиса рекомбинантные белки T. pallidum (Тр47, Тр15, Тр17 и TmpA) позволяют достичь высоких показателей чувствительности и специфичности при использовании их в коммерческих ИФА-тест-системах, а также в иммуноблоттинге [7, 28, 29].

В современных тест-системах для линейного иммуноблоттинга благодаря нанесению на полоску нитроцеллюлозы рекомбинантных антигенов или синтетических полипептидных антигенов, т.е. благодаря устранению этапа электрофореза, уровень контаминации антигенов веществами из клеточных культур, вызывающих ложноположительные результаты, значительно снижен. Высокая чувствительность и специфичность метода (>99%), отсутствие перекрестных реакций позволяют применять иммуноблоттинг в качестве дополнительного и/или подтверждающего (верифицирующего) теста при диагностике сифилиса [7]. В то же время этот метод имеет определенные ограничения: длительность проведения анализа, низкую пропускную способность из-за отсутствия специализированного оборудования и высокую стоимость.

Одним из перспективных, активно развивающихся направлений является создание так называемых иммуночипов, сочетающих принцип миниатюризации и многофакторного анализа, что приводит к повышению производительности выполнения исследований и снижению их себестоимости. При выполнении исследования в формате иммуночипа на иммуносорбент, представляющий собой стеклянный слайд с альдегид-активированной поверхностью, на которой есть группа микрозон (эрреев) с «напечатанным» в них набором диагностически значимых иммунодоминантных рекомбинантных антигенов T. pallidum с молекулярной массой 47, 17, 15 и 42—44 кДа (TmpA), наносят контрольные и исследуемые образцы. После этого инкубируют полученную смесь для образования комплекса «антиген — антитело». Далее на иммуносорбент наносят раствор конъюгата, состоящего из смеси антител к IgG/IgM человека, модифицированных флюорофорами, и после стадий инкубации, промывки и высушивания осуществляют детекцию образовавшегося комплекса «антиген — антитело» на чип-ридере. В случае использования «отрицательного» образца, не содержащего антител к T. pallidum, флюоресцируют только маркеры границы эррея иммуночипа, в то время как при использовании «положительного» образца флюоресцируют области, на которые были нанесены белки-антигены T. pallidum. Такой иммуночип, cозданный в 2009 г. сотрудниками ЦНИИ эпидемиологии (Москва), продемонстрировал высокую эффективность на стандартных коммерческих панелях проб, содержащих и не содержащих антитела к антигенам T. pallidum, а также при исследовании образцов сыворотки крови, положительных и отрицательных по содержанию антител к белковым антигенам T. pallidum в иммуноферментном и иммунохемилюминесцентном анализе [20].

Таким образом, в настоящее время для лабораторной диагностики различных форм и стадий сифилиса применяются преимущественно методики, основанные на непрямом подходе — определении ответной антительной реакции организма на инвазию T. pallidum. Применение прямых методов диагностики в значительной степени ограничено недостаточно высокой чувствительностью (ТПМ), трудоемкостью (RIT), необходимостью в дорогостоящем оборудовании либо невозможностью выявлять скрытые формы инфекции (ПЦР).

В последние годы в России и ряде других стран ввиду значительного увеличения заболеваемости нейросифилисом осуществляется поиск новых подходов к диагностике этой формы сифилитической инфекции. С этой целью в рамках выполнения приказа Департамента здравоохранения города Москвы от 11.08.2017 №565 [30] и научной темы «Разработка и внедрение в московское здравоохранение современных методов профилактики, диагностики, лечения инфекций, передаваемых половым путем» (государственная регистрация №АААА-А17-117122290024-5-7) в Московском центре дерматовенерологии и косметологии в последние годы разрабатываются клинико-лабораторные подходы, призванные оптимизировать диагностику нейросифилиса (исследование эффективности нетрепонемного теста — VDRL, иммуночипа, сывороточно-ликворного соотношения, многомерного дискриминантного анализа и др.). Получены предварительные данные, свидетельствующие о важности результатов таких научно-практических разработок [31—33].

При постановке диагноза нейросифилиса следует учитывать, что в отличие от других форм заболевания решающим является обнаружение интратекального синтеза трепонемных антител — нахождение их в ЦСЖ путем исследования биопробы пациента, полученной люмбальной пункцией. Однако в большинстве случаев отмечают пассивный перенос антител к бледной трепонеме и/или ее компартментам через спинномозговой канал, минуя гематоэнцефалический барьер, что не сопровождается развитием активной антительной реакции. Положительные результаты трепонемных и реже нетрепонемных тестов в этом случае могут свидетельствовать лишь о наличии сифилиса, но не нейросифилиса.

Триада H. Merritt [34], заключающаяся в получении положительной РМП, плеоцитоза и гиперпротеинархии в биопробе одного и того же пациента, свидетельствующая, по мнению авторов, о наличии нейросифилиса, не подтверждена нами в большинстве случаев [22, 32, 33].

В конце прошлого века выдвинули гипотезу о роли сывороточно-ликворного соотношения в диагностике нейросифилиса [35, 36]. Ее авторы установили, что при тех или иных заболеваниях (поражениях) нервной системы это соотношение, которое в норме составляет 1, т.е. одинаково, нарушается, при этом чем больше это неравенство, тем активнее патологический процесс. Наши предварительные исследования практически подтвердили эту гипотезу [22, 32, 33]. Ведется активная работа по оценке эффективности этой методологии (ITPA-индекс: intrathecal T. pallidum assay) как при постановке диагноза нейросифилиса, так и в качестве критерия излеченности — по снижению (или нормализации) величины сывороточно-ликворного соотношения после адекватной и успешной терапии. В результате исследований отмечена высокая эффективность ITPA-индекса по сравнению с регламентированными методами исследования: с помощью ITPA-индекса диагноз нейросифилиса подтвержден у всех пациентов с нейросифилисом; у 91% пациентов с вторичным, ранним и поздним скрытым и неуточненным сифилисом получены отрицательные результаты ITPA-индекса, что позволило усомниться в наличии у них диагноза нейросифилиса. Анализ результатов ITPA-индекса продемонстрировал возможность формирования нейросифилиса у пациентов не только с клиническим диагнозом нейросифилиса (асимптомный нейросифилис), но и с другими формами заболевания, что следует учитывать при ведении таких больных [37].

Впервые в Российской Федерации сотрудники Московского центра дерматовенерологии и косметологии и ЦНИИ эпидемиологии разработали пилотную тест-систему в формате иммуночипа для диагностики сифилиса и нейросифилиса, позволяющую одновременно выявлять реагиновые и трепонемоспецифические антитела к T. pallidum, в том числе в ликворе [22]. Эта методика продемонстрировала высокую чувствительность и специфичность при тестировании парных биопроб (ликвор — сыворотка), полученных от пациентов с установленным диагнозом нейросифилиса и от пациентов без нейросифилиса — 100% и 100% соответственно [38, 39]. Высокие показатели диагностической чувствительности и специфичности экспериментального иммуночипа при исследовании образцов сыворотки крови и ликвора, полученных от пациентов с установленным диагнозом нейросифилиса, свидетельствуют о том, что иммуночип, содержащий 4 рекомбинантных антигена T. pallidum (Тр17, Тр15, Тр47, TmpA), можно успешно применять в клинической практике. Взаимодействие антител, содержащихся в пробе биологического материала, полученной от пациента, одновременно с несколькими антигенами возбудителя в формате иммуночипа повышает точность диагностики и, вследствие высокой емкости иммуночипа, позволяет осуществлять одновременное обследование большого числа больных. Преимуществом диагностического теста в формате иммуночипа при выявлении антител к антигенам T. pallidum в сыворотке крови является возможность его применения как в скрининговых, так и в подтверждающих иммунохимических исследованиях, что в перспективе может позволить значительно снизить стоимость лабораторной диагностики нейросифилиса.

Помимо этого, при обследовании пациентов с нейросифилисом применили многофакторный (множественный, или многомерный) дискриминантный анализ. На основании полученных результатов разработан способ диагностики нейросифилиса путем исследования цереброспинальной жидкости (патент на изобретение №2699057, государственная регистрация 03.09.2019). Способ повышает точность и достоверность диагностики нейросифилиса в неясных случаях, особенно при получении противоречивых результатов различных методов исследования ЦСЖ, дает возможность выбора тактики ведения пациентов, в том числе определения объема проводимой терапии, прогноза для жизни пациентов и времени их снятия с учета благодаря использованию многофакторного дискриминантного анализа и применению ряда нерегламентированных в России методов исследования (VDRL, определение антител к антигенам T. pallidum с молекулярной массой 15, 17, 41 и 47 кД в формате иммуночипа).

Метод многомерного дискриминантного анализа при исследовании ЦСЖ можно рассматривать в качестве математической модели диагностики нейросифилиса [39].

Заключение

На основании данных литературы и результатов собственных исследований можно выделить следующие приоритеты использования прямых методов диагностики сифилиса:

— ТМП — до сих пор остается в арсенале методов прямой диагностики ранних форм сифилиса (первичного, вторичного) как достаточно простой и быстро выполняемый метод, несмотря на невысокую чувствительность, субъективизм и возможность получения как ложноположительных, так и ложноотрицательных результатов;

— ПЦР — для исследования генитальных язв при первичном сифилисе и отрицательных результатах серологических тестов, а также для исследования отделяемого эффлоресценций на слизистой оболочке полости рта и других локализаций, где возможна контаминация трепонемами-комменсалами.

При использовании методов серологической диагностики следует руководствоваться следующими рекомендациями:

— при установлении диагноза сифилиса следует применять комплекс трепонемных и нетрепонемных тестов (РПГА, РИФ и ее модификации, РИТ, ИФА, иммуноблоттинг; РМП, RPR, TRUST, USR, VDRL);

— при оценке эффективности специфической терапии следует использовать нетрепонемные тесты в полуколичественном варианте, позволяющие отслеживать динамику снижения титров антител к кардиолипиновому антигену; трепонемные тесты для этой цели применять нецелесообразно, так как у человека, перенесшего сифилис, они длительное время могут оставаться положительными;

— РИТ постепенно утрачивает свою актуальность как реакция-арбитр в связи со сложностью постановки и интерпретации результатов, длительностью, высокой стоимостью, необходимостью содержания вивария и еженедельной перевивки штаммов патогенной T. pallidum;

— РИФ до сих пор остается в арсенале методов серологической диагностики сифилиса как один из наиболее чувствительных и специфичных методов исследования, однако ее не применяют для скрининга ввиду трудоемкости и отсутствия возможности автоматизации;

— в качестве скрининговых и подтверждающих тестов на сифилис целесообразно шире использовать РПГА и ИФА;

— иммуноблоттинг, высокочувствительная и специфичная реакция, может быть использован в качестве подтверждающего теста; применять этот метод для скрининга нецелесообразно ввиду его относительной трудоемкости и высокой стоимости;

— можно считать доказанным преимущество VDRL перед другими нетрепонемными тестами (РМП, RPR), применяемыми в России при диагностике нейросифилиса;

— результаты научно-прикладных исследований ITPA-индекса (сывороточно-ликворного соотношения) свидетельствуют об эффективности данного подхода при установлении интратекального синтеза антител к T. pallidum и верификации диагноза нейросифилиса наряду с другими методами диагностики, и такие исследования, по нашему мнению, следует продолжить, в том числе с целью оценки критерия излеченности заболевания [37];

— использование инновационной технологии иммуночипов, а также многомерного дискриминантного анализа позволяет уточнить диагноз нейросифилиса, что определяет актуальность использования этих методологий при диагностике как сифилиса, так и нейросифилиса.

Участие авторов:

Концепция и дизайн — Г.А. Дмитриев, Е.С. Негашева, С.В. Ротанов

Написание текста — Г.А. Дмитриев, Н.В. Китаева

Редактирование — Н.В. Фриго, О.В. Доля

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Authors’ contributions:

The concept and design of the study — G.A. Dmitriev, E.S. Negasheva, S.V. Rotanov

Drafting the manuscript — G.A. Dmitriev, N.V. Kitaeva Revising the manuscript — N.V. Frigo, O.V. Dolya


1Преципита́ция (лат. praecipitatio — «стремительное падение») — формирование и осаждение из раствора комплекса растворимого молекулярного антигена (преципитиногена) с антителами (преципитинами) в виде помутнения, называемого преципитатом.

2Реакция флоккуляции: частный случай реакции преципитации, при которой мелкие частицы, находящиеся во взвешенном состоянии в жидкой или газовой среде, образуют рыхлые хлопьевидные скопления.

Подтверждение e-mail

На test@yandex.ru отправлено письмо со ссылкой для подтверждения e-mail. Перейдите по ссылке из письма, чтобы завершить регистрацию на сайте.

Подтверждение e-mail



Мы используем файлы cооkies для улучшения работы сайта. Оставаясь на нашем сайте, вы соглашаетесь с условиями использования файлов cооkies. Чтобы ознакомиться с нашими Положениями о конфиденциальности и об использовании файлов cookie, нажмите здесь.