Наиболее распространенным осложнением дентальной имплантации является воспаление по периметру имплантата - периимплантит [5, 7]. Последние годы ведутся исследования по изучению фармакологической активности препарата ксидифон, представляющего собой водный раствор этидроновой кислоты. Препарат оказывает антиоксидантное и противовоспалительное действие, является модулятором кислотно-основного состояния полости рта и препятствует образованию минерализованных зубных отложений [2, 6]. Присутствие в составе препарата органической кислоты позволило предположить, что данное вещество может также обладать и антимикробными свойствами, что сделало бы его универсальным (комплексным) средством профилактики воспаления в тканях периимплантатной области. В связи с этим целью настоящего исследования было экспериментально-клиническое обоснование эффективности применения препарата на основе этидроновой кислоты в качестве комплексного средства первичной профилактики воспалительно-деструктивных осложнений стоматологической имплантации.

В работе использовали коммерческий препарат ксидифон (20% водный раствор этидроновой кислоты) (ФГУП «Мосхимфармпрепараты»), а также ополаскиватели для полости рта, содержащие хлоргексидин (President профи) или триклозан (Colgate plax).

В качестве тест-культур использовали Staphylococcus epidermidis штамм 51-1, Ecsherichia coli штамм 18М, Pseudomonas aeruginosa ATSS 27853 и Candida albicans штамм 601 (коллекция кафедры микробиологии и иммунологии Нижегородской государственной медицинской академии). Бактерии культивировали на мясопептонном агаре, C. albicans - на агаре Сабуро (24 ч, 37°С). Суспензию микроорганизмов получали путем смыва культуры со скошенного агара забуференным физиологическим раствором (ЗФР) рН 7,2-7,4.

С целью обнаружения антимикробного действия в пробирки вносили по 1,9 мл раствора препарата с различными концентрациями этидроновой кислоты 10, 5, 3, 2% (терапевтическая концентрация, рекомендованная фирмой-производителем) или 1%.

В контроле использовали дистиллированную воду (растворитель). В каждую пробирку с соответствующим разведением и контролем добавляли по 0,1 мл взвеси тест-культур (конечная концентрация 5·10³ клеток в 1 мл). Пробы выдерживали при температуре 20°С в течение 5 мин, что соответствовало времени полоскания пациентами полости рта препаратом ксидифон. Затем 0,1 мл суспензии засевали на плотные питательные среды: желточно-солевой агар, среду Эндо и агар Сабуро (для культивирования S. epidermidis, E. сoli и C. albicans соответственно). Подсчитывали количество выросших колониеобразующих единиц (КОЕ) на чашках Петри после термостатирования (24 ч, 37°С). Для изучения минимальной ингибирующей и минимальной микробицидной концентрации [4] готовили разведения, содержащие 10, 5, 3, 2, 1% или 0,5% этидроновой кислоты на ЗФР.

Определяли жизнеспособность клеток буккального эпителия после воздействия терапевтических доз препарата ксидифон или хлоргексидин- и триклозансодержащих ополаскивателей. Для этого эпителиоциты, собранные с внутренней поверхности щеки здоровых доноров-добровольцев, трижды отмывали и взвешивали в ЗФР (режим центрифугирования 5 мин, 40 g). В пробирки, содержащие 0,5 мл исследуемых препаратов, добавляли 0,5 мл взвеси эпителиоцитов в ЗФР (10⁶ мл). В контроле вместо препаратов использовали дистиллированную воду. Пробы инкубировали 5 мин при 20°С, затем клетки дважды отмывали в ЗФР. Жизнеспособность эпителиоцитов после инкубации с препаратами оценивали по трипановому тесту. Для этого смешивали 0,1 мл клеточной взвеси с 0,1 мл 2% раствора трипанового синего, через 10 мин подсчитывали процент окрашенных (нежизнеспособных) клеток в камере Горяева. Все эксперименты ставили в 3 повторах.

Влияние препарата на колонизационную резистентность слизистых оболочек оценивали по изменению индекса естественной колонизации буккального эпителия (ИКБЭ) до и после курса лечения [1]. Буккальные эпителиоциты, полученные от пациентов, трижды отмывали и взвешивали в ЗФР. Из взвеси клеток делали мазок, фиксировали метанолом и окрашивали азуром А («Sigma», США). Учитывали средний показатель естественной колонизации буккальных эпителиоцитов после микроскопирования 100 клеток.

Эффективность препарата ксидифон как лечебно-профилактического средства при начальных признаках периимплантита проводили на базе МЛПУ «Стоматологическая поликлиника» Нижегородского района (Нижний Новгород). Под наблюдением находились 14 пациентов в возрасте от 24 до 53 лет, проходящих реабилитационный период стоматологической имплантации. Пациенты жалоб не предъявляли и были вызваны на осмотр в рамках диспансерного наблюдения. При клиническом обследовании осуществляли визуальный осмотр периимплантатной манжетки, зондирование, осторожную пальпацию с целью определения ее упругости и выявления областей аккумуляции экссудата. Гигиеническое состояние полости рта и периимплантатных областей оценивали на основании упрощенного индекса гигиены полости рта - ИГР-У (OHI-S) J. Green, J. Vermillion и предложенного С.В. Большаковым (2003) индекса гигиены супраконструкций - ИГск, выраженность воспаления десен в области искусственных коронок с опорой на дентальные имплантаты - в соответствии с критериями Silness-Loe Index (1967). После проведения профессиональных гигиенических мероприятий препарат на основе 2% раствора этидроновой кислоты (ксидифон) назначался в виде ротовых ванночек 2 раза в день после чистки зубов в течение 2 нед, время экспозиции - не менее 5 мин («Способ первичной профилактики воспалительно-деструктивных осложнений стоматологической имплантации». Положительное решение о выдаче патента РФ от 17.11.08 на заявку № 2007145631/15). Органолептические свойства препарата ксидифон оценивали на основании субъективных ощущений пациентов, используя анкетирование.

Было изучено действие этидроновой кислоты на типовые представители грамположительной и грамотрицательной нормальной бактериальной флоры человека и дрожжеподобные грибы рода Candida in vitro. Эксперименты показали выраженный дозозависимый бактерицидный эффект 1-10% раствора этидроновой кислоты в отношении всех исследуемых бактериальных тест-культур после непродолжительного (5 мин) контакта с ними (см. таблицу).

Таким образом, этидроновая кислота, взятая в терапевтической концентрации (2% раствор), оказывает выраженное антибактериальное и антифунгальное действие (положительное решение о выдаче патента РФ от 17.11.08 на заявку № 2007145631/15). Кроме того, в ряде экспериментов было показано, что минимальная ингибирующая концентрация раствора (1%) этидроновой кислоты всегда соответствовала минимальной бактерицидной (1%). Это позволило нам сделать вывод об отсутствия формирования резистентности микроорганизмов к действию данного вещества [3], что является несомненным преимуществом описанного способа обработки слизистых оболочек. Дополнительные эксперименты с тест-культурами S. epidermidis штамм 51-1, E. coli штамм 18М, C. albicans штамм 601, а также P. aeruginosa ATSS 27853 показали отсутствие достоверных различий в антибактериальной активности между терапевтической дозой этидроновой кислоты (ксидифон) и комплексными оральными антисептиками, содержащими хлоргексидин или триклозан (р>0,05) (данные не представлены).

Было проведено cравнительное иccледование цитотоксичности препарата на основе этидроновой кислоты (ксидифон), а также хлоргексидин- и триклозансодержащих ополаскивателей полости рта в отношении эпителиоцитов слизистой оболочки полости рта. Этидроновая кислота в рамках рекомендованной терапевтической концентраций (2%) не давала выраженный биоцидный эффект в отношении эпителиоцитов: процент жизнеспособных клеток в контроле составлял 100 и 87,4±10 - после инкубации с препаратом (р>0,05). В то же время обработка буккальных клеток хлоргексидин- и триклозансодержащими ополаскивателями приводила к существенному снижению количества жизнеспособных клеток эпителия: 10,0±5,03 и 18,8±4,16% соответственно (р<0,05).

На заключительном этапе была проведена клиническая оценка эффективности применения ксидифона у лиц с дентальными имплантатами (оценено состояние 43 имплантатов), проходящих реабилитационный период. При осмотре сформированной имплантоэпителиальной манжетки в 76,9% случаев выявлены начальные признаки периимплантита. После курса применения препарата ксидифон у больных со сформированной периимплантатной манжеткой купировались начальные признаки воспаления, улучшилось гигиеническое состояние имплантатов. Все пациенты (14 человек), проходившие курс лечения, не отмечали местного раздражающего действия или других побочных эффектов. Два человека отметили изменение вкусовой чувствительности и сухость в полости рта сразу после процедуры. Данные нежелательные эффекты не имели клинического значения, быстро купировались и не требовали отмены препарата.

Влияние препарата на микробиоценоз полости рта оценивали по изменению ИКБЭ на фоне приема препарата. Значения ИКБЭ у пациентов с начальными признаками периимплантита были в пределах или ниже границ нормы (8,71-10,4 бактерий/эпителиоцит; р>0,05), что свидетельствовало о некотором изменении уровня колонизационной резистентности слизистой рта при данной патологии [1]. Значения ИКБЭ после курса лечения всегда находились в пределах границ нормы (10,4-26,42 бактерий/эпителиоцит).

1. Этидроновая кислота в терапевтической концентрации (2%) дает выраженный антибактериальный эффект в отношении грамположительных, грамотрицательных бактерий, а также грибов рода Candida. Данный препарат имеет антимикробную активность, сопоставимую с действием оральных антисептиков на основе хлоргексидина и триклозана, но в отличие от них не оказывает цитотоксического действия на эпителиоциты полости рта.

2. Использование раствора этидроновой кислоты в терапевтической концентрации эффективно в клинике в качестве лечебно-профилактического средства развития периимплантитов, не имеет побочных клинически значимых эффектов и не нарушает микробиоценоз полости рта.